一、中國藥典2015規定

0512高效液相色譜法規定如下：品種正文項下規定的條件除填充劑種類、流動相組分、檢測器類型不得改變外，其余如色譜柱內徑與長度、填充劑粒徑、流動相流速、流動相組分比例、柱溫、進樣量、檢測器靈敏度等，均可適當改變，以達到系統適用性試驗的要求。調整流動相組分比例時，當小比例組分的百分比例 X 小于33%時，允許改變范圍為0.7X ?1.3X ; 當X大于33%時，允許改變范圍為X —10%?X+ 10%。

由上文可知，中國藥典專論方法除填充劑種類、流動相組分（比例調整在規定范圍內）、檢測器類型不得改變外，其他條件改變了，還是認為是藥典方法。但中國藥典沒有規定方法確認之說，所以，即使是中國藥典方法，也是應該按分析方法驗證的相關規定進行全套的方法驗證。

二、美國藥典41規定

USP41 <621> CHROMATOGRAPHY 規定如下：

為符合系統適用性的要求而調整的操作條件是允許的，除非專論項下另有規定，下面為所列的最大的可調范圍，這些調整需要額外的確認數據。為確認新條件對方法的適用性，評估調整對相關分析性能特征存在的潛在影響。多條件的調整，將對系統性能產生累積影響，實施前需仔細考慮。

1、pH of mobile phase(HPLC): 流動性緩沖液的pH:±0.2 units，適用梯度及等度。

2、Concentration of salts in buffer (HPLC):  ±10%（pH允許情況下），適用梯度及等度。

3、Ratio of componentsin mobile phase (HPLC): 

流動相中組分（≤50%）可以在此比例上再調節±30%，且任一組分比例的調節不應超過±10%（相對于總的流動相），含三組分的流動相的調節可以分組分進行，含雙組分的流動相的調節可在最小的組分進行，雙組份和三組分的調節實例如下：

雙組分：例如流動相50:50，其中一組分50%的30%是15%，但是它超過了占總體比例±10%的規定，所以這個流動相比例的調節范圍應以±10%為限，可以在不超過40:60~60:40的范圍之間調節。再例如流動相比例為2:98，其中小組分2%的30%是0.6%，這個值不超過占總體比例±10%的規定，此流動相的比例可以在不超過1.4:98.6~2.6:97.4的范圍之間調節。

三組分：例如流動相60:35:5，它的次組分35%的30%是10.5%，但是它超過了占總體比例±10%的規定，所以這個流動相比例中的次組分的調節范圍應以±10%為限。對于最小組分5%的30%是1.5%。可以在不超過50:45:5~70:25:5或58.5:35:6.5~61.5:35:3.5的范圍之間調節。

4、Wavelength ofUV-visible detector (HPLC): 專論中規定的檢測波長不允許改變，檢測器供應商的程序或另一個驗證程序來說明，波長檢測誤差，最多不得超過±3nm。

5、Stationary phase

Column length (GC): 可以在±70%范圍內調節。

Column length (HPLC): 見粒徑項下。

Column inner diameter (HPLC): 如果線速度保持恒定，可以調整。見HPLC流速。

Column inner diameter (GC): 最大可調整至±50%。

Film thickness (capillaryGC): 最大可在−50% to100%調整。

6、Particle size(HPLC): 等度洗脫：粒度和柱長均可以修改，但柱長與粒度的比值（L/dp）恒定或在規定柱長與粒度的比值的-25%~+50%范圍內。或者（當粒度通過表面多孔顆粒調整時），其它柱長（L）和粒度（dp）的柱子可以使用，但理論塔板數N應在規定柱的-25%~+50%范圍內。如果調節導致更高的理論塔板數時應注意，這樣將產生更小的峰容量，應通過縮小額外柱外峰拓寬的因素調整，例如儀器的管路、檢測器的體積、采樣速率和進樣體積。當專論中未規定粒度時，該比值應采用規定柱的最大粒度計算。

7、Particle size (GC): 如果色譜圖的符合系統適用性要求以及粒徑范圍比相同，粒度大小可以從大變小或從小變大，粒徑范圍比的定義是最大粒度直徑除以最小粒度直徑。

8、Flow rate (GC): 流速可以最大在±50%調整。（備注：如果專論中規定了線性速度參數，如果載氣系統可以按設置的控制，線性速度可以在 +50%~ −25%范圍內調整）

9、Flow rate (HPLC)：當粒度改變時，流速也許需要調整，因為為達到相同的性能，小粒度的柱子需要更高的線速度（測量通過較少塔板高度），流速、柱內徑、粒度通過下面公式換算。

F2=F1×[(dc22×dp1)/(dc12×dp2)]

其中：

對于等度洗脫，如果粒度從≥3μm變化到＜3μm時，將增加線速度（通過調整流速），如果柱效不下跌20%以上，相同地，如果粒度從＜3μm變化到≥3μm時，應減少線速度（流速）來避免柱效降低20%以上。梯度洗脫：流速、柱內徑、粒度將不允許調整。另外，流速可以在±50%調整。（只適用于等度洗脫）

