有關物質研究一直是藥物藥學研究和評價中的重點和難點。隨著我們對有關物質認識的不斷深入，對有關物質的技術要求也在不斷提高，其中對有關物質進行定性（鑒定）研究已經成為有關物質研究技術要求的重要組成部分，受到廣泛關注。但目前有關物質的定性研究仍然是國內有關物質研究中的薄弱環節，研究水平與國外先進國家相比有較大的差距，也限制了我國藥品研究水平和藥品質量提高，需要引起國內研發者的充分重視，主動進行深入研究，提高研究水平。

對藥物中的有關物質進行定性研究具有重要意義，通過對有關物質的定性研究，我們可以獲得有關物質的結構信息，分析其形成過程，合成時可設法避免該雜質的形成，或經純化使之降至可接受的水平。另外，還可以通過檢索毒性物質數據庫獲知該雜質的毒性數據，為其限度的確定提供有力的依據。同時，定性研究也是分析方法確定的重要參考，對貯藏條件的確定也有指導意義。如果不了解有關物質的結構，后續的研究將無法繼續進行。

對藥物中的有關物質進行定性分析也是我國藥品研發與國際接軌的需要。按照ICH Q3A/Q3B指導原則以及2005年SFDA《化學藥物雜質研究技術指導原則》的要求，對藥物中超過鑒定限度的有關物質皆應明確其來源，并推測可能的結構。我國的藥物研發要想與國際接軌，就必須在有關物質研究的完整性和規范性上符合相關的要求。

按照研究方法的不同，有關物質的定性研究可以分為理論推導法、直接測定法和間接測定法等，在實際的應用中，這幾種方法常常結合使用，相互印證。一般而言，由于有關物質的定性研究不能像原料藥的結構確證一樣提供全面的信息，因而需要盡可能采用多種方法（直接測定法例外），提供盡可能多的信息和證據，否則，有可能得到錯誤的結論。下面對幾種方法進行分別說明：

1、理論推導法

理論推導法是藥物化學家通過分析化合物的結構及其合成路線，推測可能產生的雜質。理論推導法是獲得有關物質定性分析的極為重要的手段，也可以給其他方法提供重要的指導。通過理論推導，我們可以對藥物的雜質類型有一個初步的了解，對于后續的測定非常有用，因此，理論推導法也可以稱為雜質譜分析。關于雜質譜分析，中心已有電子刊物進行了詳細說明。需要強調的是，由于理論推導大多需要研究者有較深厚的合成背景，因而需要質量分析人員與合成人員的密切配合，深入了解藥物的結構特定和詳細的合成路線。另外，由于理論推導需要對合成路線中所有的雜質進行分析，因此需要了解每一步反應。對于采用外購中間體進行一步或幾步反應得到的產品，由于缺乏必要的信息，對于有關物質的定性研究十分不利，因此一般不建議采用這種合成方法。

理論推導法可以采用以下幾種方式：

（1）分析起始原料中可能存在的雜質

起始原料對于藥物中的雜質譜的種類具有決定作用，通過對起始原料中雜質的分析，可以推測部分中間體及終產物中可能存在雜質的結構。例如：苯環衍生物的4-位鹵化物中常會混有1-位鹵化物，以其為起始原料則終產品中可能會生成1-位鹵代的副產物。如氟哌啶醇結構為4-氟產物，通過對其起始原料的分析推測1-氟取代物是其可能的有關物質之一。

（2）分析中間體雜質

化學反應一般不可能實現100％的轉化，上一步反應的原料就可能成為后續反應乃至終產品中的雜質。例如：鹽酸普魯卡因的合成，由于還原反應的不徹底，硝基卡因混入后續步驟中，最后成為終產品中的一個主要雜質。

（3）分析副反應及副反應產物

化學反應往往會存在副反應，因此分析可能的副反應路線，就可以推測某些雜質的形成途徑。分析副反應及副反應產物是推測終產品中雜質類型和結構的最為重要的途徑之一。例如：如在某結構中引入反式雙鍵，如果采用Wittig反應，則可能會產生一定量的順式產物，該順式產物及其后續衍生物即成為終產品中可能存在的有關物質。

