1. 前言

記住，沒有樣本的實驗室毫無意義！

除了細胞以外，蛋白質也是生物樣本的主力。尤其是很多課題對蛋白質的生物活性具有很高的要求，肽鏈沒破壞但三四級結構損壞了，一樣做不出結果。

以下將介紹三點蛋白質樣本的保存思路。

2. 低溫保存

蛋白質，尤其是酶，是非常脆的，稍微偏離一點體溫活性就會大打折扣，通常超過40℃就會失活。所以冷藏一般是短時間保存的必要手段。

如果放在常用的4℃冰箱，一定要在一周內用完；如果需長期保存，通常要保存于–20 ~ 5℃ ，如能在-70℃下保存當然最好。

因此需反復強調一點：按后續實驗用量分裝保存于適當溫度，一次取出立刻用完，避免反復凍融。

但是！有少數酶對低溫敏感，如鳥苷丙酮酸羧化酶在25℃時性質穩定，低溫下反而失活；過氧化氫酶要在0~4℃保存，如果冰凍反而失活；羧肽酶反復凍融會失活等。這些需要同學們事先去相關數據庫檢索確認。

此外還有一點debuff：蛋白質和酶越純越不穩定，溶液狀態比固態更不穩定，因此還需要其它手段。

3. 脫水，以干粉或結晶狀態保存

正如上一段所說：蛋白質和酶以固態存在比溶液要穩定得多。這就是為什么實驗室常備凍干機器。

通過冷凍干燥、真空干燥等手段將蛋白質樣本制成固態干粉制劑放在干燥劑中，可在低溫下長期保存超過一年。

以固態保存在于盡可能抑制游離水造成的化學反應與微生物活動：

● 抑制微生物活性，含水量應小于10% ；

● 抑制化學活性，含水量應小于3%。

此外要特別注意酶在凍干時往往會部分失活。

4. 使用保護劑保存

我們在培養細胞時會添加血清，各種反應體系需要添加buffer，自然的生物體內也具有精密的穩態環境，模擬這一穩態環境也可以長期保存蛋白質的活性，或者說自然功能。

● 惰性有機物：如糖類、脂肪酸、牛血清清蛋白、氨基酸、多元醇等，以保持穩定的疏水環境；

● 中性鹽：有一些蛋白質要求在高離子強度（1 ~ 4 mol/L或飽和的鹽溶液）的極性環境中才能保持活性。常用MgSO4，NaCl、(NH4)2SO4。等。以此方式保存的蛋白質在后續使用時要先進行脫鹽工序；

● 巰基試劑：一些蛋白質和酶的表面或內部含有半胱氨酸巰基，易被空氣中的氧緩慢氧化為磺酸或二硫化物而變性。如谷胱甘肽等蛋白是生物體內重要的還原劑，其還原性也是分子生物學的研究對象。為保持這一類蛋白的還原能力，保存時可加人半胱氨酸或巰基乙醇，起到一個替罪羊的作用，代替蛋白質自身被氧化。

5. 參考文獻

[1] 張建社，褚武英，陳韜，2009，蛋白質分離與純化技術，軍事醫學科學出版社