女人被男人强扒内裤内衣,一区中文字幕在线观看,天天干夜夜做,亚洲成人av网址,亚洲性一区,国产精品亚洲综合,亚洲情一区,日韩一区二区在线免费

您當前的位置:檢測資訊 > 科研開發

生物分析中液相質譜(LC-MS)-基質效應

嘉峪檢測網        2025-06-23 08:20

1.基質效應是什么?

 

 

在基于液相-質譜(LC-MS)的方法分析生物樣本的藥物時,樣品的一些共同提取物可能對目標化合物的離子化效率產生影響,這個影響可以從儀器響應上觀察到,化合物的信號會增強或更常見的是被抑制,這種現象被稱為基質效應。

 

 

2.基質效應的常見原因有哪些?

 

 

在LC-MS/MS 分析過程中,生物樣本中的很多物質都可能產生基質效應。這些基質效應的物質一定存在于最終提取完成的樣品中并且在色譜系統中與化合物或(和)內標一起洗脫下來。然而,即使出現這些共同洗脫的物質,基質效應也并不一定會影響到分析方法,因為基質效應的大小取決于方法中使用的大氣壓離子化(API)類型(APCI相比ESI不易受到基質效應的影響)、干擾物的相對濃度及校正標樣或同位紊內標的抵消作用的大小。

 

 

引起基質效應的物質根據其來源可被分為內源性和外源性兩大類。

 

 

內源性主擾物:通常是存在于生物樣本中的一些有機物(蛋白質,脂肪,磷脂等)和無機物,可能還包括體內形成的一此代謝產物。目前,血漿是藥物研發行業用來進行樣本分析最常見的生物液體,一般含有高濃度的鹽,蛋白質、脂肪和磷脂,還有少量碳水化合物、多肽及其他有機化合物,所有這些組分都有可能導致基質效應。

 

 

比如磷脂,它可能是引起基質效應的主要原因之一,特別是通過一般的蛋白質沉淀(PPT)方法不能有效去除磷脂,可考慮使用LLE提取待測物,可以盡可能的消除磷脂帶來的影響。此外,由于脂類長鏈的疏水性,這些化合物一般在反相(RP)色譜條件下會比較晚地被洗脫出來,因此更容易與化合物一起被洗脫,而成為干擾的來源。與此相對的是高極性的鹽類,其在液相色譜(LC)中無法保留,一般會在化合物洗脫之前的死時間被洗脫下來,也可能產生基質效應。

 

 

外源性主擾物:自于樣品制備過程或者樣本處理中引入的外來物質。例如抗凝劑肝素鋰,用于樣品采集和儲存的容器中的增塑劑,緩沖液,離子對試劑以及藥物制劑中加入的輔料,特別是吐溫-80和PEG-400都可能引起基質效應

 

 

3.基質效應的產生機制是什么?

 

 

目前普遍認為基質效應的產生是質譜離子源中樣品離子化過程中,由內源性或外源性基質物質與目標化合物競爭電荷和中和離子化過程引起的。下面以最常用的ESI(電噴霧離子源)為例說明,液相分離的液態樣品在進入質譜分析前,必須在質譜的前端離子源將液態樣品去溶劑,并使得目標化合物帶上電荷形成分子離子,才能被四極桿質譜分離捕獲,檢測到樣品信號。

如圖2-18 液態樣品在毛細管噴針處經電場帶電后,液滴在電場力的作用下形成泰勒錐并在尖端形成一系列微小的帶點液滴,這些帶點液滴在離子源處受到輔助加熱氣(氮氣)的作用下快速蒸發,由于溶劑大量蒸發,原本小的帶電液滴表面積聚大量的帶電電荷發生庫倫爆炸的過程(見下圖),最終形成氣相的帶電分子離子進入質譜。

 

圖片

 

 

根據離子化過程的原理,基質效應產生可能機制有以下五種。

 

 

① 其中最主要的是電荷競爭機制,待測物在高濃度范圍時,在離子轉移到氣相中時,首先要求離子到達液滴的表面,而高濃度的基質組分可以限制待測物到達液滴表面并競爭其的帶電位置,例如一些疏水性的脂類或表面活性劑(吐溫類),流動相添加劑,離子對試劑等,從而抑制了待測物的離子化效率。