（4）推測降解產物

通過對藥物本身的性質的分析可以推測可能的降解產物。通過對藥物中的不穩定基團和活潑基團進行分析，可以初步推測藥物的降解途徑和降解產物。如常見的酯鍵（包括內酯）、酰胺鍵（包括內酰胺）、季銨鍵等不穩定結構以及酚羥基、噻吩基、吡啶基、醛基等活潑基團都容易生成降解物。例如：二肽藥物甘氨酰-谷氨酰胺，在水溶液中易發生環合反應生成環-（甘氨酰-谷氨酰胺），酰胺鍵水解后生成的谷氨酸還可能會生成雜質焦谷氨酸，這些雜質都是質控研究的重點。再如：阿曲庫銨結構中有酯鍵和季銨機構，通過分析其機構即可預測酯水解產物和Hofmann消除反應產物是其主要的有關物質，需要進行相應的控制。

2、直接測定法

理論推導法是有關物質定性研究的重要途徑，通過對化合物結構和合成路線的深入分析，可以為后續的研究提供非常重要的信息，起到事半功倍的效果。但理論推導法僅僅是對藥物中可能存在的有關物質結構的預測，有關物質的結構最終還是需要通過一系列的試驗測定來確定。測定方法可分為直接測定法和間接測定法。

直接測定法是直接從藥物中分離得到特定雜質，然后再像原料藥結構確證一樣通過四譜分析來確定有關物質的結構。直接測定法是確定有關物質結構的最直觀、最有效的手段，其優點是準確，提供的證據充分，如有可能應盡可能進行直接測定。但直接測定法的缺點是：費時費力，當藥物中的雜質種類較多、性質接近時，會給雜質的分離純化工作帶來較大困難，而且當雜質的量較小時難以獲得充足的樣品進行測定。

有關物質的獲得可通過制備HPLC法獲得，還可通過制備TLC法獲得，當有關物質的量較大或與主成分分離情況較好時，還可以采用柱分離的方法或改變結晶條件的方法獲得。

可以探索通過各種強制降解試驗刻意增加某些雜質的量，也可在合成研究中模擬最差工藝條件進行合成，以獲得盡可能多的雜質進行下一步的研究工作。

3、間接測定法

直接測定法適用于雜質的量較大時進行測定，當樣品中的雜質量較小，且雜質的分離較為困難時，可以通過間接測定法確定雜質的結構。需要指出的是：由于間接測定只能提供雜質的部分信息，因而需要至少2種以上的間接證據，并與理論推導法進行結合才能初步確定化合物的結果，其結構的最終確定仍需要富集一定量的雜質進行直接測定。間接測定有以下幾種方法：

（1）HPLC峰保留時間對比法

HPLC峰保留時間對比法對有關物質的研究具有重要的意義。在雜質量很小的情況下，我們首先可以推測有關物質的可能結構，然后取預測的已知化合物與取含雜質的藥物，在同樣的色譜條件下看已知化合物與該雜質的保留時間是否一致。也可以取已知化合物添加入含雜質的藥物中，在擬確定雜質的峰面積是否有變化。

HPLC峰保留時間法的另一個重要作用是“作標記”，當新藥的臨床前研究中顯示某特定雜質在多批樣品中固定出現，且在HPLC圖譜中位置相對固定，但尚不能完全確定其結構時，可將其作為“特定的未知雜質”，在質量標準中用相當保留時間（RRT）表示該雜質的情況，進行后續的毒理學研究和臨床研究，不影響該藥物的研發向前推進。待積累多批樣品的數據和一定量的樣品后再進行定性研究。

（2）UV法

UV法是利用二極管陣列檢測器，觀察擬定性有關物質的紫外吸收情況，并測定該雜質的最大吸收和最小吸收的數據，初步確定該雜質結構中可能存在的官能團，也可以與已知化合物進行紫外吸收情況的對比，為有關物質結構的最終確定提供有用信息。

（3）LC-MS/GC-MS法

 液質聯用（LC-MS）和氣質聯用（GC-MS）是在不得到純的雜質的情況下獲得的該雜質的質譜信息。LC-MS/GC-MS是獲得雜質信息的有效手段，也為定性分析提供較為可信的證據。通過LC-MS/GC-MS，我們可以獲得各個雜質的可能分子量，或進一步通過二級質譜獲得各雜質的裂解情況，為解析化合物的結構提供直接證據。

（4）其他新方法

目前國外還有LC-IR和LC-HMR等聯用技術，在不分離雜質的情況下可以在線獲得雜質的IR圖譜甚至是核磁共振圖譜，獲得與直接測定法相近的效果，這些聯用技術具有方便、快捷、高效、準確的特點，是有關物質定性研究的理想方法。目前LC-IR或LC-HMR儀器的使用還不普及，測定方法也有待完善。但由于在線聯用技術的極大優勢，可能成為將來有關物質定性研究的主流方法。