一、概述

 

在藥學(xué)工作中，我們的工作模式與結(jié)果輸出都是以數(shù)據(jù)為代表解釋，合成實驗成功率多少？檢測分析實驗成功率？等等都以統(tǒng)計學(xué)為方針；但對于合成實驗產(chǎn)品收率多少？是否滿足工藝要求，以及產(chǎn)品檢測是否合格（比如雜質(zhì)、含量）？是否滿足產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，以上都是通過實際計算公式進(jìn)行計算得來；還有我們藥學(xué)工作中要以某某計算結(jié)果來評判是否合格/合規(guī)，以及是否達(dá)到既定要求，統(tǒng)統(tǒng)都離不開計算，對計算公式的理解至關(guān)重要。

 

所以此次總結(jié)和解讀內(nèi)容，主要側(cè)重我們在藥學(xué)工作中經(jīng)常遇到的計算及計算公式方面內(nèi)容，在此一一列舉解釋，希望能給同行們以及后來者和即將加入我們的隊伍隊友一些參考和借鑒，描述措辭以及內(nèi)容不足之處敬請指正和討論。

 

二、主要內(nèi)容之藥學(xué)結(jié)果計算

 

§1標(biāo)準(zhǔn)加入法計算雜質(zhì)含量

 

1、標(biāo)準(zhǔn)加入法計算公式-1（無稱樣量）：

式中：A_對-對照溶液中雜質(zhì)峰面積（mAu*S或pA*S）

A_樣-供試品溶液中雜質(zhì)峰面積（mAu*S或pA*S）

限度%-雜質(zhì)濃度相對樣品濃度的比值（%）

 

2、標(biāo)準(zhǔn)加入法計算公式-2（有稱樣量）：

式中：A_u-供試品溶液中環(huán)氧乙烷或二氧六環(huán)的峰面積（pA*S）

A_S-對照溶液中環(huán)氧乙烷或二氧六環(huán)的峰面積（pA*S）

C_S-對照溶液中加入的環(huán)氧乙烷或二氧六環(huán)的質(zhì)量（mg或g）

W_u樣品-供試品溶液中本品（待測樣品）的質(zhì)量（mg或g）

W_s樣品-對照溶液中本品的質(zhì)量（mg或g）

 

3、舉例-1：環(huán)氧乙烷（0.0001%）與二氧六環(huán)（0.001%）檢測（有稱樣量情況）

產(chǎn)品：聚乙二醇系列、聚氧乙烯、聚山梨酯系列、苯氧乙醇

3.1溶液配制

（1）稀釋劑：水。

（2）空白溶液：精密量取2mL的水置于20mL頂空瓶中，壓蓋密封。

（3）環(huán)氧乙烷對照溶液：精密稱取環(huán)氧乙烷對照品50mg置于100mL容量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，再精密量取2mL置于20mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，得環(huán)氧乙烷對照儲備溶液，再精密量取環(huán)氧乙烷對照儲備溶液2mL置于50mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得環(huán)氧乙烷對照溶液。（濃度為2.0ug/mL）

（4）二氧六環(huán)對照溶液：精密稱取二氧六環(huán)對照品50mg置于100mL容量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，得二氧六環(huán)對照儲備溶液，再精密量取二氧六環(huán)對照儲備溶液2mL置于50mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得二氧六環(huán)對照溶液。（濃度為20.0ug/mL）

（5）對照溶液：精密稱取本品約1.0g置于20mL頂空瓶中，再分別精密加入環(huán)氧乙烷對照溶液0.5mL和二氧六環(huán)對照溶液0.5mL，壓蓋密封，即得對照溶液。

（6）供試品溶液：精密稱取取本品約1.0g置于20mL頂空瓶中，精密加入2.0mL水，壓蓋密封，即得供試品溶液。

3.2 進(jìn)樣程序（進(jìn)樣序列表）

進(jìn)樣順序	溶液名稱	進(jìn)樣次數(shù)
1	空白溶液	1（至少1針）
2	對照溶液	3或6
3	供試品溶液1（同一批號）	1
4	供試品溶液2（同一批號）	1
5	供試品溶液3（同一批號）	1

