皮膚刺激性/腐蝕性試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則
（征求意見稿）
一、概述
皮膚刺激性/腐蝕性試驗(yàn)是確定和評(píng)價(jià)受試物對(duì)哺乳動(dòng)物皮膚局部是否有刺激作用或腐蝕作用及其程度的試驗(yàn)。
本指導(dǎo)原則依據(jù)《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》《化妝品注冊(cè)和備案檢驗(yàn)工作規(guī)范》《化妝品注冊(cè)備案資料管理規(guī)定》《化妝品新原料注冊(cè)備案資料管理規(guī)定》等相關(guān)要求，并參考國(guó)內(nèi)外相關(guān)指南制定。
本指導(dǎo)原則適用于化妝品和新原料的皮膚刺激性/腐蝕性及其程度的評(píng)價(jià)及安全評(píng)估。
本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)以及當(dāng)前科學(xué)認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的更新完善，以及科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。
二、基本原則
本指導(dǎo)原則僅闡述皮膚刺激性/腐蝕性試驗(yàn)需要重點(diǎn)關(guān)注的問題，試驗(yàn)時(shí)需具體情況具體分析。
皮膚刺激性/腐蝕性試驗(yàn)的設(shè)計(jì)應(yīng)符合毒理學(xué)試驗(yàn)隨機(jī)、對(duì)照、重復(fù)的基本原則，試驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)真實(shí)、完整、準(zhǔn)確、可追溯，試驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)科學(xué)合理。
如果實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在試驗(yàn)的任何階段出現(xiàn)嚴(yán)重抑郁、痛苦的表現(xiàn)，應(yīng)當(dāng)給予人道處死。
三、基本內(nèi)容
將受試物一次（或多次）涂敷于受試動(dòng)物的皮膚上，在規(guī)定的時(shí)間間隔內(nèi)，觀察動(dòng)物皮膚局部刺激作用的程度并進(jìn)行評(píng)分。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)管理和使用
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物應(yīng)為健康、成年、皮膚無損傷的哺乳動(dòng)物，首選白色家兔。雌雄均可，雌性動(dòng)物應(yīng)為未孕及未曾產(chǎn)仔的。
試驗(yàn)一般至少需要4只動(dòng)物，如需進(jìn)一步解釋可疑實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可增加動(dòng)物數(shù)。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、飼養(yǎng)設(shè)施及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)符合國(guó)家相應(yīng)規(guī)定。動(dòng)物應(yīng)單籠飼養(yǎng)，試驗(yàn)前進(jìn)行檢疫并使動(dòng)物適應(yīng)環(huán)境。給予實(shí)驗(yàn)動(dòng)物常規(guī)飼料喂養(yǎng)，自由飲水，室內(nèi)光照條件應(yīng)保持12小時(shí)明暗交替。
受試物
若受試物為液體，一般不做稀釋，直接使用原液。若受試物為固體，應(yīng)制備為細(xì)粉狀，并用水或其它無刺激性溶劑將其充分濕潤(rùn)，以保證受試物與皮膚有良好的接觸；若使用其他溶劑潤(rùn)濕受試物，應(yīng)考慮溶劑是否會(huì)對(duì)受試物的皮膚刺激性產(chǎn)生影響。若產(chǎn)品的使用方法是需要稀釋后使用，應(yīng)先進(jìn)行產(chǎn)品原型的皮膚刺激性/腐蝕性試驗(yàn)，如果試驗(yàn)結(jié)果顯示皮膚刺激性結(jié)果為中度以上，可選用合適的溶劑按使用濃度進(jìn)一步稀釋后，檢測(cè)其皮膚刺激性/腐蝕性試驗(yàn)，并設(shè)置溶劑對(duì)照。
試驗(yàn)時(shí)應(yīng)按照產(chǎn)品實(shí)際使用方法配制受試物，并明確配制方法和使用濃度。
若預(yù)判受試物可能引起嚴(yán)重刺激或腐蝕作用，可先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，一般采取分段試驗(yàn)法，考察受試物是否會(huì)在3分鐘、60分鐘和4小時(shí)中任何一個(gè)時(shí)間點(diǎn)，出現(xiàn)皮膚腐蝕作用。當(dāng)皮膚涂敷受試物的部位，在以上任何一個(gè)時(shí)間點(diǎn)出現(xiàn)嚴(yán)重皮膚刺激或腐蝕作用，不再進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。
此外，以下情況可不進(jìn)行皮膚刺激試驗(yàn)：
受試物為強(qiáng)酸或強(qiáng)堿（pH值≤2或≥11.5）；
受試物有很強(qiáng)的經(jīng)皮吸收毒性，經(jīng)皮LD50＜200 mg/kg；
受試物在急性經(jīng)皮毒性試驗(yàn)中，劑量達(dá)2000 mg/kg時(shí)仍未出現(xiàn)皮膚刺激性作用。
對(duì)于化妝品新原料，應(yīng)根據(jù)原料的溶解性選擇適宜的溶劑進(jìn)行潤(rùn)濕或稀釋配制，并設(shè)陰性對(duì)照。
各組別的給予方式和劑量
備皮：試驗(yàn)前約24小時(shí)將動(dòng)物背部脊柱左右兩側(cè)毛剪掉約3 cm×3 cm范圍，不可損傷表皮。
受試物區(qū)：一般取受試物樣品0.5 mL（g）均勻涂布于受試部位，涂抹面積為2.5 cm×2.5 cm。若受試物樣本難以獲得，用量可適當(dāng)減少。
對(duì)照區(qū)：試驗(yàn)采用自身對(duì)照，以科學(xué)評(píng)判受試物對(duì)皮膚的刺激作用。當(dāng)受試物使用無刺激性溶劑配制時(shí)，于涂抹受試物的皮膚另一側(cè)涂抹溶劑作為對(duì)照。
為保證試驗(yàn)的一致性，涂布面積應(yīng)盡量相等。
