藥品注冊過程中決定申請能否被批準(zhǔn)很重要的一部分內(nèi)容就是雜質(zhì)研究，申報者（MAH）會對藥品活性原料的合成路徑、制劑的工藝、藥品的降解以及相容性等方面進(jìn)行研究，對關(guān)鍵批次進(jìn)行雜質(zhì)檢驗(yàn)以及對實(shí)際存在和潛在的雜質(zhì)的安全性進(jìn)行毒理研究，最后制定雜質(zhì)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)以保證藥品的安全性。那么藥品企業(yè)如何在藥品批準(zhǔn)上市之后，尤其是涉及到藥品質(zhì)量的變更發(fā)生時保證藥品雜質(zhì)始終處于可控狀態(tài)？最關(guān)鍵也是最直接的一步就是通過雜質(zhì)檢驗(yàn)的色譜圖，識別色譜圖中的未知色譜峰并對其進(jìn)行調(diào)查研究。建議操作步驟如下：

1、識別未知色譜峰

查看每一個批次產(chǎn)品色譜圖，將每一張樣品色譜圖放大到基線進(jìn)行檢查，確保小的色譜峰能夠被發(fā)現(xiàn)。進(jìn)樣稀釋液或空白溶液其色譜圖與樣品色譜圖進(jìn)行對比排除溶劑峰。色譜柱空體積后出現(xiàn)的任何非典型色譜圖中的色譜峰，都認(rèn)為是潛在的未知色譜峰。

2、評估未知色譜峰

當(dāng)未知色譜峰低于檢驗(yàn)方法的檢測限(信噪比≥3)，無需進(jìn)一步調(diào)查此未知峰，當(dāng)未知峰高于檢驗(yàn)方法的檢測限，計(jì)算未知峰的含量，未知色譜峰應(yīng)根據(jù)檢驗(yàn)方法或質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行計(jì)算。對于單一活性成分的產(chǎn)品，活性原料主峰在檢測器響應(yīng)范圍內(nèi)的，可用未知色譜峰的響應(yīng)值除以活性原料峰的響應(yīng)值（峰高或峰面積，取決于檢驗(yàn)方法），并以百分?jǐn)?shù)進(jìn)行報告；對于多個活性成分的產(chǎn)品，可用未知色譜峰的響應(yīng)值除以最小主峰的響應(yīng)值，并以百分?jǐn)?shù)進(jìn)行報告；當(dāng)色譜圖中主峰超過檢測器響應(yīng)值或者沒有主峰時，應(yīng)配制與調(diào)查閾值相當(dāng)?shù)膶φ掌啡芤哼M(jìn)行計(jì)算未知色譜峰的大小，可以用對照品內(nèi)標(biāo)法或小濃度對照品外標(biāo)法進(jìn)行定量。盡量采用活性原料對照品溶液進(jìn)行配制，如果不能實(shí)現(xiàn)時，可以選擇與活性原料結(jié)構(gòu)相似或者響應(yīng)值相似的物質(zhì)配制對照品溶液（例如，降解產(chǎn)物或工藝雜質(zhì)）；對于殘留溶劑，利用和未知色譜峰最近分離出特定溶劑的響應(yīng)因子與活性成分樣品量進(jìn)行計(jì)算，得出未知色譜峰的含量。

計(jì)算未知色譜峰的結(jié)果應(yīng)該精確到調(diào)查閾值所要求的精確度，再與調(diào)查閾值比較，按照 ICH的標(biāo)準(zhǔn)(Q3A和Q3B)執(zhí)行調(diào)查閾值。如果產(chǎn)品中含有多個有效成分，調(diào)查閾值的確定應(yīng)使用最高日攝入量的活性原料，再進(jìn)行比較。未知色譜峰的含量未超出調(diào)查閾值時，不需要發(fā)起實(shí)驗(yàn)室調(diào)查，實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄未知色譜峰的含量。未知色譜峰的含量超出調(diào)查閾值時，則將其色譜圖與技術(shù)文件中色譜圖對比，將含有未知色譜峰的色譜圖與檢驗(yàn)方法、已發(fā)實(shí)驗(yàn)室調(diào)查、注冊文件或其他技術(shù)文件中色譜圖進(jìn)行對比，如果發(fā)現(xiàn)的未知色譜峰為可查明的雜質(zhì)，且其含量未超過文件記錄的可接受標(biāo)準(zhǔn)，無需進(jìn)行調(diào)查，根據(jù)檢驗(yàn)方法和相關(guān)的文件報告該色譜峰。但需注意技術(shù)文件應(yīng)有充分的數(shù)據(jù)證明此未知色譜峰的安全性。

