摘  要 / Abstract

目的：考察廣東地區(qū)彩妝類化妝品微生物污染情況，發(fā)現(xiàn)風險問題，提出質(zhì)量監(jiān)管建議。方法：依據(jù)《化妝品安全技術(shù)規(guī)范（2015 年版）》對網(wǎng)售128 批彩妝類化妝品進行微生物檢測，對檢測結(jié)果進行統(tǒng)計分析， 剖析彩妝類化妝品的微生物污染風險情況。結(jié)果：128 批彩妝類化妝品微生物檢測合格率為99.2%，控制菌不合格率為0.78%。1 批面部彩妝類樣品（氣墊粉底液）不合格，不合格項目為菌落總數(shù)、銅綠假單胞菌。霉菌和酵母菌總數(shù)未出現(xiàn)超標情況，耐熱大腸菌群、金黃色葡萄球菌均未檢出。結(jié)論：基于發(fā)現(xiàn)的彩妝類化妝品質(zhì)量安全問題，建議監(jiān)管部門加強對網(wǎng)售彩妝類化妝品的監(jiān)管力度，完善相關(guān)法規(guī)、加強檢驗方法研究，保障化妝品質(zhì)量安全。

Objective: Investigate the microbial contamination of makeup cosmetics in the Guangdong area, identify risk problems, and propose suggestions for quality control. Methods: According to the Safety and Technical Standards for Cosmetics (2015 edition), 128 batches of cosmetics sold online were tested for microbial contamination. The test results were statistically analyzed to identify the quality issues of makeup cosmetics. Results: The qualified rate was 99.2% and the unqualified rate of control bacteria was 0.78% among the 128 batches of makeup cosmetics. One batch of facial makeup samples (air cushion foundation) was unqualified. The unqualified items were the total number of bacterial colonies and pseudomonas aeruginosa. The total number of molds and yeasts did not exceed the standard, and the thermostable coliforms and staphylococcus aureus were not detected. Conclusion: Based on the quality and safety issues found, it is suggested that the regulatory authorities strengthen the supervision of online sales of makeup cosmetics, improve relevant laws and regulations, enhance research on experimental methods, and ensure the quality and safety of cosmetics.

關(guān) 鍵 詞 / Key words

微生物檢測；彩妝類化妝品；污染風險；建議監(jiān)管

microbial detection; makeup cosmetics; risk assessment; regulatory recommendations

在國民經(jīng)濟持續(xù)增長和消費升級的背景下， 化妝品消費需求不斷增長，市場規(guī)模逐年攀升， 我國已成為世界第二大化妝品消費市場，而廣東省是我國最主要的化妝品生產(chǎn)地區(qū)[1-2]。近年來， 化妝品線上銷售業(yè)態(tài)規(guī)模不斷增長，但也暴露出很多問題，相關(guān)報道層出不窮，使得網(wǎng)售化妝品的監(jiān)管工作面臨著巨大挑戰(zhàn)[3]。2020 年市售化妝品調(diào)查表明[4]，在廣東省生產(chǎn)的化妝品中，不合格產(chǎn)品占國產(chǎn)不合格產(chǎn)品總數(shù)的86.67%，不合格問題包括微生物超標等。曹婷婷等[5] 對508 批化妝品進行微生物檢驗，發(fā)現(xiàn)化妝品超標問題均為菌落總數(shù)相關(guān)項目。據(jù)廣東省化妝品抽樣檢驗信息（2023 年第8 期）顯示[6]，全省抽樣1000 多批次，在不合格樣品中，菌落總數(shù)、霉菌和酵母菌超標樣品占4.2%。造成化妝品微生物污染的主要原因是化妝品中含有豐富的營養(yǎng)成分， 如蛋白質(zhì)、脂肪、維生素和水分，為微生物的生長和繁殖提供了有利的環(huán)境。微生物污染不僅會影響化妝品的質(zhì)量，降低使用安全性，其中微生物產(chǎn)生的毒性物質(zhì)還會對使用者的健康造成危害[7]。

本文總結(jié)了2021 年1 月至2023 年7 月國家藥品監(jiān)督管理局（以下簡稱：國家藥監(jiān)局）發(fā)布的不合格化妝品通告結(jié)果[8]，2021 年彩妝類化妝品的突出問題是標簽標識，占7.43% ；2022 年彩妝類化妝品的主要問題是限用物質(zhì)超標，指（趾）甲油類檢出禁用組分。綜合來看，2021~2022 年彩妝類化妝品未檢出微生物超標問題。然而，有研究指出[9]，企業(yè)采用依據(jù)《化妝品安全技術(shù)規(guī)范（2015 版）》及歐盟標準制定的標準方法驗證睫毛膏、粉底液微生物檢查情況，發(fā)現(xiàn)常規(guī)法進行微生物檢驗可能會造成“漏檢”現(xiàn)象。Bashir A 等[10] 調(diào)查了彩妝類化妝品的微生物污染情況，證實化妝品微生物污染情況較為普遍。

