制藥企業(yè)為避免污染后續(xù)藥物產(chǎn)品，在生產(chǎn)前必須進(jìn)行充分的清洗清潔，證明針對(duì)特定設(shè)備和產(chǎn)品的清洗程序，能有效地去除設(shè)備內(nèi)表面所生產(chǎn)的產(chǎn)品殘留和清洗劑殘留，清洗后的產(chǎn)品殘留符合規(guī)定的可接受標(biāo)準(zhǔn)，使后續(xù)生產(chǎn)的產(chǎn)品不會(huì)受到污染而危害患者的安全。筆者對(duì)影響清潔驗(yàn)證的因素進(jìn)行匯總和討論。
1、清潔驗(yàn)證的前提條件確認(rèn)
在執(zhí)行清潔后的驗(yàn)證取樣測(cè)試前，應(yīng)首先確認(rèn)下列項(xiàng)目已完成
（1）設(shè)備清洗程序確定
根據(jù)產(chǎn)品特性和設(shè)備參數(shù)，設(shè)定相關(guān)設(shè)備產(chǎn)品生產(chǎn)后的清洗程序，進(jìn)行清洗，包括下列關(guān)鍵參數(shù)：
（2）產(chǎn)品殘留分析方法確認(rèn)
相關(guān)產(chǎn)品的殘留檢測(cè)分析方法已驗(yàn)證完成，可以用于產(chǎn)品殘留的檢測(cè)。用于檢測(cè)殘留或污染物的分析方法應(yīng)對(duì)被分析的物質(zhì)特定有效，具備靈敏性，能夠反映以計(jì)算出的合格限度為基礎(chǔ)的清洗程序的可接受性。
（3）擦拭取樣回收率試驗(yàn)
根據(jù)相關(guān)產(chǎn)品殘留限度的計(jì)算結(jié)果，配制與計(jì)算的殘留限度濃度接近的產(chǎn)品溶液，選擇與需要清洗的設(shè)備內(nèi)表面相同的材質(zhì)樣片，相同的取樣工器具和溶解試劑，使用相同的取樣方法，進(jìn)行回收率研究。
2、清潔驗(yàn)證的方法確定
（1）為簡(jiǎn)化清洗驗(yàn)證研究，根據(jù)適當(dāng)?shù)脑瓌t，將相同或類似的設(shè)備和產(chǎn)品進(jìn)行分類或分組，在許多相似種類中選擇一個(gè)產(chǎn)品或設(shè)備進(jìn)行清洗驗(yàn)證。
（2）產(chǎn)品選擇：可綜合考慮產(chǎn)品在水中的溶解度、清潔劑、日治療劑量、半數(shù)致死量、生產(chǎn)批量進(jìn)行選擇。
（3）設(shè)備相關(guān)最差條件
如果設(shè)備中產(chǎn)品接觸表面是由相同材質(zhì)（例如不銹鋼）制成，并且設(shè)備設(shè)計(jì)、操作原理、型號(hào)和清洗程序類似，可進(jìn)行設(shè)備分組，選擇有代表性的設(shè)備進(jìn)行清洗驗(yàn)證測(cè)試。
設(shè)備分組標(biāo)準(zhǔn)如下：
（1）相同的，可互換的，并采用同一清潔程序的設(shè)備可以歸為一類；
（2）采用同一操作原理和相同清洗程序的設(shè)備，但是產(chǎn)品接觸表面面積不同，如果它們可以互換，可歸為一類。
由于批量最大的產(chǎn)品在最大設(shè)備中加工，因此最大表面積的設(shè)備視為最難清洗情況，選定進(jìn)行清洗驗(yàn)證的設(shè)備后，需確認(rèn)該設(shè)備上最難清洗的部位。結(jié)合需要進(jìn)行清洗的設(shè)備（與產(chǎn)品直接接觸的設(shè)備）及設(shè)備主要參數(shù)，如表面積等，針對(duì)設(shè)備的最難制定相應(yīng)的取樣方式。
3、清潔驗(yàn)證的檢測(cè)方法及殘留限度
（1）殘留限度計(jì)算
應(yīng)參考相關(guān)驗(yàn)證指南，可基于以下兩種方法來(lái)設(shè)立清洗驗(yàn)證的可接受標(biāo)準(zhǔn)。
