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嘉峪檢測(cè)網(wǎng) 2018-01-17 15:41
赭曲霉毒素A 廣泛分布于自然界，人類攝入赭曲霉毒素A 主要來(lái)自谷物，其次是葡萄酒和咖啡等，其具有很強(qiáng)的肝臟毒性和腎臟毒性，并有致畸、致突變和致癌作用。2005 年歐盟規(guī)定葡萄酒、以及用于飲料制作的葡萄酒或者葡萄，限量為2.0μg/kg。GB 2761-2017《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中真菌毒素限量》規(guī)定葡萄酒中赭曲霉毒素A 限量標(biāo)準(zhǔn)為2.0μg/kg；咖啡豆和咖啡粉中赭曲霉毒素A 限量標(biāo)準(zhǔn)為5.0μg/kg，速溶咖啡中赭曲霉毒素A 限量標(biāo)準(zhǔn)為10.0μg/kg。
根據(jù)國(guó)標(biāo)GB5009.96-2016 第二法，使用CNW Poly-Sery MAX 混合型陰離子交換SPE 小柱利用高效液相- 熒光的方法檢測(cè)出紅酒和咖啡粉中赫曲霉毒素A，方法簡(jiǎn)單易行，為赭曲霉毒素A 的檢測(cè)提供了復(fù)雜基質(zhì)的解決方案同時(shí)也是除免疫親和柱外的SPE 小柱法。
一、樣品前處理
1、紅酒基質(zhì)空白：實(shí)驗(yàn)前將待測(cè)紅酒先置于4℃冰箱冷藏30min，過(guò)濾或超聲脫氣后再使用。稱取10g 預(yù)處理后的紅酒，加入6mL 的提取液( 氫氧化鉀溶液0.1mol/L- 甲醇- 水(2+60+38)，混勻，再用氫氧化鉀溶液（0.1M）調(diào)pH 至10.0，進(jìn)行固相萃取凈化
紅酒加標(biāo)：在10g 預(yù)處理后的紅酒中加入赭曲霉毒素A 標(biāo)準(zhǔn)溶液（使上機(jī)檢測(cè)濃度為5 ppb），其它操作同紅酒空白。
2、咖啡粉基質(zhì)空白：稱取2.5g 咖啡粉，加入25 mL 的提取液[ 甲醇- 碳酸氫鈉溶液30g/L(50+50) ]，于漩渦振蕩器上振蕩提取3~5min，4000r/min 離心10min 濾紙過(guò)濾，取濾液10mL 進(jìn)行固相萃取凈化。
咖啡粉加標(biāo)：在樣品中加入赭曲霉素A 標(biāo)準(zhǔn)溶液（使上機(jī)檢測(cè)濃度為5 ppb），其它操作同樣品空白。
二、小柱操作
小柱：CNW Poly-Sery MAX 混合型陰離子交換SPE 小柱（SBEQ-CA3385；200mg/6mL）
活化：5mL 甲醇
平衡：3mL 提取液
（氫氧化鉀溶液（0.1 mol/L）+ 甲醇+ 水=2+60+38）
上樣：紅酒基質(zhì)全部上樣、咖啡基質(zhì)10ml 上樣
淋洗：分別用3mL 淋洗液{ 氫氧化鉀溶液（0.1mol/L）- 乙腈- 水（3+50+47）}、3mL 水、3mL 甲醇淋洗小柱，抽干
洗脫：用5mL 洗脫液( 甲醇- 乙腈- 甲酸- 水{40+50+5+5）} 洗脫，收集洗脫液，45℃氮?dú)獯蹈?，?ml 流動(dòng)相復(fù)溶，過(guò)濾后，待上機(jī)分析。
三、HPLC-FLD 測(cè)定條件
色譜柱：CNW Athena C18-wp
（LAEQ-462572； 4.6mm*250mm, 5um）
流動(dòng)相：A：冰乙酸- 水（2+100） B：乙腈
紅酒基質(zhì)A:B(50:50)，咖啡基質(zhì)A:B(52:48)
流速：1.0mL/min；
激發(fā)波長(zhǎng)：333nm; 發(fā)射波長(zhǎng)：460nm；
柱溫：30℃
進(jìn)樣：20uL
四、實(shí)驗(yàn)譜圖
圖1：赭曲霉毒素A 5ppb 標(biāo)準(zhǔn)譜圖
圖2：紅酒基質(zhì)空白譜圖
圖3：紅酒基質(zhì)加標(biāo)5 ppb 譜圖
圖4：咖啡基質(zhì)空白譜圖
圖5：咖啡基質(zhì)加標(biāo)5 ppb 譜圖
五、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)
來(lái)源：安譜