隨著互聯(lián)網(wǎng)的普及和電商平臺的快速發(fā)展， 彩妝類化妝品的銷售渠道也在發(fā)生改變。線上銷售已經(jīng)成為彩妝市場的一個重要渠道，但同時也存在一些問題，如虛假宣傳、產(chǎn)品質(zhì)量難以保證等。

化妝品監(jiān)督抽檢是確保化妝品質(zhì)量安全的重要手段之一。通過定期對市場上銷售的化妝品進行抽查檢驗，可以及時發(fā)現(xiàn)和防控質(zhì)量安全風險，有效打擊非法添加等行為，進一步規(guī)范行業(yè)管理，促進化妝品行業(yè)健康、高質(zhì)量發(fā)展[11]。定期開展化妝品微生物風險監(jiān)督工作，可提高微生物污染發(fā)現(xiàn)率， 更好地發(fā)揮監(jiān)管效能，有助于落實風險管理理念， 進一步保障公眾用妝安全。本文以產(chǎn)地為廣東省的網(wǎng)售128 批彩妝類化妝品進行了微生物指標檢測， 對檢測結(jié)果進行分析，評估微生物污染風險，并為化妝品質(zhì)量控制提出監(jiān)管建議。

1、材料與方法

1.1 樣品

本研究主要通過線上進行樣本采集，為全面覆蓋化妝品網(wǎng)絡(luò)銷售的主流渠道和各類新興網(wǎng)絡(luò)平臺， 樣本采集平臺淘寶網(wǎng)、天貓、京東、蘇寧易購、拼多多、抖音電商和小紅書等。采集的樣品均為駐留類產(chǎn)品， 產(chǎn)品標示的生產(chǎn)企業(yè)產(chǎn)地均為廣東省轄區(qū)。共采集樣品128 批，其中面部彩妝類50 批、口唇類48 批、指（趾）甲類30 批。

1.2 試劑

卵磷脂- 吐溫80 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（廣東環(huán)凱微生物科技有限公司，批號1106925）、孟加拉紅培養(yǎng)基（廣東環(huán)凱微生物科技有限公司，批號1115175）、SCDLP 液體培養(yǎng)基（廣東環(huán)凱微生物科技有限公司，批號1116541）、雙倍乳糖膽鹽（含中和劑）培養(yǎng)基（廣東環(huán)凱微生物科技有限公司， 批號1110241）、伊紅美藍（EMB）瓊脂培養(yǎng)基（廣東環(huán)凱微生物科技有限公司，批號1113431）、十六烷基三甲基溴化銨培養(yǎng)基（廣東環(huán)凱微生物科技有限公司，批號1106761）、Baird-Parker 平板（廣東環(huán)凱微生物科技有限公司，批號1106925）、胰酪大豆胨（TSA）瓊脂培養(yǎng)基（北京陸橋技術(shù)股份有限公司，批號221213），氯化鈉（上海阿拉丁生化科技股份有限公司，批號：C111533）。

1.3 儀器

Microflex LT/SH smart 型微生物鑒定質(zhì)譜系統(tǒng)（美國布魯克公司），MSC Advantage 1.8 型生物安全柜（美國賽默飛公司），BF400 型恒溫培養(yǎng)箱（德國賓德公司），BIST-AD 型脈動真空滅菌器（山東新華醫(yī)療器械股份有限公司），MS105 型電子天平（梅特勒- 托利多儀器上海有限公司），HTY- 761 型勻漿儀（浙江泰林生物技術(shù)股份有限公司）。

1.4 方法

依照《化妝品安全技術(shù)規(guī)范（2015 年版）》第五章[12]，對128 批樣品進行微生物檢測。從2 個以上包裝中取樣品10g，放到滅菌的勻漿杯中，加10ml 滅菌液體石蠟，勻漿成黏稠狀，再加入10ml 滅菌吐溫80，勻漿至完全混勻，加入70ml 滅菌生理鹽水， 再次勻漿至充分混合，制成1∶10 稀釋液進行實驗。

1.4.1 菌落總數(shù)

取1∶10 稀釋液1ml，用滅菌生理鹽水稀釋成1∶100 稀釋液，取1∶10、1∶100 的稀釋液各1ml 接種至卵磷脂- 吐溫80 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，平行制備兩個平皿，36.0℃、48h 依法培養(yǎng)。