10ppm標(biāo)準(zhǔn)（任何產(chǎn)品中，前一產(chǎn)品活性成分的最大污染水平不超過(guò)10ppm濃度）及基于毒理的計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)。
（2）檢測(cè)方法及限度確定
基于產(chǎn)品特性采用合適的檢測(cè)方法作為清潔驗(yàn)證的檢測(cè)方法，限度選用最嚴(yán)格的殘留限度。
4、取樣方法及取樣點(diǎn)位置
（1）擦拭取樣
擦拭吸收能力：用于擦拭的拭子須有充分的溶劑吸收能力，能夠被濕潤(rùn)或滲透，可以溶解殘留物。
擦拭干擾：應(yīng)使用合適的拭子作為擦拭材料。擦拭萃取使用的溶劑應(yīng)是取樣和分析測(cè)試時(shí)使用的溶劑。溶劑從擦拭中萃取的物質(zhì)，不能干擾所采用的檢測(cè)方法。通過(guò)擦拭回收率研究，確定擦拭從取樣表面定量移除污染物的能力。
取樣方法：清洗程序結(jié)束后，分別使用溶劑濕潤(rùn)的拭子擦拭先前已確定的部位，每個(gè)取樣部位的擦拭取樣面積約100cm2，然后將該拭子溶解在已知體積的提取溶劑（如注射用水）內(nèi)，檢測(cè)殘留量。
（2）淋洗水取樣
取樣方法：清洗程序結(jié)束后按照檢測(cè)項(xiàng)依次進(jìn)行取樣送檢。
5、清潔驗(yàn)證失敗影響因素分析
清洗方法和清潔驗(yàn)證可以從相關(guān)的工藝系統(tǒng)知識(shí)，污染物和設(shè)備清潔輔助系統(tǒng)中根據(jù)驗(yàn)證指南要求進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估認(rèn)。這些系統(tǒng)要進(jìn)行設(shè)計(jì)審核，然后根據(jù)相關(guān)的可接受標(biāo)準(zhǔn)確認(rèn)，證明已經(jīng)達(dá)到要求。在清潔驗(yàn)證執(zhí)行的過(guò)程中，有很多影響清潔驗(yàn)證不成功的因素，每個(gè)因素都存在著不同的潛在的風(fēng)險(xiǎn)，必須對(duì)每個(gè)因素進(jìn)行充分的分析、評(píng)估，確保清潔驗(yàn)證順利地進(jìn)行。
（1）清潔程序不夠徹底：清潔程序沒有充分清潔表面上的污垢和細(xì)菌，導(dǎo)致驗(yàn)證失敗。
（2）清潔劑不合適：選擇的清潔劑可能不夠強(qiáng)效或不適合該設(shè)備，無(wú)法清除表面的污垢和細(xì)菌。
（3）清潔程序不正確：清潔程序的步驟或時(shí)長(zhǎng)可能不夠徹底或不正確，無(wú)法清潔表面上的污垢和細(xì)菌。
（4）操作不當(dāng)：清潔操作者可能沒有按照清潔程序的要求正確執(zhí)行清潔，導(dǎo)致清潔效果不理想。
（5）清潔驗(yàn)證方法不準(zhǔn)確：清潔驗(yàn)證的方法可能不夠準(zhǔn)確或不適用于該設(shè)備，導(dǎo)致驗(yàn)證失敗。
（6）設(shè)備本身存在問題：設(shè)備本身可能存在污垢、損壞或故障等問題，導(dǎo)致無(wú)法達(dá)到清潔驗(yàn)證的要求。
（7）其他因素：例如環(huán)境條件、人員操作水平等也可能影響清潔驗(yàn)證的結(jié)果。
6、 實(shí)例分析：
（1）重視清潔驗(yàn)證取樣器具的污染風(fēng)險(xiǎn)
