作者｜田娜，張星一（CDE）

眼用制劑作為局部給藥的外用制劑，僅在眼部起效，一般要求不得進入系統循環并發揮全身作用，故其難以通過傳統的藥動學方法，以測定血中的藥物濃度并比對的方式來評價仿制藥與參比制劑之間的生物等效性(BE)；如果采用眼內房水中的藥物濃度來進行眼用制劑的生物等效性評價，也因為房水取樣量有限，難以多次取樣，存在醫學倫理問題而難以推廣。目前國內外產、學、研各界均在積極探求對眼科藥物這種給藥途徑特殊的無明確BE評價方法的復雜仿制藥的可替代的體內/外生物等效性評價方法。本文根據眼用制劑的劑型原理、藥物起效部位(眼表、眼內)差別以及藥物本身作用機制的區別，匯總了ICH主要成員國當前對眼用制劑生物等效性評價方法的技術要求，并探索基于Q3的眼科藥物的invitro BE試驗等評價手段，來擴展眼科藥物的一致性評價的思路和方法。

眼用制劑系指直接用于眼部發揮治療作用的無菌制劑，主要用于治療干眼癥、沙眼、眼部炎癥(結膜炎)、視網膜病變、青光眼等。眼用制劑可分為眼用液體制劑[滴眼劑(溶液、混懸液或乳狀液)、洗眼劑、眼內注射溶液]、眼用半固體制劑(眼膏劑、眼用乳膏劑、眼用凝膠劑)、眼用固體制劑(眼膜劑、眼丸劑、眼內插入劑)等。眼用仿制制劑生物等效性的評價方法包括臨床終點試驗、藥效動力學試驗、藥動學試驗(房水等中藥物濃度或眼壓-時間曲線下面積)、體外試驗等。

眼用制劑為局部外用制劑，一般僅在眼部起效，不經過系統吸收、全身起效。因此，難以通過傳統的藥動學方法通過測定血藥濃度來評價其與參比制劑的生物等效性；且目前采用藥動學試驗評價眼用制劑生物等效性的檢測指標通常為房水中的藥物濃度，不易操作，且存在倫理顧慮；部分藥物難以通過臨床終點試驗來評價生物等效性。

國內外藥品監管部門也在積極尋求可替代的生物等效性評價方法，如基于物理和化學特性對比(Q3)的藥學等效和/或體外試驗、藥理試驗等。FDA于2016年6月發布的氯替潑諾碳酸乙酯眼用混懸劑、醋酸潑尼松龍眼用混懸劑生物等效性指南要求為“以PK為終點指標的生物等效性試驗”，2018年2月和2019年5月發布的修訂稿要求變為“體外試驗或以PK為終點指標的生物等效性試驗”，其中，體外研究包括物理化學特性對比研究、藥物體外釋放對比研究和體外試驗[1-4]。FDA在2016年發布的常規科學報告眼科制劑中顯示[5]，通過對可預測藥物體內性能的體外釋放和物理特性研究方法的研究，修訂了地塞米松(0.1%)-妥布霉素(0.03%)混懸劑、環孢菌素乳劑0.05%、桿菌肽軟膏和紅霉素軟膏的生物等效性個藥指南。修訂后指南對軟膏劑的生物等效性評價方法為：如果仿制藥與參比制劑處方的輔料種類(Q1)和輔料用量(Q2)一致，且至少3批仿制藥和參比制劑的物理化學特性相似、體外藥物釋放速率結果相似，則可以豁免體內生物等效性試驗；對混懸劑的生物等效性評價方法為：體外研究或體內研究[本文由藥研公眾號整理，歡迎搜索關注]。

本文通過匯總和整理ICH主要成員國對眼用制劑的藥學和生物等效性的要求，從藥物劑型、藥物特性和藥物作用機制三方面對不同類型眼用制劑的生物等效性評價提供一些思路和建議。

