新藥申報(bào)時(shí)，藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中分析方法必須驗(yàn)證；

藥物生產(chǎn)工藝變更、制劑的組分變更、原分析方法進(jìn)行修訂時(shí)，則質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法必須進(jìn)行驗(yàn)證；

藥物分析檢驗(yàn)時(shí)藥品生產(chǎn)的GMP的藥物分析的方法學(xué)驗(yàn)證，是保證藥物分析結(jié)果準(zhǔn)確性的前提和基礎(chǔ)，也是實(shí)現(xiàn)藥物分析檢測(cè)GMP的必然要素。

構(gòu)成藥物分析中的檢測(cè)方法驗(yàn)證，這要涉及到以下些方面的內(nèi)容：

1、分析方法驗(yàn)證成功的前提條件：

（1）儀器已經(jīng)確認(rèn)、校正并在有效期內(nèi)

（2）經(jīng)過(guò)培訓(xùn)的人員

（3）可靠穩(wěn)定的對(duì)照品

（4）可靠穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)試劑

（5）確認(rèn)受試溶液的穩(wěn)定性，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)無(wú)降解。

2、分析方法學(xué)驗(yàn)證所要求驗(yàn)證的內(nèi)容：

（1）含量的測(cè)定

（2）雜質(zhì)的含量測(cè)定

（3）藥物的定性鑒定

（4）藥物的含量均勻度測(cè)定

（5）藥物的微生物檢測(cè)

（6）藥物的細(xì)菌內(nèi)毒素的檢測(cè)

驗(yàn)證內(nèi)容：

準(zhǔn)確度：

準(zhǔn)確度是指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，用百分回收率表示。測(cè)定回收率R（recovery）的具體方法可采用加樣回收試驗(yàn)法來(lái)進(jìn)行測(cè)定。加樣回收試驗(yàn)已準(zhǔn)確測(cè)定藥物含量P的真實(shí)樣品+已知量A的對(duì)照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測(cè)定，測(cè)定值為M。數(shù)據(jù)要求:規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測(cè)定結(jié)果評(píng)價(jià)，如制備高、中、低三個(gè)不同濃度樣品各測(cè)三次

精密度：

重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性精密度是指在規(guī)定條件下，同一個(gè)均勻樣品，經(jīng)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之間的接近程度。用偏差（d）、標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD)、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)（變異系數(shù)，CV）表示。

（1）重復(fù)性(repeatability):在相同條件下，由同一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度；在規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測(cè)定結(jié)果評(píng)價(jià)，如制備三個(gè)不同濃度樣品各測(cè)三次或把被測(cè)物濃度當(dāng)作100%，至少測(cè)6次進(jìn)行評(píng)價(jià)

（2）中間精密度：同一實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備所得結(jié)果的精密度

（3）重現(xiàn)性(reproducibility)不同實(shí)驗(yàn)室，不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度

（4）數(shù)據(jù)要求：需報(bào)告SD，RSD和可信限

專屬性：

指有其他成分（雜質(zhì)、降解物、輔料等）可能存在情況下采用的方法能準(zhǔn)確測(cè)定出被測(cè)物的特性，能反映該方法在有共存物時(shí)對(duì)供試物準(zhǔn)確而專屬的測(cè)定能力，是指該法用于復(fù)雜樣品分析時(shí)是否受到相互干擾程度的度量

• 通常通過(guò)分析含有加了雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、有關(guān)化學(xué)物質(zhì)或安慰劑成分的樣品，將所獲分析結(jié)果與未加前述成分之樣品的測(cè)試結(jié)果進(jìn)行比較，兩組測(cè)試結(jié)果之差即專屬性

•鑒別反應(yīng)---應(yīng)能與可能共存的物質(zhì)或結(jié)構(gòu)相似化合物區(qū)別，不含被分析的樣品，以及結(jié)構(gòu)相似或組分中的有關(guān)化合物，均應(yīng)呈負(fù)反應(yīng)

•含量測(cè)定和雜質(zhì)測(cè)定---色譜法和其他方法，應(yīng)附代表性圖譜，亦說(shuō)明專屬性。圖中應(yīng)標(biāo)明各組份的位置，色譜法中的分離度應(yīng)符合要求

•雜質(zhì)可獲得的情況下，對(duì)于含量測(cè)定，試樣中可加入雜質(zhì)或輔料，考察測(cè)試結(jié)果是否受干擾；對(duì)于雜質(zhì)測(cè)定，也可向試樣中加入一定量的雜質(zhì)，考察雜質(zhì)間是否得到分離

檢測(cè)限系：

檢測(cè)限系指試樣在確定的實(shí)驗(yàn)條件下，被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低濃度或含量。它是限度檢驗(yàn)效能指標(biāo)，無(wú)需定量測(cè)定，只要指出高于或低于該規(guī)定濃度即可。

