摘要：液相色譜“溶劑效應”，是個老生常談的話題，泛指樣品中某些組分在稀釋劑與流動相中存在狀態有較大差異，導致色譜行為表現異常的情況。本文以某稀釋劑在不同品牌液相上的色譜行為為例，闡明稀釋劑選擇也有可能影響其本身的色譜行為，進而影響方法的耐受性。

一、發現問題：

我公司某項目在采用waters液相進行方法轉移時發現空白溶劑（流動相A）在3.5min有出峰，干擾雜質B的靈敏度測定，空白溶劑譜圖如下：

二、問題排查思路:

1、方法開發方是否也存在同樣的問題

方法開發方采用的是Agilent液相進行的方法開發及驗證，空白溶劑(流動相A)在雜質B出峰位置無干擾，空白溶劑譜圖如下：

方法開發方采用waters液相重新方法，存在同樣的問題，空白溶劑(流動相A)在雜質B出鋒位置也有干擾，空白溶劑譜圖如下：

2、是否是緩沖鹽或溶劑引入的干擾

本方法色譜條件為流動相A：磷酸二氫銨溶液（取磷酸二氫銨11.5g，加水1000ml溶解，并用磷酸調pH值至4.4）流動相B為乙腈-流動相A（1:1）柱溫為40℃；檢測波長為230nm；進樣體積為10μl，梯度洗脫程序如下表所示：

3、是否是“溶劑效應”導致不同品牌液相色譜行為的差異更換磷酸二氫銨為SIGMA廠家HPLC級別的鹽并安裝新鬼鋒捕集小柱，稀釋劑（流動相A）譜圖未見改善，仍有干擾峰出現，譜圖如下：

更換稀釋劑（流動相A）為稀釋劑（流動相A：流動相B 82:18，v/v），采用waters液相，稀釋劑干擾峰消失，譜圖如下：

三、現象分析

在日常檢測中，稀釋劑干擾是一個很讓人頭痛的問題，其本質是稀釋劑中不可避免也可能含有光譜響應的物質，通常這樣雜質保留較弱，容易產生“溶劑效應”，解決該問題最好的方式就是采用初始比例的流動相作為稀釋劑。我們在進行分析方法開發中首先應考慮流動相作為稀釋劑，如遇到溶解性、溶液穩定性等問題，可以適當在稀釋劑中增加助溶劑，穩定劑等，但要做充分的耐受性考察，如更換不同品牌的液相等，以確保檢測數據的準確性和可重現性。

參考文獻

[1]液相色譜柱與方法開發指南

[2] 實用高效液相色譜法建立。