1.4.2 霉菌和酵母菌總數(shù)

取1∶10 稀釋液1ml，用滅菌生理鹽水稀釋成1∶100 稀釋液，取1∶10，1∶100 的稀釋液各1ml 接種至孟加拉紅培養(yǎng)基，平行制備兩個平皿， 28.0℃培養(yǎng)5d。

1.4.3 耐熱大腸菌群

取1∶10 稀釋液10ml，接種至10ml 雙倍乳糖膽鹽（含中和劑）培養(yǎng)基中，置（44.5±0.5）℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24~48h，出現(xiàn)產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則取培養(yǎng)物劃線接種于伊紅美藍瓊脂平板，置36℃培養(yǎng)24h。

1.4.4 金黃色葡萄球菌

取1∶10 稀釋液10ml，加入到90ml SCDLP 液體培養(yǎng)基中， 置（36±1）℃ 培養(yǎng)箱， 培養(yǎng)（24±2）h 后，取一環(huán)增菌液劃線于Baird- Parker 平板，于（36±1）℃培養(yǎng)48h。

1.4.5 銅綠假單胞菌

取1∶10 稀釋液10ml，加入到90ml SCDLP 液體培養(yǎng)基中，置（36±1）℃增菌培養(yǎng)18~24h 后， 取一環(huán)增菌液劃線于十六烷基三甲基溴化銨瓊脂平板，于（36±1）℃培養(yǎng)18~24h。

1.5 判定標準

判定依據(jù)為《化妝品安全技術(shù)規(guī)范（2 0 1 5 年版）》[12] 第一章化妝品安全通用要求，即口唇化妝品菌落總數(shù)≤ 500CFU/g（ml），其他化妝品菌落總數(shù)≤1000CFU/g（ml）；霉菌和酵母菌總數(shù)≤100CFU/g（ml）；耐熱大腸菌群、金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌均不得檢出。

1.6 質(zhì)譜鑒定

從有菌落生長的平板上挑取單個菌落，分純至胰酪大豆胨（TSA）瓊脂培養(yǎng)基上，挑取分純菌落， 使用Microflex LT/SH smart 型微生物鑒定質(zhì)譜系統(tǒng)進行鑒定。

2、結(jié)    果

2.1 微生物污染狀況

本研究共檢測128 批彩妝類化妝品，其中50 批面部彩妝中有1 批樣不合格。彩妝類化妝品微生物合格率總計99.2%，見表1。

 2.1.1 微生物計數(shù)結(jié)果

菌落總數(shù)共9 批有菌生長，包括面部彩妝類7批、口唇類1 批、指（趾）甲類1 批，合格樣品結(jié)果介于15~210CFU/g ；1 批菌落總數(shù)超標，計數(shù)結(jié)果為7200CFU/g，是標準規(guī)定（1000CFU/g）的7.2 倍。霉菌和酵母菌總數(shù)有3 批面部彩妝類有菌生長，結(jié)果介于10~20CFU/g，未發(fā)現(xiàn)超標現(xiàn)象， 見表2。

2.1.2 控制菌結(jié)果

128 批樣品中，有1 批面部彩妝類化妝品檢出銅綠假單胞菌，耐熱大腸菌群、金黃色葡萄球菌均未檢出。彩妝類化妝品微生物控制菌檢出率為0.78%，見表3。

2.2 鑒定結(jié)果

金黃色葡萄球菌項下的Baird-Parker 瓊脂平板有10 批樣品有菌生長，銅綠假單胞菌項下的十六烷基三甲基溴化銨瓊脂平板有7 批樣品有菌生長，分別分純在胰酪大豆胨（TSA）瓊脂培養(yǎng)基上，挑取分純菌落進行鑒定，見表4。

2.3 微生物污染風險

化妝品的組分配方、生產(chǎn)工藝以及消費使用等環(huán)節(jié)中可能存在安全風險因素，這些因素對消費者的健康危害包括：感染性疾病、局部損傷、過敏和全身毒性作用等[13]。為了提高化妝品的安全性和有效性，需要從微生物污染情況以及防腐挑戰(zhàn)試驗等多個方面進行風險評估和檢測控制。微生物污染是化妝品安全評估中非常重要的一個指標，常見的微生物污染包括細菌、霉菌和酵母菌等。

