色譜積分方法，最近幾年控制的比較嚴格，官方審計的時候甚至有要求將積分方法固定在SOP中，任何的積分方法修改都要經過批準。本文我們來探討積分的那些事吧。　

1、積分

指在信號中確定峰并計算其大小，積分包括以下操作及步驟：識別、校正、定量。

2、積分事件的參數控制

對于某個信號進行積分時，軟件將識別每個峰的開始和結束時間，并用豎線標記這些點，尋找每個峰的峰頂點，確定保留時間/遷移時間，建立基線，以及計算每個峰的峰面積、峰高和峰寬。這些過程積分事件的參數控制。

3、自動積分

自動積分功能為設置初始事件提供開始點。自動積分功能設置以下參數：初始斜率靈敏度（閾值）、初始峰高、初始峰寬、初始最小峰面積。

4、手動積分

此類型的積分允許對選定的峰或峰組進行積分，在指定的手動積分范圍內，將忽略此軟件的事件積分（初始最小峰面積除外）。如果手動積分出來的一個或多個峰低于最小峰面積閾值，則此積分將被廢棄。手動積分時間使用絕對時間值。它們不會為信號漂移作調整。在報告中。

手動積分提供以下功能：

• 劃基線：指定為一個峰或一組峰劃基線的位置；

• 負峰：指定何時將基線以下的面積當作負峰處理；

• 切線撇去：計算從主峰切線撇去的峰面積；

• 分裂峰：指定用垂線分裂峰的點；

• 刪除峰：從積分結果中刪除一個或多個峰。　

無論是Agilent液相還是waters液相，自動積分主要是修改以下4個積分參數實現的，具體如下：

1、斜率靈敏度（Slope Sensitivity）

也稱閾值，指設置信號斜率的值，該斜率用于識別積分過程中峰的起點和終點。如何信號斜率大于“斜率靈敏度”值，將建立峰起點，如果信號斜率降到“斜率靈敏度”以下，將建立峰止點。

設置值越低，峰響應越靈敏，當然，不同品牌的儀器對設置值的響應程度會有所區別，一般情況下，島津液相斜率靈敏度的修改對積分效果產生的影響較大，相對來說，Agilent和waters敏感度較低；

2、峰寬值（Peak Width）

用于控制積分器的選擇性以區分峰與基線噪音。如果設置的初始峰寬太小，則可能將噪音當作峰。如果寬峰與窄峰混在一起，可以選用運行時間編程事件設定特定的峰寬。

3、最小峰面積值（Area Reject）

根據峰面積來設置小于目標峰面積的峰將不被積分也不會報告；

4、最小峰高（Height Reject）

最小目標峰的高度，任何小于最小峰高的峰將不被積分及報告。

1、關于手動積分

能進行手動積分嗎？答案是肯定的，可以進行手動積分，但手動積分必須在受控的情況下進行。一般情況下，應采用自動積分方式，不可以手動積分。特殊情況下，若是目標峰實在無法自動積分的，即對于采取高級積分的方式還不能將峰有效的積分，經申請與批準后，可以進行手動積分。此外必須嚴格控制手動積分次數，因為如果一套好的分析方法，峰與峰之間分離較好，根本是不需要手動積分，手動積分的圖譜，峰與峰的分離勢必不好。

2、關于忽略限

如USP 621的最后章節規定：“When the impurity test prescribes the total of impurities or there is a quantitative determination of an impurity, choice ofan appropriate threshold setting and appropriate conditions for the integration of the peak areas is important. In such tests the limit at or below which apeak is disregarded is generally 0.05%. Thus, the threshold setting of the data collection system corresponds to at least half of this limit. Integrate the peak area of any impurity that is not completely separated from the principal peak, preferably by valley-to-valley extrapolation (tangential skim).”單個雜質及總雜質的定量測定，選擇合適的閾值設置和合適的條件進行積分是很重要的。這種情況下，峰值可忽略通常設為0.05%。因此，數據采集系統的閾值設置至少相當于這個限制的一半（0.025%）。對任何未與主峰完全分離的雜質進行積分，最好采用峰谷對峰谷外推法(切向撇去法)。”

值得注意的是，USP621規定的報告閾是0.05%，但積分是（最小峰面積）設定應設為0.025%對應的峰面積。另外，對于與主峰未完全分離的雜質，USP建議的積分方法為切向撇去法，當然原料藥之類的可以與客戶溝通，統一積分方法，避免由于積分原因導致投訴。

3、關于積分方法是否需要固定

積分方法是否需要固定？個人認為應該分情況，分析方法驗證期間時積分參數摸索期，通過整套分析方法驗證過程來確定積分參數，這期間沒有修改積分參數之說，因為本身就沒有積分方法。放行檢測的積分方法可以先根據驗證情況進行確定，之后所有檢測的積分方法應該是固定，任何修改積分參數的行為應該進行申請，批準后方可修改。

穩定性考察為了反映雜質的趨勢，積分方法可以與放行方法不同，但不同時間點的積分方法應該相同，任何修改，同樣需要申請及批準。

4、積分方法的審計追蹤

目前的色譜系統，均有審計追蹤，當我們對積分方法進行修改時，均會出現“comment”，要求輸入具體的修改內容。有的公司采用數字代碼的形式，例如：“1代表新建......”，總之，各位認為這種方法不是特別清晰修改了什么，還是如實的輸入修改內容比較明確，對于英文輸入的問題，個人認為可以將日常用到的常用的comment規定到文件中，分析人員可以參照文件輸入正確的英文comment。 

本文僅代表作者個人觀點，供大家討論思考，有不當之處，還望見諒。 　

1. USP<621>

2. 安捷倫科技參考指南