不知道大家有沒有遇到過這樣惱火的事情——剛剛購買的色譜柱，進樣不到20針，主峰竟然分叉！！而且，不管如何洗脫都無法恢復......

 

浪費資金不說，還嚴重影響實驗進度。

咨詢工程師歸結原因為樣品太臟，造成篩板塌陷。

難道濾膜選擇有問題？

心塞啊！孰是孰非已說不清楚。

唯有繼續嚴謹把控樣品前處理，保護色譜柱和液相進樣系統。

 

對于分析工作來說，樣品前處理是必不可少的環節，同時也是一項技術性工作。

不管超聲，還是振蕩，保證主藥溶解以后，都要進行過濾再進入液相系統。

其中濾膜的作用至關重要。今天我們就來818濾膜的事情。

為什么要拿這么簡單的濾膜選擇的事情出來講，有一個至關重要的原因，哪個新手沒有因為濾膜毀掉一次實驗。。。

1.有機試劑一不小心用了水系膜。結果差點把某些雜峰給當成未知雜質。。。

2.做溶出，濾膜孔徑不合適，結果取出來的樣濾不過去。。手忙腳亂重新找膜差點耽誤一整鍋溶出。。。

3.不做濾膜吸附試驗，差點以為原研的溶出不合格。。。

所以，在試驗開始之前大家都先把這篇文發給新手看一下！

 

濾膜最重要的功能是啥？

 

答：分析系統的大門，保護作用！

微孔濾膜是利用高分子化學材料，致孔添加劑經特殊處理后涂抹在支撐層上制作而成。主要用于色譜分析中流動相及樣品的過濾，對保護色譜柱及輸液泵管系統和進樣閥等不被污染具有良好的作用。

 

1.過濾以后的溶劑和樣品，會對色譜柱和液相進樣系統起到保護作用。

 

對色譜柱的影響：

由于填料顆粒很細，色譜柱內空隙極小，溶劑和樣品中的細小顆粒會使色譜柱和篩板堵塞。

對液相進樣系統的影響：

溶劑和樣品中的細小顆粒會增加進樣閥的堵塞和磨損，同時也會增加泵頭內的藍寶石活塞桿和活塞的磨損。

 

2.消除由于污染對分析結果的影響。

 

對于常用的紫外檢測器和二極管陣列檢測器，如果樣品濃度比較低，顆粒會造成噪聲比較大，基線不穩，感染正常信號，影響檢測結果。

 

常用濾膜類型

 

常用濾膜分為水系和有機系兩種。

 

水系膜

 

水系濾膜通常為混合纖維素酯濾膜，使用前常需進行水浸處理，防止濾膜使用時未壓緊有氣泡入內，同時水浸可以使膜充分溶脹。

 

有機膜

 

有機系濾膜有尼龍濾膜、聚偏氟乙烯濾膜、聚四氟乙烯濾膜等，使用前不需預先濕潤，幾乎能與全部溶出介質相容。使用過程中，根據所過濾樣品選擇合適的濾膜。

聚四氟乙烯膜（PTFE）/聚偏氟乙烯膜（PVDF）：

惰性較強，適用于所有溶劑，酸和鹽，并無任何可溶物。

尼龍濾膜（N6、N66）：

通用型，滿足純水樣品和水/有機混合樣品。適用于絕大多數有機溶劑和水溶液，可用于強酸，70%乙醇，二氯甲烷，不適用于二甲基甲酰胺。

再生纖維素膜（RC）：

適用于水溶性樣品和有機溶劑。

聚醚砜濾膜（PES）：

適用于水溶性樣品的過濾，不適用于酮類、酯類、油類等極性溶液及高濃度的酸溶液。

混合纖維素酯膜（WX）：

適用于水溶液，不耐酸、堿、有機溶劑。

偏氟膜（F膜）：

適用于有機溶劑及空氣過濾，可用于有機溶劑除微粒，提高試劑級別等。

 

如何選擇濾膜

 

對于濾膜選擇主要從材質和孔徑兩方面來來考慮：

 

材質的篩選

 

有機系濾膜：

用于有機相或者有機相溶液的過濾，如過濾水溶液錯選了有機膜，會導致過濾流速極低或者干脆無法過濾。

水系濾膜：

只能過濾水溶液，過濾有機相溶液時，濾膜會溶解掉，溶有濾膜的溶劑會對液相儀器以及色譜柱造成嚴重損傷。

水/有機混合流動相的過濾，首選有機相濾膜。

如果混合流動相中有機相的比例偏少，可先用有機溶劑（甲醇或乙腈）將濾膜潤濕以后再進行流動相的過濾。

過濾溶劑或者流動相一般用溶劑過濾器+膜過濾。

過濾樣品一般用針式過濾器，膜直徑為13mm，可以過濾0.5-2ml的樣品，如果樣品量更大，可以選擇直徑為25mm的。

 

