近日，國(guó)家藥監(jiān)局批準(zhǔn)《化妝品中非那雄胺等10種組分的測(cè)定》化妝品補(bǔ)充檢驗(yàn)方法，內(nèi)容如下：

化妝品中非那雄胺等10種組分的測(cè)定

（BJH 202401）

1、 范圍

本方法規(guī)定了化妝品中羥基氟他胺、非那雄胺、尼魯米特、比卡魯胺、氟羅地爾、氟他胺、環(huán)丙孕酮、醋酸環(huán)丙孕酮、度他雄胺、依立雄胺的測(cè)定方法。

本方法適用于膏霜乳類、液體類（水、油）、凝膠類、蠟基類、粉劑類化妝品中非那雄胺等10種組分的定性和定量測(cè)定。

2、原理

樣品經(jīng)50%乙腈超聲提取后，采用高效液相色譜儀分離，質(zhì)譜檢測(cè)器檢測(cè)。根據(jù)保留時(shí)間和特征離子對(duì)的相對(duì)豐度比定性，定量離子對(duì)峰面積定量，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量。

3 、試劑材料

除另有規(guī)定外，本方法中所用試劑均為分析純及以上規(guī)格，水為符合GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。

3.1 甲醇，色譜純。

3.2 乙腈，色譜純。

3.3 50%乙腈溶液：取500 mL乙腈（3.2），用水稀釋至1000 mL，混勻。

3.4 甲酸，色譜純。

3.5 0.01%甲酸溶液：取0.1 mL甲酸（3.4），用水稀釋至1000 mL，混勻。

3.6 標(biāo)準(zhǔn)品：羥基氟他胺、非那雄胺、尼魯米特、比卡魯胺、氟他胺、環(huán)丙孕酮、醋酸環(huán)丙孕酮、度他雄胺、依立雄胺的標(biāo)準(zhǔn)品，純度均≥98%，氟羅地爾的標(biāo)準(zhǔn)品，純度＞95%。標(biāo)準(zhǔn)品的中文名稱、英文名稱、CAS號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量、結(jié)構(gòu)式詳見附錄A中的表A.1。

3.7標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：稱取羥基氟他胺、非那雄胺、尼魯米特、比卡魯胺、氟羅地爾、氟他胺、環(huán)丙孕酮、醋酸環(huán)丙孕酮、度他雄胺、依立雄胺標(biāo)準(zhǔn)品（3.6）各10 mg（精確到0.00001 g），分別置于10 mL棕色容量瓶中，用甲醇（3.1）溶解并定容至刻度，搖勻。作為羥基氟他胺等10種組分單標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液均置于-18 ℃冰箱中避光保存。各組分儲(chǔ)備溶液濃度見表1。

3.8 混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：準(zhǔn)確移取羥基氟他胺、非那雄胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（3.7）各0.5 mL，尼魯米特、比卡魯胺、氟羅地爾、氟他胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（3.7）各1.0 mL，環(huán)丙孕酮、醋酸環(huán)丙孕酮、度他雄胺、依立雄胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（3.7）各2.0 mL置于同一200 mL棕色容量瓶中，用50%乙腈溶液（3.3）定容至刻度，搖勻，制成混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。置于-18 ℃冰箱中避光保存。各組分標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度見表1。

4、 儀器和設(shè)備

4.1 高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀。

4.2 分析天平：感量0.0001 g和0.00001 g。

4.3 超聲波清洗器。

4.4 渦旋混合儀。

4.5 高速離心機(jī)。

4.6 微孔濾膜：孔徑為0.22 μm有機(jī)相微孔濾膜。

5、 試樣制備與保存

樣品應(yīng)按照標(biāo)簽標(biāo)示的貯存條件進(jìn)行保存。取樣前，應(yīng)檢查封口的完整性，觀察樣品的性狀和特征，并使樣品混勻。打開包裝后，應(yīng)盡可能快地取出所要測(cè)定部分進(jìn)行分析，取樣后，應(yīng)將樣品進(jìn)行密封保存。

6、 分析步驟

6.1 篩查用混合標(biāo)準(zhǔn)溶液

準(zhǔn)確吸取混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（3.8）適量，用50%乙腈溶液（3.3）進(jìn)行稀釋，配制成篩查用混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。各組分篩查用混合標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度見表1。

6.2 空白基質(zhì)提取液

稱取空白試樣0.2 g（精確到0.0001 g），置于20 mL具塞比色管中，自“加入50%乙腈溶液（3.3）15 mL”起與樣品同法處理（6.5），作為空白基質(zhì)提取液。

6.3 基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液

準(zhǔn)確吸取混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（3.8）2 mL，置于10 mL棕色容量瓶中，用空白基質(zhì)提取液（6.2）稀釋至刻度，搖勻，制成基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液。各組分基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液濃度見表1。

表1  非那雄胺等10種組分各溶液濃度

6.4 基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液

分別精密量取基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（6.3）0.1 mL、0.25 mL、0.5 mL、0.75 mL、1.0 mL至10 mL容量瓶中，用空白基質(zhì)提取液（6.2）配制得基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，各組分基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液濃度見表2。基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配。

