微生物限度檢查方法

（以下內容僅供參考）

本企業經微生物限度檢查方法中微生物計數及控制菌檢查方法適用性試驗，該產品可按以下方法進行微生物計數及控制菌檢查：

1 供試液的制備：（根據自身產品特性及方法適用性試驗結果，詳細描述供試液的制備過程）

2 需氧菌總數測定：根據自身產品特性及方法適用性試驗結果選擇適宜的方法，如采用直接接種法、薄膜過濾法等 ，以薄膜過濾法舉例說明：先以少量pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液潤濕濾膜，取1:10供試液1ml加至適量pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液中，混勻，立即過濾。再以pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗濾膜3次，沖洗量每次100mL，沖洗后取出濾膜，菌面朝上貼于胰酪大豆胨瓊脂培養基平板上，于30?35℃培養5天，計數。結果以點計的菌落數×10報告菌數；若濾膜上無菌落生長，以＜10報告菌數根據自身產品特性。

3 霉菌和酵母菌總數測定：根據自身產品特性及方法適用性試驗結果選擇適宜的方法，如采用直接接種法、薄膜過濾法等 ，以薄膜過濾法舉例說明：先以少量pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液潤濕濾膜，取1:10供試液1mL加至適量pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液中，混勻，立即過濾。再以pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗濾膜3次，沖洗量每次100mL，沖洗后取出濾膜，菌面朝上貼于沙氏葡萄糖瓊脂培養基平板上，于20?25℃培養7天，計數。結果以點計的菌落數×10報告菌數；若濾膜上無菌落生長，以＜10報告菌數。

4 金黃色葡萄球菌測定：根據自身產品特性及方法適用性試驗結果選擇適宜的方法，如采用常規法、薄膜過濾法等 ，以薄膜過濾法舉例說明：先以少量pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液潤濕濾膜，取1:10供試液10mL，加至100mL pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液中，混勻，立即過濾。再以pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗濾膜3次，沖洗量每次100mL，沖洗后取出濾膜，投入100mL胰酪大豆胨液體培養基中，30?35℃培養18?24小時。取上述培養物劃線接種于甘露醇氯化鈉瓊脂培養基平板上，30?35℃培養18?72小時。結果判斷：若甘露醇氯化鈉瓊脂培養基平板上有黃色菌落或外周有黃色環的白色菌落生長，應進行分離、純化及適宜的鑒定試驗，確證是否為金黃色葡萄球菌；若平板上沒有與上述形態特征相符或疑似的菌落生長，或雖有相符或疑似的菌落生長但鑒定結果為陰性，判供試液未檢出金黃色葡萄球菌。

5 銅綠假單胞菌測定：根據自身產品特性及方法適用性試驗結果選擇適宜的方法，如采用常規法、薄膜過濾法等 ，以薄膜過濾法舉例說明：先以少量pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液潤濕濾膜，取1:10供試液10mL，加至100mLpH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液中，混勻，立即過濾。再以pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗濾膜3次，沖洗量每次100mL，沖洗后取出濾膜，投入100mL胰酪大豆胨液體培養基中，30?35℃培養18?24小時。取上述培養物劃線接種于溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養基平板上，30?35℃培養18?72小時。取上述平板上生長的菌落進行氧化酶試驗，將潔凈濾紙片置于平皿內，用無菌玻璃棒取上述平板上生長的菌落涂于濾紙片上，滴加新配制的1%二鹽酸N,N-二甲基對苯二胺試液，在30秒內若培養物呈粉紅色并逐漸變為紫紅色為氧化酶試驗陽性，否則為陰性。結果判斷：若溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養基平板上有菌落生長，且氧化酶試驗陽性，應進一步進行適宜的鑒定試驗，確證是否為銅綠假單胞菌；若平板上沒有菌落生長，或雖有菌落生長但鑒定結果為陰性，且氧化酶試驗陰性，判供試液未檢出銅綠假單胞菌。

6 大腸埃希菌測定：根據自身產品特性及方法適用性試驗結果選擇適宜的方法，如采用常規法、薄膜過濾法等 ，以薄膜過濾法舉例說明：先以少量pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液潤濕濾膜，取1:10供試液10mL，加至100mL pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液中，混勻，立即過濾。再以pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗濾膜3次，沖洗量每次100mL，沖洗后取出濾膜，投入100mL胰酪大豆胨液體培養基中。30?35℃培養18?24小時。取上述培養物lmL接種至100mL麥康凱液體培養基中，42?44℃培養24?48小時。取麥康凱液體培養物劃線接種于麥康凱瓊脂培養基平板上，30?35℃培養18?72小時。

結果判斷：麥康凱瓊脂培養基平板上有菌落生長，應進行分離、純化及適宜的鑒定試驗，確證是否為大腸埃希菌；若麥康凱瓊脂培養基平板上沒有菌落生長，或雖有菌落生長但鑒定結果為陰性，判供試品未檢出大腸埃希菌。

7 白色念珠菌測定：根據自身產品特性及方法適用性試驗結果選擇適宜的方法，如采用常規法、薄膜過濾法等 ，以薄膜過濾法舉例說明：先以少量pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液潤濕濾膜，取1:10供試液10mL，加至100mL pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液中，混勻，立即過濾。再以pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗濾膜3次，沖洗量每次100mL，沖洗后取出濾膜，接種至100ml的沙氏葡萄糖液體培養基中，混勻，30～35℃培養3～5天。取上述培養物劃線接種于沙氏葡萄糖瓊脂培養基平板上，30～35℃培養24～48小時。若平板上有菌落生長，且呈乳白色或淡黃色，表面光滑有有濃酵母氣味，培養時間稍久則菌落增大，顏色變深、質地變硬或有褶皺；則挑取疑似菌落接種至念珠菌顯色培養基平板上，培養24～48小時（必要時延長至72小時），或采用其他適宜方法進一步鑒定。

若沙氏葡萄糖瓊脂培養基平板上有疑似菌落生長，且疑似菌在念珠菌顯色培養基平板上生長的菌落呈陽性反應，應進一步進行適宜的鑒定試驗，確證是否為白色念珠菌；若沙氏葡萄糖瓊脂培養基平板上沒有菌落生長，或雖有菌落生長但鑒定結果為陰性，或疑似菌在念珠菌顯色培養基平板上生長的菌落呈陰性反應，判供試品未檢出白色念珠菌。