孔徑的選擇

 

常用濾膜的過濾原理一般為機械截留，即截留比它孔徑大或孔徑相當的微粒等雜質。因此，濾膜的孔徑直接決定了選擇性。

常用濾膜的孔徑從0.1μm到10μm不等。

溶出、紫外、液相等分析檢測常用濾膜的孔徑通常為0.22μm、0.45μm和0.8μm。

0.22um：

去除樣品，流動相中極細顆粒，適用于要求較高的溶劑和樣品的處理，如色譜用離子對試劑、超純水、質譜分析溶劑的樣品等的過濾。

0.45um：

能濾過大多數微生物，適用于常規樣品、流動相的過濾，能夠滿足一般色譜要求。

0.8um：

去除大多數不溶性微粒，適用于紫外等對樣品要求相對較低的分析檢測，尤其適用于難溶性輔料多、混懸劑和粘合劑用量大、且使用紫外檢測的口服固體制劑溶出檢測。

 

針式過濾器使用竅門

 

針式過濾器是大家做溶出、和液相樣品前處理最常用的。一天不知道會有多少次，小編今天就講一些大家平時很少注意的小竅門。

1.在吸入樣品前，先向注射器中吸取約1ml的空氣，可以使液體殘留量最小；

2.樣品吸入注射器中，倒置注射器并將頂端的殘留物擦凈，將針式過濾器連接到注射器上，輕輕擰緊保證良好密封；

3.將注射器內的樣品過濾后注入進樣瓶中；

4.取下過濾器，將空氣吸入注射器，重新連接過濾頭，按下推桿過濾出所有殘余樣品。最大程度提高樣品回收率。

溫馨提示：在過濾過程中，最好不使用小于10ml的注射器，以免壓力過高引起液體崩漏。

 

濾膜吸附試驗的設計

 

濾膜使用前需進行考察，明確是否對待測成分有吸附作用。

無論溶出度，還是含量、有關物質，如果濾膜有影響會導致后續產出的結果都是錯的。

無論藥物結構如何，在試驗開始之前考察一下總是對的。

針對不同的分析檢測項目，判斷濾膜吸附及驗證的方法略有不同。

 

溶出度測定

 

開始溶出試驗前，濾膜吸附試驗是必須進行的。

濾膜吸附試驗方法如下：

（1）取對照品溶液按規定的方法，對比未過濾直接進樣和過濾后的吸光度/峰面積值。

（2）或采用原料加空白輔料的方式配置溶液。分別用高速離心和濾膜過濾的方法處理。對比離心上清液和過濾后溶液的吸光度/峰面積。

（3）分別棄去不同體積的初濾液的考察，參考下表。

 

 

以上方法僅供參考，實際項目不同操作方法不同，請根據實際情況進行調整。

◆ 判定標準

濾膜吸附應在2%以下

按下述公式計算回收率或吸附率

回收率Recovery% = A(過濾) / A(過濾前或離心) ×100%

 

吸附率= 100%－Recovery%

 

其中：A為UV吸光度或HPLC峰面積值。

若回收率在98%~102%之間，即吸附率不超過2%，濾膜吸附作用可忽略不計。

◆ 濾膜吸附過大處理方法如下：

（1）將濾膜在水中煮沸1h以上后再次嘗試；

（2）更換濾膜材質或者品牌。或者采用進口濾膜。

不同的濾膜、不同的處方工藝生產的產品，其吸附作用不盡相同，應通過實驗得出正確結論。若濾膜對原料藥不存在吸附現象，但是樣品溶出度偏低，可以考慮是否存在輔料吸附API然后被濾除的現象。

對于具有明顯吸附的品種，應在內控標準中標明所用濾膜的材質、品牌和規格，以及需要棄去初濾液的體積，以確保檢測結果準確，可重現。

◆ 什么樣的樣品容易產生濾膜吸附現象

發生吸附的品種，往往是主藥均難溶于水，制成制劑時進行過微粉化等處理。

這時原料藥粒徑變小，比表面能變大，靜電吸附能力增強，所以與濾膜的吸附作用會比較明顯。

一些小規格制劑溶出液中主藥濃度低，達到飽和所需的初濾液體積明顯增加，干擾也會變大。

 

含量測定、有關物質測定

 

含量和有關物質使用的溶劑一般都能使樣品中主藥完全溶出，因此使用樣品溶液考察吸附性即可。

而對于有關物質檢測，如果所用溶劑中有機相比例較高，更需要關注濾膜過濾后是否會產生新的雜質。