1不同劑型仿制制劑生物等效性要求

1.1真溶液型滴眼劑生物等效性評價

對于真溶液型滴眼劑，因不存在藥物的溶出和釋放過程，美國、歐盟、中國和日本的要求均基本一致，一般要求為：當仿制制劑與參比制劑的濃度規格一致、輔料種類(Q1)和輔料用量(Q2)一致(用量一致是指仿制制劑與參比制劑的輔料用量差異在±5%范圍內)、物理和化學特性(Q3)對比結果符合要求時，即可豁免體內生物等效性試驗[6-9]。如果仿制制劑與參比制劑輔料種類不一致或輔料用量與參比制劑差異大于5%、或Q3對比數據不一致，則需進行適當的體內生物等效性試驗。

真溶液型滴眼劑的物理化學特性包括但不限于以下指標：pH、比重、緩沖容量、重量摩爾滲透壓濃度和黏度，應至少對3批仿制制劑和參比制劑進行物理化學特性對比研究[10-13]。滴眼劑的生產和質量要求一般參考注射劑的技術要求，研究者可比照《化學藥品注射劑仿制藥質量和療效一致性評價技術要求(征求意見稿)》的要求，對自研眼用真溶液制劑的處方和生產工藝、無菌要求等開展研究。

另經查詢，部分日本PMDA滴眼劑的審評報告顯示，其對仿制滴眼劑的生物等效性評價手段一般為：根據藥物的藥理作用，制成相應的動物模型，分別給予仿制制劑、參比制劑進行治療，通過比較兩者的有效性和安全性來評價是否生物等效。如0.3%諾氟沙星滴眼液和0.3%氧氟沙星滴眼液的生物等效性評價[14-15]，均采用家兔(n分別為6和30)作為實驗動物，在其眼表造出直徑6mm的創傷區，接種銅綠假單胞菌，分別給予仿制滴眼液和參比滴眼液后，以角膜感染的程度分5級來評價滴眼液的抑菌效力，以其結果來評價二者在局部的生物等效性。

1.2半固體眼用制劑生物等效性評價

半固體眼用制劑包括眼用乳劑、軟膏劑、凝膠劑等。不同類型的半固體制劑物理化學特性對比、制劑開發及質量控制的要求、生物等效性要求均不一致。

1.2.1眼用軟膏劑[16-18]

對于眼用軟膏劑，因其為均相系統，FDA發布的多個眼用軟膏劑的個藥生物等效性指南對眼用軟膏劑的生物等效性的一般要求為：如果仿制制劑與參比制劑處方的Q1/Q2一致，且至少3批仿制制劑和參比制劑的物理化學特性(Q3)、體外藥物釋放速率無明顯差異，則可以豁免體內生物等效性試驗。其中，物理化學特性包括：性狀、提取的軟膏基質的酸度和堿度、流變性能(包括屈服應力和黏度)、液滴粒徑及粒徑分布。

日本PMDA對眼用軟膏的審評報告顯示，評價眼用軟膏劑的生物等效性一般方法為：以實驗模型動物的藥動學和藥效學對比結果來評價仿制制劑與參比制劑是否生物等效。一般情況下，藥動學評價指標為實驗動物房水或角膜中的藥物濃度；藥效學的評價指標為藥物對造模動物的治療效果。如3%阿昔洛韋眼用軟膏的生物等效性評價[19]：①藥動學試驗：分別采用仿制眼膏和參比制劑眼膏滴于兔眼(n=67)，30min后測定角膜中的阿昔洛韋濃度，并采用90%置信區間進行統計分析，結果顯示，分析數值在log0.80～log1.25，證明仿制制劑與參比制劑生物等效。②藥效學試驗：以白凡士林為陰性對照，評價仿制制劑與參比制劑對兔單純皰疹病毒1型(HSV-1)角膜感染模型的治療效果，結果顯示，2種制劑較陰性對照(白凡士林)顯示出顯著的治療效果，并且2種制劑的治療效果無明顯差異。0.3%氧氟沙星眼用軟膏的生物等效性評價[20]：①藥動學試驗：分別采用仿制眼膏和參比制劑眼膏滴于兔眼(n=10)，1h后測定房水中的藥物濃度，對兩者的幾何均值進行統計分析，結果顯示無明顯差異，證明仿制制劑與參比制劑生物等效。②藥效學試驗：評價仿制制劑與參比制劑對兔銅綠假單胞菌角膜感染模型的療效，結果顯示，2種制劑對該模型均有顯著療效，且2種制劑的治療效果無明顯差異。