3、發(fā)起實(shí)驗(yàn)室調(diào)查制劑產(chǎn)品調(diào)查閾值

當(dāng)未知色譜峰首次出現(xiàn)且超出調(diào)查閾值，或其含量超過已有文件記錄的可接受標(biāo)準(zhǔn)，需發(fā)起實(shí)驗(yàn)室調(diào)查。實(shí)驗(yàn)室調(diào)查需排除色譜峰是否為人為引入的非藥品本身含有的色譜峰。

人為引入的色譜峰一般產(chǎn)生的原因如下：

空白稀釋液

進(jìn)樣稀釋空白溶液，確定未知色譜峰是否為稀釋空白溶液引入。查看色譜圖信息確認(rèn)未知峰是否在任一空白稀釋液的譜圖中出現(xiàn)。如果在進(jìn)樣樣品稀釋液色譜圖中出現(xiàn)了未知峰，則可以得出結(jié)論，未知峰為人造峰。

樣品溶液

如果不是稀釋溶液引起的，則需重新進(jìn)樣原始樣品溶液，重新進(jìn)樣的原始樣品溶液發(fā)現(xiàn)未知色譜峰需確認(rèn)相對保留時間與每個出現(xiàn)未知峰的色譜圖中是否一致。

色譜系統(tǒng)引入

確認(rèn)未知色譜峰不是由前一針樣品殘留或?qū)φ掌窔埩簟４_認(rèn)整個液相系統(tǒng)和所使用的色譜柱未受到污染。如果樣品溶液每次重進(jìn)樣均未發(fā)現(xiàn)該色譜峰，且該峰在之前的進(jìn)樣中未重復(fù)出現(xiàn)，則表明該未知峰可能是色譜系統(tǒng)引入的色譜峰。

樣品制備過程

重新按照之前的方法制備兩份樣品進(jìn)樣，如果在新制備的兩份樣品中至少一針未發(fā)現(xiàn)未知色譜峰，則歸因于色譜系統(tǒng)或樣品制備過程導(dǎo)致。

如果實(shí)驗(yàn)室調(diào)查無法確認(rèn)未知峰為人造峰，實(shí)驗(yàn)室調(diào)查總結(jié)將未知峰報告為未查明色譜峰。

4、偏差調(diào)查

經(jīng)過實(shí)驗(yàn)室調(diào)查，未查明色譜峰非實(shí)驗(yàn)室原因?qū)е?，?yīng)發(fā)起偏差調(diào)查，需要發(fā)起偏差調(diào)查的情況包括：新的未查明色譜峰；以往出現(xiàn)的未查明色譜峰，且含量高于歷史數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)；以往出現(xiàn)的未查明色譜峰，含量未超過歷史數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)，但該標(biāo)準(zhǔn)未被文件記錄為可接受的標(biāo)準(zhǔn)。

對未知色譜峰進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，同時確定未知雜質(zhì)的來源。推薦確定原因之后，通過相應(yīng)措施將未知雜質(zhì)降低到閾值以下。如無法將其降低，需對雜質(zhì)的毒理進(jìn)行研究確定其可接受標(biāo)準(zhǔn)并將其寫入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中。

注：如果在穩(wěn)定性加速實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)未查明色譜峰，則應(yīng)該與標(biāo)簽注明的儲存條件的樣品進(jìn)行比較，以決定是否需要下一步的行動。

如果是因?yàn)樽兏a(chǎn)生的未知色譜峰，建議即使含量未超過閾值也應(yīng)對其進(jìn)行調(diào)查，確定是否為基因毒性雜質(zhì)。

5、未查明色譜峰的檢驗(yàn)方法更新

未知色譜峰調(diào)查完成后，需將色譜峰更新至檢驗(yàn)方法等相關(guān)文件中，更新檢驗(yàn)方法時，應(yīng)考慮更新未查明色譜峰的來源和結(jié)構(gòu)確認(rèn)的信息，加入已經(jīng)鑒別的未查明色譜峰的代表性圖譜，并加入未查明色譜峰的結(jié)構(gòu)信息，規(guī)定未查明色譜峰的限度，規(guī)定色譜峰的定量方式。

6、未知色譜峰調(diào)查流程圖