 

 

②另外有些基質組分還可以影響液滴的黏稠度和表面張力,減少了液滴的生成和接下來的溶劑蒸發,使得到達氣相的離子減少,信號被抑制。

 

 

③同時基質效應也可能取決于待測化合物的類別和極性,極性較高的化合物會集中在液滴的水相內部而不會留在表面,因此化合物的表面張力較低傾向于產生更多的離子抑制。

 

 

④基質中和流動相中非揮發性的組分也可能是有害的,它會在帶點液滴揮發的過程中于待測物形成共沉淀物的固態顆粒,使得信號抑制。

 

 

⑤在氣相中,待測物離子仍易受同時進入氣相的基質組分的影響,中性基質組分可能通過氣相中的質子傳遞反應與帶電的待測物競爭電荷,并且那些帶有較高堿度的氣相將會除掉待測物的質子,中和其電荷造成信號抑制。

 

 

雖然真正的基質效應抑制機制可能還不能完全明確,但一般來說基質效應是由競爭電荷或中和離子化過程引起的,相反的,當基質中含有增強離子化效率或氣相轉移的成分時會增強離子化過程,導致信號增強。

 

 

4.基質效應的評價方法

 

 

最常用的基質效應評價方法是在標準分析方法中比較提取樣品和純溶液的響應,其中化合物的絕對基質效應定義為基質效應因子(MF),其計算方式為:在不考慮回收率的情況下,比較待測物在基質組分存在和不含有基質組分的條件下響應,MF=提取后的空白基質加入待測物的響應/純溶液中待測物的響應。由于同位素內標的化學性質和待測物是一樣的,所以在樣品的提取和離子化過程中可以最大程度的抵消基質效應帶來的影響。

MF=1時,表明沒有基質效應。

MF<1時,代表離子抑制。

MF>1時,代表離子增強。

當檢測的樣品來自不同的個體的基質,而出現基質效應不均一導致的檢測結果誤差,所以分析中需要引入同一濃度的待測化合物的類似物或者同位素化合物作為內標錨定,所以這里引入了內標歸一化后的基質效應因子MFi,

根據指導原則,一般認為內標歸一化后的MFi的范圍在0.8-1.2時可以接受的,同時不同批基質測得的MFi的CV應當小于15%,當基質效應較為嚴重的情況下,建議使用同位素標記內標,由于同位素內標的化學性質和待測物是一樣的,所以在樣品的提取和離子化過程中可以最大程度的抵消基質效應帶來的影響。

 

 

5.如何避免和消除基質效應?

 

 

在了解基質效應產生的機制后,可以從以下五個方面考慮。

① 在樣品的前處理階段,可以選擇性的去除干擾物而減少基質效應,在常見的預處理方法主要是PPT,由于其方法過程簡單,適用待測物廣泛,成本低廉所以最為常用,但是對于樣品的凈化方面來說,PPT容易引入產生基質效應的物質,其中包括了很多基質組分和磷脂,當產生較為嚴重的基質效應時,最簡易的方法是更換適當提取劑,例如從甲醇體系換為乙腈體系,或者加入適當的酸,改變PH可以幫助減少基質效應。當PPT仍不能改善時,可以考慮LLE或者SPE的樣品提取手段,LLE可以很大程度上消除基質組分帶來的基質效應影響。

 

 

② 選擇合適的內標,利用內標抵消基質效應的影響時最常見的思路,如果內標和待測物受到同樣程度的抑制和增強的話,任何離子化條件的變化只會影響到絕對的峰面積,而不會影響待測物和內標的比值,因此可以抵消基質效應的影響,為了最大程度的抵消和降低基質效應,內標應當具有待測物類似的物理化學性質,離子化效率和色譜保留時間,所以在遇到基質效應嚴重,普通內標不能解決時,推薦使用同位素標記內標(SIL-IS)。

 

 