本研究中，微生物計數(shù)結(jié)果有1 批面部彩妝類產(chǎn)品（氣墊粉底液）不合格，菌落總數(shù)是標準規(guī)定的7.2 倍。其余長菌的8 批樣品中，菌落總數(shù)結(jié)果介于15~210CFU/g。霉菌和酵母菌總數(shù)雖未出現(xiàn)超標現(xiàn)象，但有3 批面部彩妝類結(jié)果介于10~20CFU/g，表明這幾批產(chǎn)品均存在微生物污染情況，使用過程中會存在安全隱患。面部彩妝類長菌情況尤為突出，可能與樣品基質(zhì)、水活度有關(guān)。水分有利于微生物生長繁殖，是導致樣品中微生物污染的一個重要原因。同時，企業(yè)生產(chǎn)環(huán)境不達標或工藝不合理也可能增加污染機會，導致產(chǎn)品的微生物學指標超標[4]。從2018~2020 年的文獻數(shù)據(jù)來看[14]，化妝品的微生物指標不合格率為0.79%， 彩妝類化妝品不合格率為0.30%，不合格的主要原因在于菌落總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)的超標。由此可見，菌落總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)是導致化妝品質(zhì)量安全的高風險項目，應(yīng)重點關(guān)注。

控制菌結(jié)果表明，1 批面部彩妝類產(chǎn)品（氣墊粉底液）檢出銅綠假單胞菌，與菌落總數(shù)超標的是同一批樣品，檢出銅綠假單胞菌也是導致其菌落總數(shù)超標的原因之一。銅綠假單胞菌會引起傷口感染，也可引起褥瘡、膿腫、化膿性中耳炎等感染性疾病，該菌如感染眼睛將導致急性眼角膜潰爛和失明，亦可通過血液散播，引發(fā)菌血癥和敗血癥。銅綠假單胞菌和金黃色葡萄球菌都是具有潛在風險的機會致病菌[15]， 本研究雖未檢出金黃色葡萄球菌，但金黃色葡萄球菌分布廣泛，具有較強的耐藥性，是葡萄球菌屬中對人類致病力最強的一種細菌，能夠引起人體局部化膿性病灶，導致敗血癥[16]，也應(yīng)重點關(guān)注。化妝品中控制菌檢出率較高的以金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌為主，這些控制菌的存在對化妝品的安全性構(gòu)成了威脅，可能導致使用者感染或引發(fā)皮膚問題。因此，對化妝品的生產(chǎn)全程進行致病微生物監(jiān)控十分必要，通過有效的監(jiān)控措施，可及時發(fā)現(xiàn)并控制微生物污染， 確保產(chǎn)品的安全和質(zhì)量。

彩妝類產(chǎn)品芽孢桿菌的檢出率最高，鑒定結(jié)果顯示多達16 株菌，見表4。蠟樣芽孢桿菌作為一種條件致病菌，是檢出率最高的微生物，該菌形成的熱穩(wěn)定性孢子具有耐熱、耐干燥、耐部分有毒化學物質(zhì)及紫外線與γ 射線等不利因素的特點[17]。蠟樣芽孢桿菌的致病性，與溶血素、磷脂酶和壞死性腸毒素等組織破壞性外源酶的產(chǎn)生密切相關(guān)，其在動物模型中具有溶血、細胞毒性、皮膚壞死和增加血管通透性[18]。若面部彩妝類產(chǎn)品中存在蠟樣芽孢桿菌，同時使用者有皮膚損傷或眼部損傷的情況，蠟樣芽孢桿菌則可能通過日常使用進入皮膚或眼部的損傷部位，并產(chǎn)生溶血素、磷脂酶、金屬蛋白酶及膠原酶等毒素，造成周圍組織損害，存在皮膚壞死或眼內(nèi)炎的風險[19-21]。若口唇類彩妝產(chǎn)品中存在蠟樣芽孢桿菌，則可能通過進食進入腸道，并產(chǎn)生溶血性腸毒素、非溶血性腸毒素、細胞毒素K 等毒素，造成腹瀉或嘔吐，存在胃腸炎的風險[22-23]。蠟樣芽孢桿菌的芽孢能耐受100℃、30min，而干熱滅菌需120℃、60min 才能殺死， 且對多數(shù)防腐消毒試劑有耐受性，因此芽孢易留存在產(chǎn)品中。有文獻報道部分種類的蠟樣芽孢桿菌具有致病性[24]，因此，應(yīng)對彩妝類化妝品中檢出的蠟樣芽孢桿菌進行鑒定分型后，評估其致病性和安全性。