3.3 系統(tǒng)適用性要求：

  3針或6針連續(xù)對照溶液中，環(huán)氧乙烷峰的峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD%）不大于15.0%；二氧六環(huán)的峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD%）不大于10.0%。

3.4 計算公式（按標(biāo)準(zhǔn)加入法）計算環(huán)氧乙烷和二氧六環(huán)含量（%）

式中：A_u-供試品溶液中環(huán)氧乙烷或二氧六環(huán)的峰面積（pA*S）

A_S-對照溶液中環(huán)氧乙烷或二氧六環(huán)的峰面積（pA*S）

C_S-對照溶液中加入的環(huán)氧乙烷或二氧六環(huán)的質(zhì)量（ug）

W_u樣品-供試品溶液中本品（待測樣品）的質(zhì)量（g）

W_s樣品-對照溶液中本品的質(zhì)量（g）

10^-6-ug與g的換算單位（%）

 

4、舉例-2：液體輔料有關(guān)物質(zhì)檢測（無稱樣量情況）

產(chǎn)品：二氯甲烷、丙酮

4.1溶液配制

（1）稀釋劑：樣品測試液（丙酮）。

（2）供試品溶液：樣品測試液（丙酮）。

（3）空白溶液：精密量取2mL的水置于20mL頂空瓶中，壓蓋密封。

（4）對照溶液-A：精密量取0.5mL甲醇（雜質(zhì)A）、0.5mL異丙醇（雜質(zhì)B）同置于100mL容量瓶中，用供試品溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，再精密量取1.0mL置于10mL容量瓶中，用供試品溶液稀釋至刻度，搖勻，即得對照溶液-A。

（5）對照溶液-B：精密量取0.1mL苯（雜質(zhì)C）置于100mL容量瓶中，用供試品溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，再精密量取0.2mL置于100mL容量瓶中，用供試品溶液稀釋至刻度，搖勻，即得對照溶液-B。。

4.2 進(jìn)樣程序（進(jìn)樣序列表）

進(jìn)樣順序	溶液名稱	進(jìn)樣次數(shù)
1	對照溶液-A	3
2	對照溶液-B	2
3	供試品溶液1（同一批號）	1
4	供試品溶液2（同一批號）	1

4.3 系統(tǒng)適用性要求：

  3針連續(xù)對照溶液-A中，雜質(zhì)A與雜質(zhì)B峰的峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD%）不大于5.0%；2針連續(xù)對照溶液-B中，雜質(zhì)C峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD%）不大于15.0%。

4.4 限度：

雜質(zhì)A或雜質(zhì)B：樣品測試液中雜質(zhì)A或雜質(zhì)B峰面積不得大于對照溶液-A中雜質(zhì)A或雜質(zhì)B峰面積與樣品測試液中雜質(zhì)A或雜質(zhì)B峰面積之差（0.005%）；

雜質(zhì)C：樣品測試液中雜質(zhì)C峰面積不得大于對照溶液-B中雜質(zhì)C峰面積與樣品測試液中雜質(zhì)C峰面積之差（0.0002%）。

4.5 計算公式（按標(biāo)準(zhǔn)加入法）計算各雜質(zhì)含量（%）

4.5.1 雜質(zhì)A與雜質(zhì)B含量%：

式中：A_對-對照溶液-A中雜質(zhì)A或雜質(zhì)B的峰面積（mAu*S或pA*S）

A_樣-供試品溶液中雜質(zhì)A或雜質(zhì)B的峰面積（mAu*S或pA*S）

0.005%-雜質(zhì)A或雜質(zhì)B濃度相對樣品濃度的百分比值（%）

4.5.2 雜質(zhì)C含量%：

式中：A_對-對照溶液-B中雜質(zhì)C的峰面積（mAu*S或pA*S）

A_樣-供試品溶液中雜質(zhì)C的峰面積（mAu*S或pA*S）

0.0002%-雜質(zhì)C濃度相對樣品濃度的百分比值（%）

 