1.2.2眼用乳劑

FDA對于眼用乳劑的生物等效性一般要求為[21-22]：如果仿制制劑與參比制劑處方的Q1/Q2一致；至少3批仿制制劑和參比制劑的物理化學特性無明顯差異；體外釋放速率無明顯差異，則可豁免體內生物等效性試驗。如果受試制劑與參比制劑輔料種類不一致、輔料用量差異超過5%或物理化學特性對比數據不符合要求時，則需進行以眼部藥動學為終點指標(類固醇皮質激素)或臨床療效為終點評價指標的人體生物等效性研究[本文由藥研公眾號整理，歡迎搜索關注]。

其中，乳劑的物理化學特性對比項目包括：液滴分布、黏度、pH、Zeta電位、滲透壓摩爾濃度和表面張力。但對乳劑的液滴分布有特殊要求，需進行群體生物等效性研究。具體方法可參考FDA發布的二氟潑尼酯乳劑和環孢素乳劑等的生物等效性指南。

1.2.3混懸型滴眼劑

混懸型滴眼劑主要包括糖皮質激素類藥物、治療青光眼和高眼壓癥的藥物等。對于混懸型滴眼劑，因藥物在眼表給藥后，尚存在溶出釋放過程，藥物的粒徑、溶解速度、增溶劑的類型等均會影響藥物的釋放和臨床療效。故生物等效性評價的要求需要根據藥物特點逐一分析(casebycase)，具體如下。

FDA對于醋酸潑尼松龍、瑞美松龍、氯替潑諾碳酸乙酯等糖皮質激素類混懸型滴眼劑，因其藥物自身特性及作用機制，需通過吸收入眼內起效，其生物等效性一般要求為[23-25]：藥學一致性或以PK為終點指標的生物等效性試驗。其中藥學一致性包括：仿制制劑與參比制劑Q1/Q2一致；物理和化學特性、體外釋放速率無明顯差異。其中，藥物產品的物理和化學特性(Q3)包括：原料藥的晶型，外觀，pH，比重，滲透壓摩爾濃度，表面張力，緩沖能力和黏度(應分別測量存在和不存在淚液情況下的黏度)，再分散性(重新分散配方所需的時間和沉降時間)，最終藥物產品中不溶性主藥的可溶性比例，每滴主藥含量[提供受試制劑和參比制劑至少3批各10瓶、每瓶各1滴的含量對比數據，應使用群體BE(95%置信上限)]，藥物粒度分布(粒度分布應使用基于D50和SPAN的群體BE(95%置信上限)進行比較。申請人應提供不少于10個來自受試制劑和參比制劑各3個不同批次樣品的數據用于群體BE評價)。以PK為終點的生物等效性試驗設計一般為：單劑量、平行或交叉設計的眼部房水試驗；受試者為接受白內障手術，并計劃在眼科手術前接受眼科類固醇皮質激素治療的患者；評價指標為房水中的藥物含量；評價標準為AUCt幾何均值比值的90%置信區間數值應在0.8～1.25之間。