表2  非那雄胺等10種組分的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液濃度

6.5 樣品處理

稱取樣品0.2 g（精確至0.0001 g），置于20 mL具塞比色管中，加入50%乙腈溶液（3.3）15 mL，渦旋30 s，使分散均勻，超聲20 min，靜置至室溫，用50%乙腈溶液（3.3）定容至刻度，搖勻，以10000 r/min轉(zhuǎn)速離心5 min，吸取上清液，經(jīng)0.22 μm濾膜過(guò)濾后，濾液作為供試品溶液備用（供試品溶液可根據(jù)實(shí)際濃度進(jìn)行適當(dāng)稀釋）。

6.6 儀器參考條件

6.6.1色譜條件

色譜柱：C18柱（100 mm×2.1 mm，3.5 μm），或等效色譜柱；

流動(dòng)相：A為0.01%甲酸溶液（3.5），B為甲醇（3.1）。梯度洗脫程序見表3；

流速：0.3 mL/min；

柱溫：25 ℃；

進(jìn)樣量：1μL。

表3  梯度洗脫程序

6.6.2 質(zhì)譜條件

離子源：電噴霧離子源（ESI源）；

監(jiān)測(cè)模式：正離子、負(fù)離子多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（MRM），監(jiān)測(cè)離子對(duì)及相關(guān)參數(shù)設(shè)定見表4。

表4  非那雄胺等10種組分監(jiān)測(cè)離子對(duì)及相關(guān)參數(shù)設(shè)定

*為推薦的定量離子。

注：當(dāng)采用不同質(zhì)譜儀器時(shí)，儀器參數(shù)可能存在差異，測(cè)定前應(yīng)將質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化到最佳。

6.7 定性判定

取供試品溶液（6.5）與篩查用混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（6.1）在相同分析條件下測(cè)定，樣品中如呈現(xiàn)定量離子對(duì)和定性離子對(duì)的色譜峰，被測(cè)組分的特征離子峰保留時(shí)間與篩查用混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（6.1）對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間一致，且選擇的監(jiān)測(cè)離子對(duì)的相對(duì)豐度比與相當(dāng)濃度的篩查用混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（6.1）的監(jiān)測(cè)離子對(duì)的相對(duì)豐度比的最大偏差不超過(guò)表5的規(guī)定，則可以判定樣品中存在對(duì)應(yīng)的組分。

表5  定性確證時(shí)相對(duì)離子豐度比的最大允許偏差

6.8 定量測(cè)定

取基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液（6.4）依次測(cè)定，以待測(cè)組分的系列濃度為橫坐標(biāo)，待測(cè)組分的峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，繪制基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線，其線性相關(guān)系數(shù)應(yīng)大于0.99。

取供試品溶液（6.5）測(cè)定，將對(duì)應(yīng)的定量離子對(duì)色譜峰面積代入基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線。按“7”項(xiàng)下公式，計(jì)算樣品中待測(cè)組分的含量。

6.9 平行試驗(yàn)

按以上步驟，對(duì)同一樣品進(jìn)行平行實(shí)驗(yàn)測(cè)定。

6.10空白試驗(yàn)

除不加試樣外，均按上述測(cè)定條件和步驟進(jìn)行。

7、 結(jié)果計(jì)算

結(jié)果按式（1）計(jì)算：

………………………………………………(1)

式中：

ω—樣品中非那雄胺等10種組分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，mg/kg；

ρ—供試品溶液中非那雄胺等10種組分的質(zhì)量濃度，μg/L；

V—樣品定容體積，mL；

m—樣品取樣量，g；

D—稀釋倍數(shù)（如未稀釋則為1）。

在相同條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。

8、 精密度和準(zhǔn)確度

多家實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證定量下限濃度回收率為80%～110%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于10%（n=6），中、高濃度回收率為90%～110%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于7.5%（n=6）。

9、 檢出限和定量限

本方法中各組分的檢出限、定量下限及取樣量為0.2 g時(shí)的檢出濃度和最低定量濃度見表6。

表6  非那雄胺等10種組分的檢出限、定量下限、檢出濃度和最低定量濃度

10、 圖譜

        圖1 非那雄胺等10種組分標(biāo)準(zhǔn)溶液的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)提取離子圖

  （1.尼魯米特；2.羥基氟他胺；3.比卡魯胺；4.氟羅地爾；5.氟他胺；6.非那雄胺；7.環(huán)丙孕酮；8.醋酸環(huán)丙孕酮；9.度他雄胺；10.依立雄胺）

附錄A

非那雄胺等10種組分的相關(guān)信息

表A.1 非那雄胺等10種組分的中文名稱、英文名稱、CAS號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量及結(jié)構(gòu)式

起草單位：上海市食品藥品檢驗(yàn)研究院

主要起草人：許勇、鄭榮、彭興盛、韓晶

驗(yàn)證單位：山東省食品藥品檢驗(yàn)研究院、廣東省藥品檢驗(yàn)所、江西省藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院