§2內(nèi)標(biāo)法計算雜質(zhì)/主成分含量

 

1、內(nèi)標(biāo)法計算公式（中國藥典2020版四部-通則0512）：

式中：A_{u（供試品）}-供試品溶液（加內(nèi)標(biāo)的）中各物質(zhì)峰面積（pA*S或mAu*S）

A_{S（對照-內(nèi)標(biāo)）}-對照溶液中內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的平均峰面積（pA*S或mAu*S）

C_{S（對照）}-對照溶液中各物質(zhì)濃度（mg/mL或ug/mL）

C_{u（供試品加入內(nèi)標(biāo)）}-供試品溶液（加內(nèi)標(biāo)的）中加入內(nèi)標(biāo)物質(zhì)濃度（mg/mL或ug/mL）

A_{S（對照）}-對照溶液中各物質(zhì)的平均峰面積（pA*S或mAu*S）

A_{u（供試品加入內(nèi)標(biāo)）}-供試品溶液（加內(nèi)標(biāo)的）中加入內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰面積（pA*S或mAu*S）

C_{u（供試品）}-供試品溶液（加內(nèi)標(biāo)的）中樣品濃度（mg/mL或ug/mL）

C_{S（對照-內(nèi)標(biāo)）}-對照溶液中內(nèi)標(biāo)物質(zhì)濃度（mg/mL或ug/mL）

 

2、內(nèi)標(biāo)法計算公式（整理版）：

式中：A_u-供試品溶液各待測物質(zhì)峰面積（pA*S或mAu*S）

A_S-對照溶液中各物質(zhì)平均峰面積（pA*S或mAu*S）

C_S-對照溶液各物質(zhì)濃度（mg/mL或ug/mL）

C_u-供試品溶液濃度（mg/mL或ug/mL）

A_{u（內(nèi)標(biāo)）}-供試品溶液中內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰面積（pA*S或mAu*S）

A_{s（內(nèi)標(biāo)）}-對照溶液中內(nèi)標(biāo)物質(zhì)平均峰面積（pA*S或mAu*S）

 

3、舉例：內(nèi)標(biāo)殘留溶劑檢測

3.1溶液配制

（1）空白溶液（稀釋劑）：二甲亞砜（DMSO）

（2）內(nèi)標(biāo)儲備液：精密稱取四氫呋喃125mg置于裝有適量二甲基亞砜的50mL量瓶中，用DMSO溶解并稀釋至刻度，搖勻，備用。

（3）混合對照儲備液：分別精密稱取丙酮625mg、乙腈51.25mg、二氯甲烷75mg同置于裝有適量二甲基亞砜的25mL量瓶中，用DMSO溶解并稀釋至刻度，搖勻，再精密量取上述溶液5.0mL置于50mL容量瓶中，用DMSO稀釋至刻度，搖勻，即得。 

（4）對照溶液：精密量取上述混合對照儲備液5.0mL和內(nèi)標(biāo)貯備液0.5mL同置于50mL量瓶中，用二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，即得對照溶液。

（5）供試品溶液：稱取XXXX本品1250mg，置于25mL量瓶中，加入15mL二甲基亞砜使其完全溶解，向其中精密加入0.25mL內(nèi)標(biāo)貯備液，用二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

3.2 進(jìn)樣程序（進(jìn)樣序列表）

進(jìn)樣順序	溶液名稱	進(jìn)樣次數(shù)
1	空白溶液	1（至少1針）
2	對照溶液	6
3	供試品溶液1（同一批號）	1
4	供試品溶液2（同一批號）	1
5	對照溶液	1

3.3 系統(tǒng)適用性要求：

 6針連續(xù)對照溶液中，各殘留溶劑峰的峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD%）不大于10.0%；內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD%）不大于10.0%。

