問題:固相萃取(SPE) 是一種經典的前處理方法, 如何使用固相萃取小柱?
解答:具體要看萃取小柱的使用說明以及須過固相萃取小柱樣品的性質:
1.一般采用正己烷+丙酮來活化,用真空或用注射器給一個壓力,趕走柱內的氣泡。
2.然后用弱的溶劑來平衡,一般采用水或緩沖液。
3.上樣,注意這步的流速不能太大,否則樣品沒有和填料充分交換,會影響回收率的。
4.以上幾步需注意溶液的液面,不能抽干。
5.洗雜質:根據樣品的性質,洗脫溶劑的強度和pH的選擇應是保證能盡可能的洗去雜質而不會洗下樣品為好。可以做一下洗脫曲線,找到最佳的溶劑。
6.洗脫樣品:可以選擇相對較強的溶劑,保證樣品能充分洗脫下來,收集洗脫液,我們一般采用純甲醇或乙腈,若需富集的話,可以揮干后再進樣。
洗脫劑的選擇:選擇洗雜質的溶劑時,可多選擇幾個有機相和水相的比例,幾個pH值的溶劑來洗脫,比較樣品回收率和雜質峰大小,權衡一下,選擇合適的比例。雜質多的話,可以先用一定濃度的有機溶劑沉淀一下蛋白,上清再上樣,但是要注意加入有機溶劑的比例,保證上樣后不會被直接洗脫。