1、 在做生物指示劑（BI）芽孢含量測試時，如何確保生物指示劑芽孢條完全振碎？【原問題：菌片怎樣打碎？】

答：1）在陽性對照室生物安全柜中，將BI放進裝有5mL無菌純化水和4顆4-6mm直徑玻璃珠的試管內，浸泡不少于15分鐘。

2）將試管在振蕩器上振蕩，直到BI變成紙漿，再加入5mL無菌水，振蕩1分鐘，混勻。

3）不同廠家的BI振碎的時間不一樣，試驗過程應確保濾紙條被完全振碎。

2、 滅菌后的自含式生物指示劑在48小時內培養基變黃,48小時后又變綠了，這種情況應該怎么判定結果？

答：結果判定為陽性。只要培養基變黃，應該按照陽性處理，停止繼續培養。

3、 滅菌過程結束將生物指示劑(BI)取出來，到培養，這個時間間隔需要怎么去確認？

答：ISO11138-7:2019條款9.2.2明確規定“從裝載中去除的BI應在經確認的規定時間內取出，其后，應在規定的時間內通過無菌技術把BI轉種到合適的生長培養基上，并在恰當的溫度下進行培養。”具體確認方法，可以在日常滅菌中出柜選擇不同時間間隔節點的送檢時間，例如出柜后0時刻、8小時、16小時、24小時、48小時等，每個時間節點重復做三批次及以上，觀察BI培養結果是否有影響。

4、 在菌片的7天培養觀察期內，菌片培養陽性應該是白色渾濁，但是再培養幾天變紅了，這種情況正常嗎？

答：環氧乙烷滅菌生物指示劑的菌片含有萎縮芽孢桿菌芽孢，培養后培養基的顏色由白色（渾濁）變為紅色是正常現象。因為萎縮芽孢桿菌（ATCC9372）的顯著特征是在含有有機氮源的培養基上生長時產生褐色或棕紅色色素，因此隨著培養時間的延長，培養基顏色會由白色（渾濁）變為紅色。

5、 使用方購買供應商的生物指示劑（BI）時需要供應商提供哪些資質證明？

答：使用方可要求生物指示劑供應商提供：1）消毒產品生產企業衛生許可證；2）安全評價報告；3）“全國消毒產品網上備案信息服務平臺”備案信息。

6、 菌片陽性觀察日期應該是出現渾濁就觀察結束？還是需要繼續觀察七天?

答：ISO11138-1：2017中的7.3.2推薦了對于已確認過程中的生物指示劑的培養時間為7天。用戶應考慮對生物指示劑制造商推薦的培養時間進行確認，如生物指示劑制造商在使用說明書中明確規定產品在7天內經培養后為陽性，不要繼續培養已經呈陽性的生物指示劑，可以結束對生物指示劑的培養和觀察。

7、 生物指示劑(BI)紙片機械破碎，這里的機械是用容器裝好放在振蕩器上振蕩幾分鐘達到破碎效果嗎？

答：是的。在陽性對照室生物安全柜中，將BI放進裝有5mL無菌純化水和4顆4-6mm直徑玻璃珠的試管內，浸泡不少于15分鐘。然后將試管在振蕩器上振蕩，直到BI變成紙漿，再加入5mL無菌水，振蕩1分鐘。不同廠家的BI振碎的時間不一樣，最終都要是濾紙條振碎為止。

8、 生物指示劑滅菌后放置時間沒有明確規定的話，可以連續幾天滅菌后的實驗攢在一起做實驗嗎？是否可以不用每天去做無菌試驗?

答：ISO11138-7:2019條款9.2.2明確規定“從裝載中去除的生物指示劑應在經確認的規定時間內取出，其后，應在規定的時間內通過無菌技術把生物指示劑轉種到合適的生長培養基上，并在恰當的溫度下進行培養。”具體確認方法，可以在日常滅菌中出柜選擇不同時間間隔節點的送檢時間，例如出柜后0時刻、8小時、16小時、24小時、48小時等，每個時間節點重復做三批次及以上，觀察BI培養結果是否有影響。如果這個時間間隔貴司有經過確認證明不會對培養結果造成影響，那么可以一起檢測。如果沒有，則應盡快進行培養。

9、 如果多個滅菌批一起做實驗，陽性是不是只做一份就好？

答：針對此問題，標準ISO11138-1：2017和ISO11138-7:2019無明確要求。建議如下：

1）如果在同一天同一個時間段同時檢測經過滅菌的多個批次生物指示劑，使用的是同一生產批號的環氧乙烷滅菌生物指示劑，陽性對照需要使用與滅菌批相同批次的生物指示劑，可以只做一份陽性對照。

2）如果不在同一天或者不同時間段（例如：上午/下午）分開檢測，建議各準備一份陽性對照。

3）多個滅菌批使用的生物指示劑有多個生產批號的情況，建議檢測時需要有對應多個生產批號的生物指示劑作為陽性對照。

4）如果不在同一天或者不同時間段（例如：上午/下午）分開檢測，建議各準備一份陽性對照。

5）多個滅菌批使用的生物指示劑有多個生產批號的情況，建議檢測時需要有對應多個生產批號的生物指示劑作為陽性對照。

10、 生物指示劑的陽性一定要拿到陽性對照室做嗎？

答：1）自含式生物指示劑：可以在一般環境條件下將陽性對照的生物指示劑用配套的夾具擠破指示劑內部安瓿管，甩動指示劑使培養基充分浸沒底部菌片，在規定條件下培養；

2）菌片式生物指示劑：應在陽性對照室生物安全柜中，采用無菌操作手段將菌片轉入到液體培養基中，保證菌片完全浸沒，最后在規定條件下培養。