凋亡早期，細胞線粒體膜通透性增加，線粒體膜電位下降甚至消失。因此，線粒體膜電位的變化可以反映細胞凋亡水平。以下以JC-1為例介紹膜電位的檢測。

JC-1是一種常用的熒光探針，用于檢測線粒體膜電位的變化。當線粒體膜電位較高時，JC-1聚集在線粒體基質中形成紅色熒光；當線粒體膜電位較低時，JC-1不能聚集在線粒體基質中，呈現綠色熒光。

實驗步驟如下：

1、細胞準備（貼壁細胞）：將細胞傳至共聚焦皿，并緩慢搖動至均勻，培養至80-90%。

2、JC-1染色工作液配制：取50μL JC-1(200×)加入8mLPBS稀釋JC-1，再加入2mL JC-1染色緩沖液(5×)，混勻后即為JC-1染色工作液。

3、洗滌：棄去培養基，用PBS洗2-3次。

4、染色：加入1mL JC-1染色工作液，并充分混勻。

5、孵育：細胞培養箱中37℃孵育20min。

6、配制JC-1染色緩沖液(1×)：將JC-1染色緩沖液(5×)用PBS稀釋至1×，并置于冰上。

7、洗滌：孵育結束后，棄去上清，用JC-1染色緩沖液(1×)洗滌2-3次后，加入2mL PBS或培養基（可含血清）。

8、觀察拍照：熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡下觀察。激發波長通常為488nm，發射波長為紅色熒光590nm，綠色熒光530nm。細胞凋亡水平降低時，線粒體膜電位升高，即紅色熒光較強；當細胞凋亡水平升高時，線粒體膜電位降低，即紅色熒光減弱，或者呈現綠色熒光。

MELATONIN ATTENUATES RENAL ISCHEMIA-REPERFUSION INJURY BY REGULATING MITOCHONDRIAL DYNAMICS AND AUTOPHAGY THROUGH AMPK/DRP1. 

注意事項：

1、洗滌時，不可將槍頭對著細胞，以免沖掉細胞。

2、 實驗過程中，注意避光。

3、染色結束后，須用JC-1染色緩沖液(1×)洗滌，不可用PBS代替。

4、JC-1染料應完全溶解并混勻后使用，但要避免反復凍融。

5、JC-1染料在低溫下會凝固，可以在20-25℃水浴中溫育片刻至全部融解后再使用。

6、對于不同類型的細胞（如懸浮細胞或貼壁細胞），需要分別處理。例如，對于懸浮細胞，需先將細胞重懸于培養液中，孵育一段時間，再用JC-1染色緩沖液洗滌并離心沉淀細胞，最后用JC-1染色緩沖液重懸并觀察。