監(jiān)管機構(gòu)的行業(yè)指南指出，根據(jù)具體的試驗?zāi)康模êY查試驗/常規(guī)實驗），所有的試驗開展之前，都要先進行合理恰當(dāng)?shù)姆椒炞C。

今天就藥廠實驗室典型的元素雜質(zhì)分析方法驗證流程，以及與常見的HPLC方法驗證的區(qū)別，分為幾部分為大家進行介紹。

在所有驗證工作開始之前，首先要明確需要測試的元素雜質(zhì)。針對不同的給藥途徑，法規(guī)規(guī)定了對應(yīng)的必須要評估的元素。其中1類，2A類的7種元素，是對所有產(chǎn)品都適用的。對于其他非強制/未主動添加的元素，藥廠可以根據(jù)其潛在的風(fēng)險來決定是否要包括在方法驗證中。

對于這個問題，并沒有統(tǒng)一的答案。篩查所有的24種元素，很可能會帶來額外的工作量和成本，但在法規(guī)全面執(zhí)行的初期也不失為一種穩(wěn)妥的辦法。

明確了要分析的金屬元素之后，就要確認(rèn)方法驗證中最重要的部分-樣品前處理。好的方法驗證，從前處理開始。

與<ICH Q3D>指導(dǎo)原則不同,USP<233>對于適用的四種前處理方法做出了明確的規(guī)定。需要強調(diào)的是，絕大多數(shù)的驗證數(shù)據(jù)偏差和后續(xù)方法開發(fā)的挑戰(zhàn)，都來自前處理的環(huán)節(jié)。

雖然每種方法都有自己的特點和適合的樣品類型（見下表），總體來說直接溶解法在操作的簡易性與安全性，結(jié)果的穩(wěn)定性上都具有一定的優(yōu)勢，也是可以最先嘗試的步驟。

比如對于有些易于直接溶解于有機溶劑（比如異丙醇, 二甲亞砜等等）中的醫(yī)藥中間體來說，由于避免了高溫高壓的反應(yīng)過程，很多反應(yīng)性，揮發(fā)性強的金屬雜質(zhì)都能獲得不錯的回收，可以為后期的方法驗證以及最終的QC測試節(jié)約大量的工作量。

對于不能直接溶解的化合物，還可以選擇間接溶解法。其中密閉容器微波消解法是最主流的選擇，涉及的方法參數(shù)組合也比直接溶解要復(fù)雜些。

酸的選擇

一般來說，濃/稀硝酸（14M,7M或者2M）可以作為嘗試的起點。作為補充，適量的雙氧水也可以提供額外的氧化性，而不會產(chǎn)生干擾測試的離子。 當(dāng)然也有很多硝酸無法消解的樣品，比如抗抑郁藥物卡馬西平，鹽酸阿米替林，鹽酸丙咪嗪，就會在微波消解的條件下和硝酸反應(yīng)生成極穩(wěn)定的產(chǎn)物。這時，您可以嘗試使用王水或者反王水的組合。

當(dāng)然，如果選擇驗證全部24種元素的話，適當(dāng)比例的鹽酸，可以在高溫消解的同時，穩(wěn)定諸如汞（Hg）和鉑族元素（PGEs）等元素。對于某些特殊樣品，完全溶解可能會需要適量的氫氟酸（需要特殊的硬件），而傳統(tǒng)的濕法消化中采用的高氯酸與硫酸，則很少在密閉消解和ICPMS平臺上采用。

樣品量

盡量小，除了原料成本的考慮之外（有些API確實很貴哦），操作安全是很重要的因素。濃酸氧化消解有機物的過程會瞬間產(chǎn)生大量的熱量和氣體，盡量選擇小樣品量對于樣品溶解和總體操作安全性會有很大幫助。

當(dāng)然樣品量減小，會導(dǎo)致加標(biāo)量和實際進樣濃度成比例的減小。這將對耗材（水/高純酸）的純度和儀器背景干擾的控制，提出更高的要求。

在摸索出完全溶解樣品的方法之后，簡單的預(yù)實驗可以幫助實驗室確認(rèn)消解溶液的穩(wěn)定性，儀器參數(shù)的設(shè)置準(zhǔn)確度和精密度的大致范圍。為最終的完整方法驗證做好準(zhǔn)備。

可能遇到的一些常見問題包括：

經(jīng)過之前預(yù)實驗步驟，方法參數(shù)都已經(jīng)確認(rèn)，最后的方法驗證反而會是最直接的環(huán)節(jié)（見下表）。

最后需要強調(diào)的是，元素雜質(zhì)實驗的系統(tǒng)適應(yīng)性要求與傳統(tǒng)的液相方法是有區(qū)別的，其中：

1.系統(tǒng)適應(yīng)性可以通過日常的調(diào)諧（daily tune）來實現(xiàn)；

2.質(zhì)量分辨率(mass resolution)可以通過每月一次的質(zhì)量調(diào)諧來實現(xiàn)；

3. 對于痕量金屬分析來說，“重復(fù)5-6次進樣，RSD保持在NMT 2%”是很難實現(xiàn)的；

4.ICPMS的線性范圍非常大，常規(guī)定量分析一般做0.5J與2J即可，不用做5個標(biāo)準(zhǔn)點。