引言
阪崎腸桿菌存在于嬰兒奶粉及含乳的嬰兒配方食品中，可導致嬰兒腦膜炎、敗血癥、壞死性小腸結腸炎，發(fā)病嬰兒的死亡率高達40％～80%。因此對嬰兒奶粉及制品中阪崎腸桿菌進行監(jiān)測十分重要。
1、設備和材料
除微生物實驗室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設備外，其他設備和材料如下：
1.1 恒溫培養(yǎng)箱：25 ℃±1 ℃，36 ℃±1 ℃，44 ℃±0.5 ℃。
1.2 冰箱：2 ℃～5 ℃。
1.3 恒溫水浴箱：44 ℃±0.5 ℃。
1.4 天平：感量 0.1 g。
1.5 均質器。
1.6 振蕩器。
1.7 無菌吸管：1 mL（具 0.01 mL 刻度）、10 mL（具 0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸頭。
1.8 無菌錐形瓶：容量 100 mL、200 mL、2000 mL。
1.9 無菌培養(yǎng)皿：直徑 90 mm。
1.10 pH 計或 pH 比色管或精密 pH 試紙。
1.11 全自動微生物生化鑒定系統(tǒng)。
2 培養(yǎng)基和試劑
2.1 緩沖蛋白胨水
2.2 改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯-萬古霉素
2.3 阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基。
2.4 胰蛋白胨大豆瓊脂
2.5 生化鑒定試劑盒。
2.6 氧化酶試劑
2.7 L-賴氨酸脫羧酶培養(yǎng)基
2.8 L-鳥氨酸脫羧酶培養(yǎng)基
2.9 L-精氨酸雙水解酶培養(yǎng)基
2.10 糖類發(fā)酵培養(yǎng)基
2.11 西蒙氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基
第一法 阪崎腸桿菌的檢驗
3 檢驗程序
阪崎腸桿菌檢驗程序見圖 1。
4 操作步驟
4.1 前增菌和增菌
取檢樣 100 g（mL）加入已預熱至 44 ℃裝有 900 mL 緩沖蛋白胨水的錐形瓶中，用手緩緩地搖動至充分溶解，36℃±1℃培養(yǎng) 18 h±2 h。移取 1 mL 轉種于 10 mL mLST-Vm 肉湯，44℃±0.5℃培養(yǎng)24 h±2 h。
4.2 分離
4.2.1 輕輕混勻 mLST-Vm 肉湯培養(yǎng)物，各取增菌培養(yǎng)物 1 環(huán)，分別劃線接種于兩個阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基平板，36 ℃±1 ℃培養(yǎng) 24 h±2 h。
4.2.2 挑取 1 個～5 個可疑菌落，劃線接種于 TSA 平板。25 ℃±1 ℃培養(yǎng) 48 h±4 h。
4.3 鑒定
自 TSA 平板上直接挑取黃色可疑菌落，進行生化鑒定。阪崎腸桿菌的主要生化特征見表 1。可選擇生化鑒定試劑盒或全自動微生物生化鑒定系統(tǒng)。
表 1 阪崎腸桿菌的主要生化特征
5 結果與報告
綜合菌落形態(tài)和生化特征，報告每 100 g（mL）樣品中檢出或未檢出阪崎腸桿菌。
第二法 阪崎腸桿菌的計數(shù)
6操作步驟
6.1 樣品的稀釋
6.1.1 固體和半固體樣品：無菌稱取樣品 100 g、 1 0 g、1 g 各三份，加入已預熱至 44 ℃分別盛有 900 mL、90 mL、9 mL BPW 中，輕輕振搖使充分溶解，制成 1:10 樣品勻液，置 36 ℃±1 ℃培養(yǎng) 18 h±2 h。分別移取 1 mL 轉種于 10 mL mLST-Vm 肉湯，44 ℃±0.5 ℃培養(yǎng) 24 h±2 h。
6.1.2 液體樣品：以無菌吸管分別取樣品 100 mL、10 mL、1 mL 各三份，加入已預熱至 44 ℃分別盛有 900 mL、90 mL、9 mL BPW 中，輕輕振搖使充分混勻，制成 1:10 樣品勻液，置 36 ℃±1 ℃培養(yǎng) 18h±2h。分別移取 1 mL 轉種于 10 mL mLST-Vm 肉湯，44 ℃±0.5 ℃培養(yǎng) 24 h±2 h。
6.2 分離、鑒定
同 4.2，4.3。
7結果與報告
綜合菌落形態(tài)、生化特征，根據(jù)證實為阪崎腸桿菌的陽性管數(shù)，查 MPN 檢索表，報告每 100 g（mL）樣品中阪崎腸桿菌的 MPN 值。