3.4 計算公式（內(nèi)標(biāo)法）計算各殘留溶劑含量（%）

式中：A_u-供試品溶液各殘留溶劑峰面積（pA*S）

A_S-對照溶液中各殘留溶劑平均峰面積（pA*S）

C_S-對照溶液各殘留溶劑濃度（mg/mL）

C_u-供試品溶液濃度（mg/mL）

A_u（THF）-供試品溶液中四氫呋喃峰面積（pA*S）

A_s（THF）-對照溶液中四氫呋喃平均峰面積（pA*S）

 

§3外標(biāo)法計算雜質(zhì)/主成分含量

 

1、外標(biāo)法計算公式（中國藥典2020版四部-通則0512）：

式中：A_{u（供試品）}-供試品溶液中各雜質(zhì)/主成分峰面積（pA*S或mAu*S）

C_{S（對照）}-對照溶液中各雜質(zhì)/主成分濃度（mg/mL或ug/mL）

A_{S（對照）}-對照溶液中各雜質(zhì)/主成分的平均峰面積（pA*S或mAu*S）

C_{u（供試品）}-供試品溶液中樣品濃度（mg/mL或ug/mL）

 

2、外標(biāo)法計算公式（含量測定-整理版1）：

式中：A_u-供試品（樣品）峰面積（mAu*S）

A_S-對照品峰面積（mAu*S）

C_S-對照品濃度（mg/mL或ug/mL）

C_u-供試品（樣品）濃度（mg/mL或ug/mL）

P-對照品百分含量（%）

W%-供試品（樣品）水分（%）

RS%-供試品（樣品）殘留溶劑含量（%）

 

3、外標(biāo)法計算公式（含量測定-整理版2）：

式中：A_u-供試品溶液主峰面積（mAu*S）

C_u-供試品溶液濃度（mg/mL或ug/mL）

P-對照品百分含量（%）

W%-供試品水分（%）

-兩份對照品溶液的響應(yīng)因子（峰面積/濃度）平均值（mL/mg）

式中：A_s-對照溶液主峰平均面積（mAu*S）

C_s-對照溶液濃度（mg/mL或ug/mL）

式中：F_{1（對照1）}-對照溶液1的響應(yīng)因子（A/C）

F_{2（對照2）}-對照溶液2的響應(yīng)因子（A/C）

 

4、外標(biāo)法計算公式（含量測定之標(biāo)示含量-整理版4）：

式中：A_u-供試品（樣品）峰面積（mAu*S）

A_S-對照品峰面積（mAu*S）

C_S-對照品濃度（mg/mL或ug/mL）

C_u-供試品（樣品）濃度（mg/mL或ug/mL）

P-對照品百分含量（%）

RW%-對照品水分（%）

W%-供試品（樣品）水分（%）

SP-制劑規(guī)格

ASW-平均片重

ALC-平均裝量

 

5、外標(biāo)法計算公式（雜質(zhì)含量測定之加校正因子的主成分外標(biāo)法-整理版5）：

式中：A_u-供試品溶液中各雜質(zhì)峰面積（mAu*S）；

A_s-對照溶液中XX主成分峰面積（mAu*S）；

C_u-供試品溶液濃度（mg/mL或ug/mL）；

C_s-對照溶液濃度（mg/mL或ug/mL）；

P-對照品百分含量（%）；

F-各雜質(zhì)的校正因子。

6、外標(biāo)法殘留溶劑檢測：

式中：A_u-供試品（樣品）各溶劑峰面積（pA*S）

A_S-對照品各溶劑峰面積（pA*S）

C_S-對照品中各溶劑濃度（mg/mL或ug/mL或g/mL）

C_u-供試品（樣品）濃度（mg/mL或ug/mL或g/mL）

式中：A_u-供試品（樣品）各溶劑峰面積（pA*S）

A_S-對照品各溶劑峰面積（pA*S）

C_S-對照品中各溶劑濃度（ug/mL）

C_u-供試品（樣品）濃度（g/mL）

 

§4加校正因子的主成分自身對照法

 

1、計算公式：

式中：A_u-供試品溶液中各已知雜質(zhì)峰面積（mAu*S）

A₀-對照溶液中XX主成分峰面積（mAu*S）

F-校正因子

限度%-對照濃度相對供試品濃度的百分比值（%）

 

