引言

藥品的安全性貫穿于藥物的臨床開發(fā)到上市后的整個生命周期。內(nèi)毒素是無菌注射劑安全性重要的指標(biāo)之一。傳統(tǒng)的內(nèi)毒素檢測法為鱟試劑法，但由于天然來源所帶來的質(zhì)量變異性和鱟資源缺乏，制藥行業(yè)逐步采用重組的試劑替代鱟試劑。本文對內(nèi)毒素檢測的法規(guī)要求進(jìn)行概述，并對重組C因子法的應(yīng)用進(jìn)行介紹。

1.鱟資源的現(xiàn)狀

由于傳統(tǒng)的內(nèi)毒素檢測法須使用鱟血提取的鱟試劑，這給鱟資源的保護(hù)帶來了極大的挑戰(zhàn)。全球現(xiàn)存的鱟資源已經(jīng)大幅度減少，過度捕撈提取鱟血用于鱟試劑的生產(chǎn)是全球鱟資源減少的主要原因之一。因此，各國和國際組織采取了一系列保護(hù)措施，通過立法禁止非法捕撈和貿(mào)易。即便如此，全球鱟資源的現(xiàn)狀依然十分嚴(yán)峻。這給未來依賴于鱟試劑的傳統(tǒng)內(nèi)毒素方法的可及性帶來了極大的不確定因素。

2.替代方案的必要性

重組C因子的方法替代鱟試劑法則成為了一種必然的選擇。重組C因子方法的原理與鱟試劑原理類似。不同的是，重組C因子的方法采用重組技術(shù)進(jìn)行C因子的生產(chǎn)而非直接從鱟血中提取。隨著重組蛋白技術(shù)的廣泛應(yīng)用，重組C因子的生產(chǎn)也日趨成熟，重組C因子方法也將逐步替代鱟試劑法。

3.法規(guī)

各國藥典均收載有內(nèi)毒素檢測法：

美國藥典USP<85>收載了基于鱟試劑的內(nèi)毒素檢測法，即凝膠法和光度法，該方法于2012年在ICH成員中協(xié)調(diào)一致。2024年1月美國藥典將重組C因子法起草進(jìn)的USP<86>完成了征求意見，將于2025年5月正式生效。

中國藥典同樣收載了兩種內(nèi)毒素檢測法，即1143所收載的傳統(tǒng)凝膠法和光度法和9251指導(dǎo)原則中收載的重組C因子的方法。此外中國藥典9301 注射劑安全性檢測法應(yīng)用指導(dǎo)原則公示稿將重組C因子加入，體現(xiàn)了中國藥典對重組C因子的進(jìn)一步認(rèn)可和積極推動。

歐洲藥典同樣收載了兩種內(nèi)毒素檢測法，即2.6.14的傳統(tǒng)凝膠法和光度法以及2.6.32重組C因子方法，兩種方法均為藥典方法，且出于歐洲缺乏鱟資源以及鱟資源保護(hù)的考慮，歐洲藥典推薦使用重組C因子的方法進(jìn)行內(nèi)毒素檢測。

4.重組C因子在藥品細(xì)菌內(nèi)毒素檢測中的特點(diǎn)

鱟試劑法和重組C因子方法在原理上就決定了二者具有可比性。兩種方法均基于C因子和內(nèi)毒素的結(jié)合，均采用內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品產(chǎn)生標(biāo)準(zhǔn)曲線、樣品反應(yīng)信號或反應(yīng)時間代入求解的外標(biāo)法概念進(jìn)行內(nèi)毒素含量的測定。

重組表達(dá)技術(shù)所制備的C因子比天然提取的鱟試劑質(zhì)量可控性更好，方法的可靠性更優(yōu)。

重組C因子的方法不需要通過活化凝固蛋白原催化底物級聯(lián)反應(yīng)，而鱟試劑的方法則需要通過此途徑，后者存在葡聚糖激活的旁路反應(yīng)，其可激活G因子并進(jìn)一步活化凝固蛋白原，從而產(chǎn)生假陽性結(jié)果。重組C因子的方法則從原理上避免了此現(xiàn)象。

5.結(jié)論

當(dāng)前制要使用鱟試劑的內(nèi)毒素檢測法。但由于鱟資源的缺乏，開發(fā)替代方法已成為必然。重組C因子法在原理上與鱟試劑法類似，二者檢測結(jié)果具有可比性，且重組C因子法能夠克服假陽性干擾，并且各國藥典均將其納入了藥典，預(yù)計(jì)未來重組C因子的方法將成為內(nèi)毒素檢測的主流方法。