【問】單抗制品在上游的清潔驗證中有哪些關(guān)注點和實施要點?
【答】清潔驗證是單克隆抗體生產(chǎn)過程中重要的一環(huán)，主要是針對與產(chǎn)品直接接觸的非一次性使用 (重復(fù)使用) 的設(shè)備系統(tǒng)。對這些設(shè)備進(jìn)行清潔，并對清潔流程做驗證的目的是避免污染和交叉污染。清潔驗證策略及分析見本分冊生物制品 (單抗) 部分“2.8 清潔驗證”。結(jié)合上游生產(chǎn)工藝特點，本章節(jié)選擇典型的不銹鋼反應(yīng)系統(tǒng)模式就清潔驗證的三個階段應(yīng)用展開討論。
[實例分析]
實例3: 不銹鋼反應(yīng)器系統(tǒng)清潔驗證示例某單抗生產(chǎn)車間擁有6個6000L的不銹鋼反應(yīng)器 (圖4-2) ，已知在種子擴增線是使用一次性反應(yīng)器，在細(xì)胞培養(yǎng)階段是使用600OL的不銹鋼生物反應(yīng)器。
結(jié)合單抗的細(xì)胞培養(yǎng)工藝進(jìn)行風(fēng)險評估，針對一次性系統(tǒng)和不銹鋼做相應(yīng)的區(qū)分，本例著重陳述不銹鋼系統(tǒng)。
階段1: 清潔工藝設(shè)計與開發(fā)一一細(xì)胞培養(yǎng)階段的工藝步驟主要是復(fù)蘇/擴增/培養(yǎng)/收獲，目標(biāo)殘留物來源于過程的培養(yǎng)基或者培養(yǎng)基添加物、細(xì)胞碎片、蛋白殘留、代謝產(chǎn)物、消泡劑、清潔劑等。選擇有代表性的殘留目標(biāo)物類型，綜合考慮黏度、溶解度、細(xì)胞數(shù)量規(guī)模以及表達(dá)量等。對于細(xì)胞培養(yǎng)階段代表性污染物的物料應(yīng)選擇活細(xì)胞密度最高和產(chǎn)品濃度最高的介質(zhì)，因此對涉及細(xì)胞產(chǎn)物的系統(tǒng)一般會選擇細(xì)胞收獲前培養(yǎng)液作為研究開發(fā)的代表性目標(biāo)殘留。對于培養(yǎng)基配制系統(tǒng)應(yīng)綜合考慮培養(yǎng)基黏度、配比濃度、配制體積等，選擇最難清洗的培養(yǎng)基作為殘留目標(biāo)。
根據(jù)蛋白特性以及培養(yǎng)基/配制緩沖液，選擇合適濃度的氫氧化鈉進(jìn)行清潔。如涉及特殊蛋白殘留需使用其他清潔劑，需同時考慮清潔劑殘留的研究。根據(jù)生產(chǎn)工藝，選定某種最難清洗的緩沖液以及細(xì)胞培養(yǎng)收獲液中間品作為最差條件，結(jié)合清潔參數(shù)進(jìn)行小規(guī)模實驗;結(jié)合不銹鋼反應(yīng)器的材質(zhì)，針對不同材質(zhì)/粗糙度進(jìn)行分類并考慮做 TOC擦拭和淋洗水回收率的研究。需要注意研究物料的來源應(yīng)該具有代表性。
特別地，在做清潔方法開發(fā)時，需要考慮系統(tǒng)完整的邊界，如重復(fù)使用的不銹鋼系統(tǒng)范圍，以及涉及的連接部件處、密封處均應(yīng)覆蓋,以確保清潔方法的有效性。建議在做系統(tǒng)設(shè)計時就考慮適合的材質(zhì)以及可更換性和易操作的更換方式，避免清潔死角。
階段2: 清潔方法驗證一一方法開發(fā)完畢后，結(jié)合不銹鋼系統(tǒng)的實際系統(tǒng)設(shè)計及施工進(jìn)行充分的風(fēng)險評估，需考量系統(tǒng)中多個生物反應(yīng)器的安裝差異 (如管路長度/閥門安裝角度等)等因素，綜合考慮生物反應(yīng)器的機械結(jié)構(gòu)/物理特性構(gòu)造的一致性后，可采用分組方法進(jìn)行清潔驗證。應(yīng)依據(jù)分組中的生物反應(yīng)器系統(tǒng)情況選擇最差條件，執(zhí)行三輪清潔驗證，組內(nèi)的其余反應(yīng)器作為子反應(yīng)器各執(zhí)行一輪清潔確認(rèn)。此處的最差條件應(yīng)綜合考慮輸送管路距離、物料特性、介質(zhì)在系統(tǒng)停留時長及清潔劑的溶解度等多種因素。對于主反應(yīng)器需執(zhí)行的清潔驗證輪次，企業(yè)可結(jié)合自身的工藝認(rèn)知、平臺經(jīng)驗以及生物反應(yīng)器等同性研究數(shù)據(jù)等綜合考慮，進(jìn)行充分科學(xué)的風(fēng)險評估，同時保證總清潔輪次不少于三次以體現(xiàn)清潔工藝的有效重現(xiàn)性。由于清潔驗證是需要在生產(chǎn)條件下進(jìn)行，需要考慮結(jié)合實際生產(chǎn)輪次執(zhí)行。
一般情況下，清潔驗證是伴隨著商業(yè)化生產(chǎn)規(guī)模執(zhí)行，通常應(yīng)不晚于工藝驗證結(jié)束。如配合工藝驗證批次執(zhí)行，需要考慮兩種驗證的策略配合度。當(dāng)清潔驗證未完成時，伴隨每次的生產(chǎn)應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)的清潔確認(rèn)以保證下一次生產(chǎn)的安全使用，直到清潔驗證完成。
階段3:清潔驗證狀態(tài)維護(hù)一一當(dāng)初始清潔驗證完成后，企業(yè)應(yīng)根據(jù)驗證結(jié)果進(jìn)行風(fēng)險評估以確定再驗證的頻率，可通過周期性監(jiān)控確認(rèn)清潔工藝的穩(wěn)定性。企業(yè)可依據(jù)評估選擇關(guān)鍵清潔效果的指標(biāo)并使用統(tǒng)計方法來考察清潔工藝的穩(wěn)定性。
