無菌室空白驗(yàn)證長菌落了，是不是無菌室滅菌不徹底啊！我們的無菌室應(yīng)該用什么方式滅菌？等等。無菌室作為我們微生物檢測的空間，一旦出現(xiàn)這種情況大家都會(huì)感到擔(dān)憂，會(huì)有疑問：在這樣的環(huán)境里檢測，結(jié)果能準(zhǔn)確嗎？

首先我們應(yīng)該了解我們的無菌室應(yīng)該處于什么狀態(tài)，有什么要求。

一般情況下，我們的無菌室達(dá)到空間潔凈度10000級就可以了，但操作區(qū)域例如超凈工作臺、生物安全柜里需要達(dá)到潔凈度100級，也就是我們常說的“整體萬級，局部百級”。

萬級潔凈度對空間落菌的要求是：靜態(tài)檢測，自然沉降菌≤3CFU/皿，百級潔凈度對空間落菌的要求是：靜態(tài)檢測，自然沉降菌≤1CFU/皿。也就是說平時(shí)我們做的空間驗(yàn)證，只要不超過這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)，就是符合要求的，因此也不必太過擔(dān)憂。

那么，怎樣能夠保證我們的無菌室符合要求？當(dāng)我們的無菌室出現(xiàn)異常應(yīng)該如何處理？

我們得先從無菌室的滅菌方式開始講。一般無菌室的滅菌方式分為：紫外線照射、臭氧滅菌、化學(xué)熏蒸這幾種。這幾種滅菌方式各自有各自的特點(diǎn)，大家可以根據(jù)自己的實(shí)際情況來選擇合適的滅菌方式，遇到異常難以解決時(shí)，也可以考慮增加一種滅菌方式來解決。

紫外線照射：紫外線滅菌是利用適當(dāng)波長的紫外線破壞微生物機(jī)體細(xì)胞中的DNA或RNA結(jié)構(gòu)，造成生長性細(xì)胞死亡來達(dá)到滅菌效果，屬于一種物理方式的滅菌，也是我們微生物檢測無菌室最常用的滅菌方式。該方法操作簡單，使用方便，也比較經(jīng)濟(jì)，可以殺滅各種微生物，包括細(xì)菌、病毒、真菌、立克次體以及支原體等，因此在實(shí)驗(yàn)室里，是最常見的滅菌方式。

但紫外線滅菌也有一定的缺點(diǎn)，紫外線只能對直接照射到的微生物起到殺滅作用，因此只能對空間中照射到的地方起作用，一些照射不到的死角或者物品的內(nèi)部是無法達(dá)到效果的，因此使用紫外線滅菌的無菌室，也會(huì)輔助以一些化學(xué)試劑，例如潔爾滅、酒精等消毒劑對死角進(jìn)行清理。使用紫外線滅菌，應(yīng)當(dāng)定期檢測紫外線的強(qiáng)度，若是無法達(dá)到要求的強(qiáng)度，就應(yīng)該考慮更換紫外燈。根據(jù)2002年國家衛(wèi)生部發(fā)布的《消毒技術(shù)規(guī)范》，紫外燈的要求是紫外線強(qiáng)度不得低于70μW/cm2（紫外燈1m處），而空間內(nèi)的紫外燈的布局也是有要求的，要求平均每m3不少于 1.5W。也就是說，假如你無菌室是5m2，實(shí)驗(yàn)室高度是3米，那么你的空間體積就是15m3，你空間中使用的紫外燈的功率就不得低于22.5w。按照這個(gè)方式就可以算一下你的無菌室需要多少紫外燈了。當(dāng)紫外線的強(qiáng)度達(dá)不到要求時(shí)，就需要更換紫外燈了。

臭氧滅菌：臭氧是一種強(qiáng)氧化劑，滅菌過程屬生物化學(xué)氧化反應(yīng)。

O3滅菌原理一般有以下三種：

1.臭氧通過氧化分解細(xì)菌內(nèi)部葡萄糖所需的酶，使細(xì)菌滅活死亡。

2.直接與細(xì)菌、病毒作用，破壞它們的細(xì)胞器和DNA、RNA，使細(xì)菌的新陳代謝受到破壞，導(dǎo)致細(xì)菌死亡。

3.透過細(xì)胞膜組織，侵入細(xì)胞內(nèi)，作用于膜內(nèi)的脂蛋白和內(nèi)部的脂多糖，改變細(xì)胞的通透性，導(dǎo)致細(xì)胞溶解死亡。