③ 調整合適的液相分離條件,由于基質效應的產生是基質組分與待測物同時洗脫,在離子源的中和抑制產生,所以通常可以修改色譜條件來降低基質效應的影響,通過改變梯度條件,流動相洗脫強度和PH都可以有效的改變待測物的保留時間,使其遠離離子抑制區域,通常PPT的方法中引起基質效應最為常見的是磷脂,而在進行高通量的項目時,磷脂容易在常規的C18柱潴留,使得基質效應越來越明顯,同時相比乙腈,磷脂在甲醇體系的溶解度更高,所以可以增加流動相或者洗液中甲醇比例來減少磷脂帶來的基質效應影響。

 

 

④ 減少進入LC-MS系統的樣品量或者對樣品進行稀釋后進樣,這是在不大幅更改方法來降低基質效應的常用方法,通常基質效應隨著進入的載樣量或樣品濃度的提高,而逐漸增加,只要靈敏度允許的范圍內,就可以很簡單的通過減少進樣量和進樣前稀釋樣品而減低基質效應。

 

 

⑤ 選擇合適的API離子源和離子極性,相對ESI源,APCI源可以更少受到基質效應的影響,如果待測物的熱穩定性好而且靈敏度不是問題,那么從ESI轉到APCI是有效降低基質效應的方法,同時,一般認為負離子模式選擇性更好,有更好的離子抑制,但是許多待測物無法在負離子模式下分析,而且離子化模式的選擇性也受制于方法的靈敏度,當離子源不能優化時,可以上訴上四個方面去改善。

分享到:

來源:Internet

主站蜘蛛池模板: 国产色婷婷精品综合在线播放| 国产日韩精品一区二区| 亚洲欧洲一二三区| 91麻豆精品国产91久久久无限制版| 国产乱人伦偷精品视频免下载| 日本免费电影一区二区| 日本精品视频一区二区三区 | 97人人模人人爽视频一区二区| 欧美在线精品一区| 欧美日韩精品不卡一区二区三区 | 少妇中文字幕乱码亚洲影视| 99精品国产免费久久| 91久久国产视频| 波多野结衣女教师电影| 久久99精品久久久久国产越南| 艳妇荡乳欲伦2| 又色又爽又大免费区欧美| 精品国产91久久久| 国产精品色在线网站 | 精品久久不卡| 17c国产精品一区二区| 日本二区在线播放| 国产精品亚洲一区二区三区| 91久久国语露脸精品国产高跟| 国产午夜精品一区二区三区四区| 午夜天堂在线| 国产一区在线精品| 夜夜躁日日躁狠狠久久av| 国产精品日韩在线观看| 海量av在线| 久久国产精品99国产精| 久久午夜无玛鲁丝片午夜精品| 国产欧美一区二区在线| 色婷婷久久一区二区三区麻豆| 日本精品一区二区三区在线观看视频 | 国产欧美视频一区二区| 欧美性猛交xxxxxⅹxx88| 久久精品99国产国产| 国产精品午夜一区二区三区视频| 国产在线观看二区| 搡少妇在线视频中文字幕| 19videosex性欧美69| 国产99视频精品免视看芒果| 久久99精| 亚洲欧洲国产伦综合| 处破大全欧美破苞二十三| 欧美日韩中文字幕三区| 国产欧美一区二区三区四区| 国产精品刺激对白麻豆99| 日韩免费一级视频| 国产高清在线精品一区二区三区| 国产午夜精品免费一区二区三区视频| 国产欧美久久一区二区三区| bbbbb女女女女女bbbbb国产| 国产日韩欧美中文字幕| 国产中文字幕91| 国产品久精国精产拍| 狠狠色噜噜狠狠狠狠69| 国产视频一区二区在线播放| 91秒拍国产福利一区| 99re国产精品视频| 国产一区二区高潮| 免费91麻豆精品国产自产在线观看| 日韩精品一区在线视频| 国产乱xxxxx97国语对白| 久久一级精品视频| 欧美一区二区性放荡片| 香蕉视频在线观看一区二区| 国产日韩欧美在线影视| 亚洲精品久久久久999中文字幕 | 午夜精品影视| 国产精品香蕉在线的人| 91一区在线| 亚洲精品91久久久久久| 狠狠躁日日躁狂躁夜夜躁| 国产在线拍偷自揄拍视频| 午夜av男人的天堂| 麻豆精品国产入口| 国产精品麻豆一区二区| 国产视频一区二区在线播放| ass美女的沟沟pics| 亚洲午夜精品一区二区三区电影院|