2、校正因子獲得：

利用線性實驗（雜質(zhì)與主成分）在不同濃度級別下，進(jìn)樣記錄色譜圖，以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），以濃度為橫坐標(biāo)（X），用最小二乘法進(jìn)行線性回歸，繪制雜質(zhì)濃度和主成分濃度對其峰面積的回歸曲線，回歸曲線：Y=aX+b

校正因子（F）=主成分峰線性斜率÷雜質(zhì)線性斜率

 

3、舉例：加校正因子的主成分自身對照法計算雜質(zhì)含量

3.1 溶液配制：

（1）空白溶液（稀釋劑）：30%甲醇

（2）SST溶液：取XX產(chǎn)品雜質(zhì)對照品混合物及XX主成分對照品適量，加稀釋劑溶解并定量稀釋制成每1mL中含雜質(zhì)A約2.5ug、雜質(zhì)B約10ug、雜質(zhì)C約10ug、雜質(zhì)D約10ug、雜質(zhì)E約10ug、雜質(zhì)F約10ug、XX成品約1mg的溶液，作為系統(tǒng)適用性溶液。

（3）供試品溶液：精密稱取XX本品25mg置于25mL量瓶中，用稀釋劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

（4）對照溶液：精密量取上述供試品溶液1.0mL置于100mL容量瓶中，用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，再精密量取2.0mL置于20mL容量瓶中，用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻即得。

3.2 進(jìn)樣程序（進(jìn)樣序列表）

進(jìn)樣順序	溶液名稱	進(jìn)樣次數(shù)
1	空白溶液	1（至少1針）
2	SST溶液	6
3	對照溶液	1
4	供試品溶液	1

3.3各雜質(zhì)相對主成分的校正因子與相對保留時間列表：

 

序號	雜質(zhì)名稱	校正因子（F）	相對保留時間（RRT）
01	雜質(zhì)B	0.99	0.64
02	雜質(zhì)A	0.91	0.86
03	XX主成分	/	1.0
04	雜質(zhì)E	1.01	1.07
05	雜質(zhì)C	1.04	1.18
06	雜質(zhì)F	1.17	1.19
07	雜質(zhì)D	0.91	1.24
08	其他未知單雜	1.00	/

3.4 限度：本品雜質(zhì)A應(yīng)不得過0.1%（USP/EP表示方法）

雜質(zhì)A峰面積不得大于對照液主峰峰面積的2倍（0.2%）（CP表示方法）

3.5 按下式計算雜質(zhì)含量（%）

式中：A_u-供試品溶液中各已知雜質(zhì)峰面積（mAu*S）

A₀-對照溶液中XX主成分峰面積（mAu*S）

F-校正因子

0.1%-對照濃度相對供試品濃度的百分比值（%,1/1000倍）

3.6 解釋說明：0.1%怎么來的？？？

①供試品溶液：取25mg→25mL（1.0mg/mL）

②對照溶液：取供試品溶液1.0mL→100mL，再移取2.0mL→20mL（0.001mg/mL）

 

§5不加校正因子的主成分自身對照法

 

1、計算公式：

式中：A_u-供試品溶液中各雜質(zhì)峰面積（mAu*S）

A₀-對照溶液中XX主成分峰面積（mAu*S）

限度%-對照濃度相對供試品濃度的百分比值（%）

2、有關(guān)物質(zhì)檢測分析不同計算方式-特殊說明：

（1）對于加校正因子的結(jié)果計算：

未知總雜限度含量（%）計算：

    

式中：A_S-對照品峰面積（mAu*S）

限度%-對照溶液與樣品溶液的百分比（%）

總雜含量（%）=未知總雜（%）+各已知雜質(zhì)（%）

 

三、總結(jié)語

 

鑒于上述總結(jié)歸納，是我在分析學(xué)習(xí)交流群里遇到的同行們談?wù)摶钴S的內(nèi)容總結(jié)和解釋，歸納完整度以及描述可能有些紕漏，希望同行給出指正討論交流！