治療慢性開角型青光眼或高眼壓癥的眼壓升高的混懸型滴眼劑[26-30]：對于治療青光眼或眼壓升高的混懸型滴眼劑，因該類藥物體外試驗無法直接反映體內藥效，美國、中國、日本、歐盟對其仿制藥的生物等效性評價，一般均要求以臨床療效為終點指標的生物等效性試驗。試驗設計為隨機、雙盲、平行、雙臂體內試驗；受試者為雙眼患有慢性開角型青光眼或高眼壓的男性和女性；評價標準為90%或95%置信區間。如布林佐胺眼用混懸液(規格1%)，適應證為治療慢性開角型青光眼或高眼壓癥的眼壓升高，FDA對于該藥物的生物等效性指南(2019年5月修訂)要求為“以臨床療效為終點指標的生物等效性試驗”；日本PMDA于2018年批準的1%布林佐胺混懸液審評報告顯示，采用雙盲、平行、對照方法，以開放性原發性角膜青光眼或高眼壓患者為受試者，以眼壓變化的95%置信區間進行統計分析，證明了仿制制劑與參比制劑生物等效；歐盟通過互認可程序上市的1%布林佐胺眼用混懸液仿制藥的審評報告顯示，進行了一項隨機、雙盲、非劣效性臨床試驗。

此外，日本PMDA審評報告顯示，對于水溶性滴眼劑(治療青光眼、高眼壓的滴眼劑)的生物等效性一般要求為：人體房水PK試驗和動物有效性對比試驗。如0.12%異丙基烏諾前列酮滴眼液的生物等效性評價[31]：①人眼動力學試驗：試驗對象為健康成年男性(n=19)；試驗方法為將仿制滴眼劑與參比滴眼劑分別滴入受試者的結膜囊中，同時設陰性對照組；分別于滴眼后0，1，2，3，4，5，6，10，23h，測量最低眼壓值和眼壓值-時間曲線下面積，統計分析結果證明2種制劑生物等效。②動物有效性實驗：采用兔高眼壓模型(雄性，JW)，評價仿制滴眼液與參比滴眼液的治療效果，并設陰性對照組。試驗方法為在加載水之前分別滴注仿制制劑和參比制劑，在加載水10，20，30，45，60和90min后測量眼壓，結果顯示，較陰性對照組，仿制制劑和參比制劑均顯示出明顯的降低眼壓作用，且兩組之間無顯著差異，證明兩者生物等效。

2眼用制劑一致性的評價要點

2.1參比制劑

建議參比制劑可參考《關于發布化學仿制藥參比制劑遴選與確定程序的公告(2019年第25號)》進行選擇。

批次要求：一般應至少采用3批仿制制劑與參比制劑進行物理化學特性(Q3)對比，用于對比研究的仿制制劑應與商業化批次在同一生產線上生產。

仿制制劑批量一般要求：用于對比研究的眼用仿制制劑，3批中的2批至少應達到：①擬定最大商業批量的10%。②單包裝灌裝量大于2.0mL時，則為50L·批-1。③單包裝灌裝量不超過2.0mL時，則為30L·批-1，三者選包裝后最大的批量。若同時研究了多種規格(如1，2和3mL)，則建議各規格批量均應達到50L[32]。

2.2眼用制劑藥學研發中的Q1，Q2和Q3

處方中輔料種類Q1一致的要求：原則上Q1一致指代仿制制劑與參比制劑輔料種類一致，但允許對某些輔料(如防腐劑、緩沖劑、調節張力的物質或增稠劑)進行變更(不與RLD一致)，但研究者需明確上述差異并用相關資料證明這些差異不會對藥物的安全性和有效性產生影響[6，33]。

處方中Q2一致一般指：仿制制劑與參比制劑的輔料用量差異在±5%范圍內。Q3對比項目可參考FDA發布的個藥生物等效性指南。

處方工藝開發中需關注問題：對于眼用軟膏劑和乳劑，建議以關鍵物理化學特性(如流變特性)、藥物釋放速率等為考察指標，對不同來源輔料及不同制備工藝進行考察，從源頭把控藥物質量。此外，因黏度對藥物在眼部的滯留時間有影響，進而影響藥物在房水中濃度增加的速度和量，因此，在制劑開發及質量控制中應重點關注對滴眼液黏度的控制。對于混懸型滴眼劑，主藥的粒度及粒度分布對藥物在眼部的生物利用度有較大影響，在制劑開發及質量控制中應重點關注對粒度、晶型以及影響藥物釋放速率的因素控制。