三、歐洲藥典9 規定

EP 2.2.46 ChromatographicSeparation Techniques 規定如下：

1、液相色譜-等度洗脫

（1）Composition of themobile phase：小組分的數量可以在相對±30%或絕對±2%范圍內調節，兩者取其大。（例如：流動相中次組分占10%，按相對±30%它的可調范圍在7%~13%，按絕對±2%它的可調范圍在8%~12%，取較大者7%~13%；再例如：次組分為5%時，按相對±30%它的可調范圍在3.5%~6.5%，按絕對±2%它的可調范圍在3%~7%，取較大者3%~7%），但須確保組分的絕對調節量不得超過10%。

（2）pH of the aqueouscomponent of the mobile phase：除非專論中另有規定，用于配制流動相的pH可以在規定的值或范圍的±0.2以內調節。如果待測品為非電離物質（中性物質），pH可在±1.0范圍內調節。

（3）Concentration ofsalts in the buffer component of a mobile phase：用于配制流動相的含水緩沖液的鹽的濃度可在±10%范圍內調節。

（4）Flow rate：一般調節范圍為±50%，若柱尺寸改變了，流速可以更大范圍內調節，具體可按下述公式來計算。

（5）Column parameters：

Stationary phase：固定相的屬性不能改變（例如：不能用C8來代替C18）；

particle size：最多可減小50%，不允許增加。

Column dimensions:長度可以±70%范圍內調節，內徑可在±25%范圍內調節。當柱的尺寸改變時，流速通過下面公式進行調節。

F2=F1×[(dc22×dp1)/(dc12×dp2)]

其中：

（6）Temperature：當專論中規定了柱溫時，可以±10℃范圍內調節，除非另有規定。

（7）Detector wavelength：不允許改變。

（8）Injection volume：若待檢峰的靈敏度和重復性好的話可以減小，不允許提高。

2、液相色譜-梯度洗脫

梯度洗脫的液相條件調節需比等度洗脫的更加慎重。流動相的組成/梯度洗脫可以在符合下述條件的前提下進行小范圍的調節：

滿足系統適應性的條件；

主峰的出峰時間在原定保留時間的±15%以內；

流動相中最終組分的洗脫能力的強度不得弱于原規定組分；

如果系統適應性的條件達不到，則通常首選考慮滯留體積或更換柱子。

（1）Dwell volume滯留體積（死體積）：儀器的結構將會大大的改變分離度、保留時間、相對保留時間，如果這些發生，是由于滯留體積過多。專論中通常在梯度洗脫時先進行等度洗脫。考慮到方法開發系統和實際系統的滯留體積的不同，所以梯度洗脫的時間應該足夠。所以使用者在進行方法確認時應確認等度洗脫的時間。如果洗脫時的滯留體積在專論中有規定，則開始洗脫的時間點（t min）應該被調節時間點(t_c min)替代。用下面公式計算

式中：

D：滯留體積，ml；

D₀：方法開發時的滯留體積，ml；

F：流速 ml/min。

如果方法的驗證沒有包括該步驟，用于上述目的的等度的描述可以被省略。

（2）pH of the aqueouscomponent of the mobile phase含水相的流動相pH：不允許調節。

（3）Concentration of salts in the buffer component of a mobile phase流動相中緩沖液鹽的濃度：不允許調節。

（4）Flow rate流速：當柱子的內徑改變時，調節是可以接受的，具體見流速公式。

（5）Column parameters柱參數

Stationary phase固定相：固定相的屬性不能改變（例如：不能用C8來代替C18）；

particle size粒徑，不允許調節。

Column dimensions柱尺寸：長度可以±70%范圍內調節，內徑可在±25%范圍內調節。當柱的尺寸改變時，流速按照下面的公式進行計算并調節。

（6）Temperature柱溫：當專論中的檢測方法規定了具體的柱溫時，溫度可在±5℃范圍內調節，除非另有規定。

（7）Detector wavelength檢測波長：不允許改變。

（8）Injection volume進樣體積：若待檢峰的靈敏度和重復性可滿足的話可以減小，不允許提高。

3、Gas chromatography氣相色譜

（1）Column parameters柱參數

Stationary phase固定相：粒徑最多可減少50%，不允許增加（填充柱）。膜厚可以在-50%~+100%范圍內調節（毛細管柱）。

Column dimensions柱尺寸：色譜柱長度可以±70%范圍內調節，色譜柱內徑可以在±50%范圍內調節。

（2）Flow rate流速（GC）：可以在±50%范圍內調節。

（3）Temperature柱溫（GC）：可以在±10%范圍內調節。

（4）Injection volumeand split volume進樣體積和分流比：若待檢峰的靈敏度和重復性可以滿足的話，可以調節。

USP與EP規定的可調范圍基本一致，相較于梯度洗脫，EP藥典更加謹慎，基本上不允許進行過多的調整。此外藥典方法，EP與USP均要求進行方法確認，并且明確指出，藥典方法可以不進行全套的驗證。USP<1226>及FDA指南均有藥典方法確認的相關指導，小編將接著為大家介紹。