3、討    論

本研究對面部彩妝類、口唇類、指（趾）甲類128 批樣品檢測，結(jié)果顯示，彩妝類化妝品微生物指標合格率為99.2%。其中127 批彩妝產(chǎn)品合格， 1 批面部彩妝類產(chǎn)品（氣墊粉底液）不合格，不合格項為菌落總數(shù)和銅綠假單胞菌。對鑒定結(jié)果進行分析，發(fā)現(xiàn)5.5% 的彩妝類樣品在金黃色葡萄球菌或銅綠假單胞菌項目下的平板有檢出菌，但在菌落總數(shù)項下的卵磷脂- 吐溫80 瓊脂平板上無菌生長。這種情況表明，使用卵磷脂- 吐溫80 瓊脂平板進行檢驗可能存在微生物漏檢的風險，該平板的靈敏度需要進一步研究。在有菌生長的平板中，面部彩妝類、口唇類均有蠟樣芽孢桿菌污染的情況，蠟樣芽孢桿菌的毒力因子與細菌致病性的強弱密切相關(guān)， 蠟樣芽孢桿菌產(chǎn)生的毒素不僅對細胞具有毒性作用， 還會對宿主的免疫系統(tǒng)等產(chǎn)生影響[24]。

本研究結(jié)果顯示彩妝類化妝品微生物控制菌檢出率為0.78%。陳磊等[25] 對美容修飾類化妝品進行了方法學研究，提出在檢驗前，應(yīng)進行微生物方法驗證，以準確去除防腐劑和其他抑菌成分的影響， 提高陽性檢出率。化妝品中控制菌檢查易造成漏檢現(xiàn)象，可能與現(xiàn)有檢驗方法的不完善、市售培養(yǎng)基質(zhì)量問題以及化妝品防腐劑對檢測菌的干擾等因素有關(guān)。

4、監(jiān)管建議

化妝品的微生物學指標是衡量化妝品質(zhì)量安全的重要項目，對保證化妝品質(zhì)量安全具有重要意義[26]。針對以上問題，本文探索性的提出以下建議。

（1）建議監(jiān)管部門加強化妝品監(jiān)督抽檢工作的力度，提高抽檢的覆蓋率和檢驗的準確性；修訂和完善檢測規(guī)范，參考《中國藥典》建立方法適用性試驗、增加陽性對照試驗，針對不同化妝品基質(zhì)優(yōu)化檢查方法，以提高陽性檢出率；加強對化妝品儲運環(huán)節(jié)的監(jiān)管和不良反應(yīng)監(jiān)測，確保產(chǎn)品在整個生命周期都能夠符合相關(guān)法規(guī)和標準的要求。

（2）建議引入新型微生物快速檢測技術(shù)，更準確、高效地檢測化妝品中的微生物和其他有害物質(zhì)， 確保產(chǎn)品的安全性和可靠性。加強對國際化妝品技術(shù)標準的動態(tài)追蹤，及時了解和掌握國際標準的最新動態(tài)和趨勢，有助于我國化妝品行業(yè)及時調(diào)整產(chǎn)品研發(fā)和生產(chǎn)策略。

（3）建議化妝品企業(yè)在生產(chǎn)過程中，從原料挑選、檢測、包裝各個工序進行控制，加強環(huán)境、設(shè)備的殺菌消毒，提高人員無菌意識；產(chǎn)品配方可采用復合型防腐劑提高抑菌活性，抑制微生物繁殖， 開發(fā)具有抗菌特性的成分代替化學防腐劑，提高產(chǎn)品的安全性和有效性。

（4）建議培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家建立嚴格的質(zhì)量控制體系、追溯體系，遵循生產(chǎn)工藝，確保培養(yǎng)基的質(zhì)量和安全；化妝品生產(chǎn)經(jīng)營者也應(yīng)加強自律，嚴格遵守相關(guān)法律法規(guī)和標準，確保產(chǎn)品的安全性和質(zhì)量可靠性。

本文通過分析微生物污染對化妝品質(zhì)量安全的影響，總結(jié)了彩妝類化妝品質(zhì)量安全風險點，并探討了導致這些風險的主要原因，為預防和減少化妝品微生物污染提供了參考依據(jù)，為有效降低化妝品質(zhì)量安全風險提供了建議。監(jiān)管部門應(yīng)持續(xù)完善相關(guān)法律法規(guī)，加強對生產(chǎn)企業(yè)監(jiān)管力度，有效預防化妝品污染，提高對微生物檢驗檢測能力，持續(xù)促進化妝品行業(yè)的健康發(fā)展，保障消費者用妝安全。

引用本文

孫曉,王娜娜,劉靜怡,劉豐,江坤*.彩妝類化妝品微生物污染風險及監(jiān)管建議[J].《化妝品與皮膚科學》網(wǎng)絡(luò)專刊,2024(1):44-51.