抑菌劑：眼用制劑為無菌制劑，多劑量眼用制劑一般需在處方中加入抑菌劑，建議按照《中華人民共和國藥典》2015版的要求在處方開發過程中進行抑菌效力試驗，以確定處方中抑菌劑的用量。

2.3眼用制劑生物等效性評價的基本思路

對于藥物呈真溶液型存在的滴眼劑，原則上當仿制產品與參比制劑的Q1/Q2一致，且Q3均一致時，即可提出豁免體內生物等效性試驗的申請。必要時，可通過非臨床研究、體外試驗等技術方法來進一步評價其等效性。

對于眼用軟膏劑、乳劑等半固體制劑，原則上可通過要求仿制制劑與參比制劑的Q1/Q2一致、Q3和體外釋放速率無明顯差異，來支持其豁免體內生物等效性試驗的訴求；同時建議進一步通過非臨床研究來評價生物等效性。

非臨床研究可根據藥物的藥理作用建造相應的動物模型，通過評價仿制制劑和參比制劑的有效性和安全性及評價生物等效性。如果仿制制劑與參比制劑的Q1/Q2不一致，則建議通過制劑的物理和化學特性(如流變學、微觀形態學)、體外釋放速率、非臨床對比研究、體外試驗對比和/或體內臨床試驗來評價兩者的質量和療效的一致性。

對于作用于眼表的混懸型滴眼劑，建議參考ICH主要成員國的相關指南要求，通過要求仿制制劑與參比制劑的Q1/Q2一致、Q3及體外釋放速率無明顯差異，并通過非臨床研究、體外試驗等技術手段來評價生物等效的可能性，同時不排除要求開展臨床終點指標的生物等效性試驗的可能性。

對于吸收入眼內部起效的混懸型滴眼劑，原則上需進行PK試驗或以臨床療效為終點指標的生物等效性試驗。對于慢性開角型青光眼或高眼壓癥的眼壓升高的混懸型滴眼劑，因體外試驗難以間接評價體內藥效，因此，一般需進行臨床終點試驗來評價生物等效性。

對于臨床終點試驗難以評價生物等效性的情況，可比較仿制制劑與參比制劑臨床有效性的相似性，并同時結合臨床前的藥效藥理試驗或物理和化學特性的等效性來評價等效性。

2.4其他

2.4.1類固醇皮質激素類眼用制劑

對于類固醇皮質類眼用制劑，因藥物自身特性，容易通過結膜吸收進入房水和系統吸收，可通過以藥動學為終點指標的臨床試驗來評價生物等效性，評價指標一般為房水中的藥物濃度。

2.4.2抗生素類眼用制劑[34]

對于抗生素類眼用制劑，如果藥學方面無法評價仿制制劑與參比制劑是否一致時，一般需對仿制制劑和參比制劑進行非臨床試驗、體外對比(即體外微生物殺死率)等試驗來開展其一致性評價。

3小結

綜上，世界各國藥品監管機構，因臨床局部使用的眼用制劑的劑型多樣、起效部位差異、藥物自身理化特性及作用機制的差別，其生物等效性的評價方法也分為多個層次，方法眾多，很難像口服固體制劑那樣統一以體內BE作為判斷臨床生物等效性的“金標準”。

調研顯示，目前可采用且廣泛接受的眼用制劑生物等效性的評價方法主要包括藥學的Q1，Q2和Q3研究、臨床終點指標的生物等效性試驗、動物和人體藥動學和/或藥效學試驗、體外抑菌效力試驗等，需要根據藥物的治療特點和質量特性酌情選擇合適的評價手段[本文由藥研公眾號整理，歡迎搜索關注]。

科學發展日新月異，未來研究者采用基于生理模型分析的體內外藥物相關性預測等先進技術手段，來對吸收不規律、劑量與療效關系難以線性確定的眼科藥物開展更深入的基礎性科學研究，以支持對復雜仿制藥的基于科學的技術審評。以上僅為個人觀點，供業界參考。