使用臭氧滅菌，殺菌徹底，無殘留，殺菌廣譜，可殺滅細(xì)菌繁殖體和芽孢、病毒、真菌等，并可破壞肉毒桿菌毒素。另外，O3對霉菌也有極強(qiáng)的殺滅作用。O3為氣體，能迅速彌漫到整個(gè)滅菌空間，滅菌無死角。所以，臭氧滅菌也是目前被廣泛使用的滅菌方式。用臭氧消毒空氣，必須是在封閉空間，且室內(nèi)無人條件下進(jìn)行，消毒后至少過 30min 才能進(jìn)入。另外臭氧的密度比空氣大，在空氣中會(huì)迅速下降到空間的底層，因此臭氧發(fā)生器也應(yīng)當(dāng)安裝在無菌室的頂部。一般滅菌時(shí)間選擇30min即可，要求空間中臭氧濃度不低于20mg/m3 。

化學(xué)熏蒸：化學(xué)熏蒸是一種十分傳統(tǒng)的空間滅菌方式，一般是采用易揮發(fā)氣化的化學(xué)物質(zhì)的蒸汽對空間微生物進(jìn)行殺滅的目的，一般常用甲醛、戊二醛、過氧化氫、過氧乙酸等。

這里以常用的甲醛熏蒸為例。一般甲醛熏蒸又稱甲醛高錳酸鉀熏蒸，將40%的甲醛溶液加入到高錳酸鉀溶液中，二者發(fā)生反應(yīng)，放出大量的熱使甲醛蒸發(fā)到空間中，從而對無菌室進(jìn)行滅菌。一般甲醛熏蒸的滅菌效果比較理想，對霉菌等較難清除的污染菌也有較好的殺滅效果，因此在無菌室被霉菌污染時(shí)，通常都是使用甲醛進(jìn)行熏蒸來徹底消滅污染源。

但是甲醛熏蒸的缺點(diǎn)也是很明顯的，因?yàn)榧兹┦且环N強(qiáng)致癌性的化學(xué)品，對人體的傷害較大，在使用過程中需要特別注意，并且殘留量也要進(jìn)行嚴(yán)格的控制。每次熏蒸后，至少需要通風(fēng)24h才可以使用。

目前對熏蒸后甲醛的殘留量并沒有明確要求，還是要通過經(jīng)驗(yàn)來判斷，目前國家對居民住房要求甲醛含量不大于0.1mg/m3，所以我們也可使用甲醛含量測定儀來對熏蒸后的空間進(jìn)行檢測。目前甲醛熏蒸滅菌的方法食品檢測無菌室的滅菌中已經(jīng)較少使用，主要也是因?yàn)椴僮鞅容^繁瑣，滅菌時(shí)間較長，進(jìn)行一次甲醛熏蒸之后，會(huì)有幾天無法使用無菌室進(jìn)行檢測，所以只有在其他滅菌方法無法達(dá)到理想的滅菌效果時(shí)，才會(huì)考慮進(jìn)行甲醛熏蒸。

而其實(shí)這種滅菌方式目前在很多藥企的無菌室滅菌，還是會(huì)經(jīng)常用到的，另外，有些生產(chǎn)區(qū)域如果長期被霉菌污染，也會(huì)考慮用甲醛熏蒸的方法來解決。

了解了這幾種常用的無菌室滅菌方式，在我們?nèi)粘５墓ぷ髦幸部梢愿鶕?jù)自己實(shí)驗(yàn)室情況進(jìn)行選擇，尤其是長期使用一種滅菌方式若是滅菌效果達(dá)不到理想的效果時(shí)，可以根據(jù)實(shí)際情況更換滅菌方式，或者引進(jìn)一種新的滅菌方式兩者結(jié)合，以期達(dá)到預(yù)想的效果。