•非儀器分析目視法：用已知濃度的被測(cè)物，試驗(yàn)出能被可靠地檢測(cè)出的最低濃度或量

•信噪比法:用于能顯示基線噪音的分析方法（儀器分析方法），是把已知低濃度試樣測(cè)出的信號(hào)與空白樣品測(cè)出的信號(hào)進(jìn)行比較，算出能被可靠地檢測(cè)出的最低濃度或量。一般以信噪比3∶1或2∶1時(shí)的相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測(cè)限

•也可采用標(biāo)準(zhǔn)差法：

空白值＝0時(shí)；

①測(cè)定背景10次以上，求出標(biāo)準(zhǔn)差σ

②將σ乘以三倍；

③在工作曲線上求出3σ相對(duì)應(yīng)的濃度X，即為方法的檢出值；

空白值不等于0；

①測(cè)定背景10次以上，求出標(biāo)準(zhǔn)差σ；

②將σ乘以三倍；

③在工作曲線上求出3σ相對(duì)應(yīng)的濃度X；

④將求得的對(duì)應(yīng)濃度值加上空白值即得該方法的檢出限

定量限（limit ofquantitation LOQ）

•指樣品中被測(cè)物能被定量測(cè)定的最低量，結(jié)果應(yīng)具有一定準(zhǔn)確度和精密度要求

•常用信噪比法確定定量限，一般以信噪比（S/N）為10∶1時(shí)相應(yīng)的濃度或注入儀器的量進(jìn)行確定，也可用儀器所測(cè)空白背景響應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)差（SD）的10倍為估計(jì)值，再經(jīng)試驗(yàn)確定方法的實(shí)際測(cè)定下限

定量限：

指樣品中被測(cè)物能被定量測(cè)定的最低量，結(jié)果應(yīng)具有一定準(zhǔn)確度和精密度要求

•常用信噪比法確定定量限，一般以信噪比（S/N）為10∶1時(shí)相應(yīng)的濃度或注入儀器的量進(jìn)行確定，也可用儀器所測(cè)空白背景響應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)差（SD）的10倍為估計(jì)值，再經(jīng)試驗(yàn)確定方法的實(shí)際測(cè)定下限

線性：

在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，測(cè)試結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。線形通常用最小二乘法處理數(shù)據(jù)求得回歸曲線的斜率（Slope）來(lái)表示。數(shù)據(jù)要求：至少需要五個(gè)濃度考察線形，需提供相關(guān)系數(shù)、y截距（是檢定的可能偏差）、回歸斜率及方差等參數(shù)，應(yīng)列出回歸方程數(shù)和線性圖

注意：做線性時(shí)，應(yīng)注意盡量做的點(diǎn)多一點(diǎn)、線性濃度范圍寬一點(diǎn)，這樣做的好處是：當(dāng)你在準(zhǔn)確度考察時(shí)，你做的回收率考察的濃度就大些，配制溶液時(shí)就容易操作些，否者，在你做線性考察時(shí)，你做的線性濃度范圍不寬，那么你在考察回收率時(shí)，你采用加入法考察時(shí)的濃度變化范圍不寬，操作濃度很難控制，造成實(shí)際操作困難。我碰到一個(gè)在做方法學(xué)研究的人，由于她在考察線性時(shí)，做的線性濃度不大，在做回收率時(shí)，加入后的量造成回收率濃度超出線性考察范圍的濃度，我說(shuō)那樣是不行的。因?yàn)樵谧龇治鲇?jì)算時(shí)又恰恰用了線性關(guān)系來(lái)計(jì)算，結(jié)果肯定是值得懷疑，結(jié)果是不能令人肯定的！（這是經(jīng)驗(yàn)總結(jié)）

范圍：

指達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性的條件下，測(cè)試方法適用的高、低限濃度或量的區(qū)間。范圍應(yīng)根據(jù)分析方法的具體應(yīng)用和線性、準(zhǔn)確度、精密度結(jié)果和要求確定。

•原料藥和制劑含量測(cè)定范圍為80%-120%；制劑含量均勻度范圍為70%-130%；雜質(zhì)測(cè)定應(yīng)為被測(cè)雜質(zhì)匯報(bào)值到限度的120%；溶出度應(yīng)為測(cè)定范圍的±20%，如規(guī)定了限度范圍，應(yīng)為下限的-20%至上限的+20%，例如緩釋片1h<20%,7h>70%,則驗(yàn)證范圍定為0-90%。

耐用性：

指測(cè)定條件稍有變動(dòng)時(shí)，結(jié)果不受影響的承受程度，為常規(guī)檢驗(yàn)提供依據(jù)。是衡量實(shí)驗(yàn)室和工作人員之間在正常情況下實(shí)驗(yàn)結(jié)果重現(xiàn)性的尺度;如果方法易受到分析條件的影響，或要求苛刻，應(yīng)注明。典型的變動(dòng)包括：分析溶液的穩(wěn)定性，提取時(shí)間等。