某企業(yè)清潔驗(yàn)證結(jié)果經(jīng)常發(fā)現(xiàn)微生物限度超標(biāo)，甚至清洗6次才符合規(guī)定。經(jīng)過(guò)排查，取樣器具放入桶中，從QC實(shí)驗(yàn)室轉(zhuǎn)運(yùn)至車間取樣房間。需進(jìn)入C級(jí)的，由C級(jí)傳遞窗紫外燈照射30分鐘后備用；進(jìn)入B級(jí)的，完成C級(jí)傳遞窗紫外燈照射30分鐘后，再進(jìn)入B級(jí)傳遞窗紫外燈照射30分鐘備用。取樣容器進(jìn)入對(duì)應(yīng)區(qū)域后，驗(yàn)證人員打開C級(jí)清洗水池處注射用水閥門，放水1分鐘，然后用注射用水涮洗取樣容器（瓶身、瓶蓋、錫紙?zhí)帯⒕呷逑矗辛鞒汰h(huán)節(jié)均無(wú)異常，最后經(jīng)多次排查發(fā)現(xiàn)微生物限度取樣瓶的滅菌存放時(shí)限制定過(guò)長(zhǎng)，極易導(dǎo)致微生物限度污染，因此導(dǎo)致清潔驗(yàn)證結(jié)果的微生物限度頻繁超標(biāo)。
（2）重視殘留物的清潔分析方法開發(fā)
在實(shí)際清潔過(guò)程綜合產(chǎn)品的溶解性選擇合適的分析方法，是清潔驗(yàn)證成功的前提。清潔后的場(chǎng)地和設(shè)備可能存在多種殘留物，往往選擇毒性最強(qiáng)或者最難清潔的殘留物作為清潔驗(yàn)證中要清潔的目標(biāo)，其限度作為清潔驗(yàn)證程度的重要指標(biāo)。根據(jù)產(chǎn)品的特性選擇合適的檢測(cè)方法，按照《中國(guó)藥典》附錄9101 的規(guī)定參照“雜質(zhì)測(cè)定”定量或限度的方法進(jìn)行驗(yàn)證，涵蓋準(zhǔn)確性、精密度、專屬性、線性和范圍，及定量限、檢測(cè)限內(nèi)容。涉及到藥典方法如細(xì)菌內(nèi)毒素、微生物限度檢驗(yàn)方法，需要確認(rèn)方法適用性，不需要進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。企業(yè)常用的清潔驗(yàn)證分析方法有高效液相色譜法(HPLC)、薄層色譜法(TLC)、紫外分光光度法(UV)、總有機(jī)碳(TOC)檢測(cè)法、電泳分析法、pH值和電導(dǎo)率檢測(cè)法等。高效液相色譜法(HPLC)具有專屬性高、靈敏度高、檢出限低等特點(diǎn)。對(duì)于組分明確品種來(lái)說(shuō)，基本能反映清潔效果。但檢測(cè)所用設(shè)備、對(duì)照品等成本較為昂貴，可能分析時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)。薄層色譜法(TLC)具有專屬性高、靈敏度高、可定量的優(yōu)點(diǎn)。但終點(diǎn)目視無(wú)法定量，且樣品制備時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)。紫外分光光度法(UV)專屬性較高，靈敏度高；但無(wú)法定量檢測(cè)。總有機(jī)碳(TOC)檢測(cè)法可在線監(jiān)測(cè)測(cè)定包括水溶性物質(zhì)在內(nèi)的有機(jī)物殘留，樣品可快速周轉(zhuǎn)，是企業(yè)清潔驗(yàn)證中較常用的方法，但僅適用水溶性樣品，且專屬性較差。電泳分析法對(duì)生物藥品有專屬性，檢測(cè)靈敏度高；但存在檢測(cè)成本昂貴、不能處理變性蛋白質(zhì)、樣品周轉(zhuǎn)時(shí)間長(zhǎng)的不足。
做好清潔驗(yàn)證至關(guān)重要，企業(yè)必須合理選擇清潔驗(yàn)證的目標(biāo)產(chǎn)品、選擇合適的清潔劑、選出合適的檢測(cè)方法（專屬性與非專屬性均可）。選出清潔驗(yàn)證目標(biāo)產(chǎn)品，可有效減少清潔驗(yàn)證工作量；選出合適的清潔劑，可高效且節(jié)省成本的達(dá)到清洗目的；選出合適的檢測(cè)方法，如專屬性與非專屬性的方法分別適用于不同的工藝與設(shè)備；選出取樣點(diǎn)位置并選擇合理的取樣方法，可高效的開展清潔驗(yàn)證。企業(yè)在此基礎(chǔ)上可進(jìn)一步提高清潔驗(yàn)證效率，減少清潔驗(yàn)證工作量，進(jìn)一步降低成本、提升企業(yè)生產(chǎn)效率。