給予方式：采用封閉試驗(yàn)，敷用時(shí)間一般為4小時(shí)，一次/每次敷用結(jié)束后用溫水或無刺激性溶劑清除殘留受試物。對(duì)于化妝品產(chǎn)品，可根據(jù)人體實(shí)際使用情況和產(chǎn)品類型延長(zhǎng)或縮短敷用時(shí)間。用后沖洗的化妝品產(chǎn)品，可僅敷用2小時(shí)。
急性皮膚刺激性試驗(yàn)僅給予受試物1次；多次皮膚刺激性試驗(yàn)為每天涂抹1次，連續(xù)涂抹14天。
四、結(jié)果分析與評(píng)價(jià)
結(jié)果觀察與分析
急性皮膚刺激性試驗(yàn)：清除受試物后1、24、48和72小時(shí)觀察涂抹部位皮膚反應(yīng)，72小時(shí)仍未觀察到刺激反應(yīng)或刺激反應(yīng)完全恢復(fù)，即可停止觀察。在皮膚涂敷部位出現(xiàn)刺激反應(yīng)且未恢復(fù)之前，應(yīng)每天繼續(xù)觀察，觀察時(shí)間應(yīng)延長(zhǎng)至足以觀察到可逆或不可逆刺激作用的全過程，一般不超過14天。按《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》中的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)受試物區(qū)和對(duì)照區(qū)進(jìn)行皮膚評(píng)分并記錄，皮膚反應(yīng)主要分為紅斑和焦痂形成，以及水腫形成兩種表現(xiàn)。當(dāng)皮膚涂敷部位出現(xiàn)嚴(yán)重紅斑（紫紅色）至輕微焦痂形成或重度水腫（皮膚隆起超過1 mm，范圍擴(kuò)大）時(shí)，均分別記4分；當(dāng)出現(xiàn)中度至重度紅斑或中度水腫（皮膚隆起約1 mm）時(shí)，均分別記3分；當(dāng)出現(xiàn)明顯紅斑或輕度水腫（皮膚隆起輪廓清楚）時(shí)，均分別記2分；當(dāng)輕微紅斑或水腫（勉強(qiáng)可見）時(shí)，均分別記1分；最終以受試動(dòng)物積分的平均值進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。
根據(jù)24、48和72小時(shí)三個(gè)觀察時(shí)間點(diǎn)之中最高積分均值，按《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》中的標(biāo)準(zhǔn)判定皮膚刺激強(qiáng)度，積分均值為6.0~8.0時(shí)，結(jié)果為強(qiáng)刺激性；積分均值為2.0~＜6.0時(shí)，結(jié)果為中刺激性；積分均值為0.5~＜2.0時(shí)，結(jié)果為輕刺激性；積分均值為0~＜0.5時(shí)，結(jié)果為無刺激性。
2. 多次皮膚刺激性試驗(yàn)：清除受試物后1小時(shí)觀察局部皮膚反應(yīng)，按《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》中的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分并記錄，皮膚刺激反應(yīng)的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)同“急性皮膚刺激性試驗(yàn)”。按照下列公式計(jì)算每天每只動(dòng)物平均積分，按《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》中的標(biāo)準(zhǔn)判定刺激強(qiáng)度，皮膚刺激強(qiáng)度的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)同“急性皮膚刺激性試驗(yàn)”。
每天每只動(dòng)物平均積分=((∑?紅斑和水腫積分)/受試動(dòng)物數(shù))⁄14
3. 需注意的是，兩項(xiàng)試驗(yàn)中，觀察時(shí)間點(diǎn)為1小時(shí)的積分不計(jì)算在內(nèi)。
結(jié)果解釋
1. 急性皮膚刺激性試驗(yàn)結(jié)果從動(dòng)物外推到人的可靠性有限；
2. 白色家兔在大多數(shù)情況下對(duì)有刺激性或腐蝕性的物質(zhì)較人類敏感。若用其它品系動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)也得到類似結(jié)果，則會(huì)增加從動(dòng)物外推到人的可能性。
3. 當(dāng)試驗(yàn)出現(xiàn)非預(yù)期結(jié)果或可疑結(jié)果時(shí)，則需追加動(dòng)物進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)。
結(jié)果評(píng)價(jià)
化妝品產(chǎn)品的急性皮膚刺激性試驗(yàn)和多次皮膚刺激性試驗(yàn)結(jié)果一般不得有明顯的刺激性和腐蝕性，即皮膚刺激強(qiáng)度為輕刺激性及以下（積分均值＜2.0）。
嬰幼兒和兒童用產(chǎn)品從嚴(yán)要求，其皮膚刺激性試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)為無刺激性（積分均值＜0.5）。
五、參考文獻(xiàn)
1. 國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.化妝品安全技術(shù)規(guī)范.(2015.12)
2. OECD. OECD Guideline for the testing of chemicals: Acute dermal irritation/corrosion (404).(2015.7)
3. 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部. 中華人民共和國(guó)國(guó)家職業(yè)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn) 化學(xué)品毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序和試驗(yàn)方法 第6部分：急性 皮膚刺激性/腐蝕性試驗(yàn): GBZ/T 240.6-2011. (2011.8)
六、術(shù)語和釋義
（一）皮膚刺激性（Dermal irritation）：
皮膚涂敷受試物后局部產(chǎn)生的可逆性炎性變化。
（二）皮膚腐蝕性（Dermal corrosion）：
皮膚涂敷受試物后局部引起的不可逆性組織損傷
七、附錄
可參考《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》中收錄的“皮膚刺激性/腐蝕性試驗(yàn)”方法。
