行業指南草案
本指南草案定稿后，將代表美國食品藥品監督管理局（FDA或管理局）當前對該主題的看法。本指南不賦予任何人任何權利，也不對FDA或公眾具有約束力。如果替代方法滿足適用法令和法規的要求，您可以使用替代方法。如需討論替代方法，請聯系標題頁上列出的負責本指南的FDA工作人員。
1、引言
由于人體細胞治療1或基因治療2（CGT）產品的復雜性，生產變更的管理對這些產品具有諸多挑戰。我們（FDA），向您，CGT產品的研究性新藥申請（INDs）的申請人和生物制品許可申請（BLAs）的申請人，提供有關產品可比性和研究性和許可CGT產品的生產變更管理的建議。本指南的目的是提供FDA在以下方面的當前思路：1）基于生命周期方法的CGT產品生產變更的管理和報告；2）可比性研究，以評估生產變更對產品質量的影響。
一般而言，FDA的指南文件不具有法律強制性。相反，指南中僅說明了 FDA目前對該主題的看法，僅供參考，除非引用了特定的法規或法律要求。在指南中使用“應該”一詞意味著建議或推薦某事，但不是必需的。
（注釋：1.在本指南中，"細胞治療產品"包括某些含有活細胞的組織工程醫療產品（在本指南中稱為 TEMPs）（見本指南第VI節），受《公共衛生服務法》（PHS）第 351 節（42 U.S.C. 262）的管制。2 基因治療療法旨在修改或操縱基因的表達或改變活細胞的生物特性，以用于治療。FDA 通常認為人類基因治療產品包括所有通過轉錄或翻譯轉移的遺傳物質或通過特異性改變宿主(人類)基因序列而產生作用的產品。基因治療產品的一些例子包括核酸、轉基因微生物（如病毒、細菌、真菌）、用于人類基因組編輯的工程位點特異性核酸酶和體外轉基因人類細胞。）
2、背景
細胞治療或基因治療（CGT）產品受現行生物制品框架規管。CGT產品的生產和控制通常會受到獨特因素的影響，包括對產品質量屬性的了解有限、生產經驗有限、起始原料有限且可變、產品數量有限、生產工藝復雜以及產品保質期有限。與其他生物制品相比，CGT產品的這些方面可能使生產變更的管理更具挑戰性。
CGT產品制造商可能出于各種原因尋求實施生產變更，包括提高產品質量、擴大生產或提高生產效率。生產變更可能對產品質量產生不利影響的風險應根據制造商的質量風險管理流程進行前瞻性評估（參考文獻1、2）。我們注意到，雖然產品質量的提高總是可取的，也是值得鼓勵的，但如果可比性研究結果表明產品質量的提高表明在有效性和/或安全性方面有顯著的益處，則變更前和變更后的產品可能是不同的產品，因此不具有可比性。
（杜博士點評：某些情況下，申請人旨在強調可比，但實際存在不可比的情況，可以理解為是improvement（改良），則認為是不同的產品，對廠家/申請人而言是新的產品且也是一件好事情，是一種改良的產品。）
無論產品開發處于哪個階段，都應對所有類型的生產變更進行風險評估。如果風險評估表明生產變更有可能對產品質量產生不利影響，則應進行可比性研究，以評估擬議生產變更的影響。使用分析方法很難全面描述CGT產品的特性，在某些情況下，僅靠分析研究可能不足以得出可比性結論。在這種情況下，來自非臨床研究的額外數據可能有助于支持可比性。否則，可能需要進行額外的臨床研究。
在可比性研究中充分評估生產變更所需的分析評估程度通常隨臨床和產品開發階段的增加而增加，并應得到關鍵質量屬性（CQA）知識（參考文獻3）、積累的生產經驗以及對作用機理（MOA）的進一步了解的支持。對于許可產品和在研產品，在設計可比性研究之前，評估生產變化的風險至關重要。對于許可產品，申請人必須評估"已批準的許可申請中確定的產品、生產工藝、質量控制、設備、設施、負責人員或標簽的每項變更"的影響（《聯邦法規匯編》（CFR）第21篇601.12(a)(1)-(2)).6申請人還必須通過適當的驗證和/或其它臨床和/或非臨床實驗室研究證明，每項生產變更不會對產品質量產生不利影響，然后才能銷售使用該變更生產的產品（21 CFR 601.12(a)(2)）。對于研究用產品，申請人必須提供充分的化學、生產和控制（CMC）信息，以確保產品的安全性、特性、質量、純度和強度（包括效價）（21 CFR 312.23(a)(7)(i)），某些沒有足夠可比性數據的生產變更可能導致臨床暫停（clinical hold）（21 CFR 312.42(b)）。
（注釋：6在本指南中，術語 "生產變更 "在許可產品中是指屬于 21 CFR 601.12(a)(1)中描述的變更類型的變更（標簽變更除外）。）
1996年4月發布的題為"人類生物產品（包括治療性生物技術衍生產品）可比性的建議"的指南（參考文獻4）包含適用于生物產品的一般性建議，但并未涉及對 CGT產品進行可比性研究。2005年6月發布的題為"Q5E生產工藝發生變化的生物技術/生物產品的可比性 "的指導文件（參考文獻5）中包含了對CGT產品的可比性研究可能有用的原則。然而，其范圍僅限于某些可高度純化和表征的蛋白質和多肽，與CGT產品相比，這些產品通常不那么復雜，表征更好，并且具有更嚴格的耐受性。FDA有關生物制品生產變更管理和風險管理的其他指導文件一般不涉及CGT產品的具體挑戰（如參考文獻1、2、6）。本指南的目的是在考慮適用于這些產品的獨特挑戰的同時，本指南的目的是為在研和已獲許可的人類CGT產品的生產變更管理和可比性評估提供建議。
3、生產管理注意事項變更
有效的質量體系可在整個產品生命周期內保持藥品制劑（DP）質量的一致性，包括充分管理生產變更。一般而言，應使用有效的變更控制程序對生產變更進行全面評估和記錄。對于在研產品，在生產變更期間通過控制CQA和關鍵工藝參數critical process parameters（CPPs）來保持產品質量，對于獲得可解釋的臨床研究數據以支持獲批許可非常重要。由于CGT產品及其生產工藝的復雜性，一個強大的生產變更管理框架對細胞治療或基因治療（CGT）產品尤為重要。
A風險管理
由于難以確定產品質量風險以及如何降低風險的不確定性，CGT產品的生產變更管理可能具有挑戰性。因此，我們建議您采用系統的質量風險管理方法來識別、評估、分析和降低潛在風險。這種方法可以促進以科學為基礎的決策，并能夠對生產變化進行以風險為基礎的評估（參考文獻1）。
在進行生產變更之前，確定CQA的可接受范圍和CPP的操作范圍有助于進行風險評估和對變更進行評價。例如，對于具有手工清洗步驟的細胞產品，如果已經確定了細胞清洗持續時間的可接受操作范圍，則通常更容易過渡到自動清洗工藝，因為該參數會影響產品CQA和工藝性能。
在評估生產變更的風險時，應考慮產品和工藝知識、方法的鑒定/驗證以及臨床開發階段等因素。特別是，如果在提交BLA前不久引入大量生產變更，則應仔細評估產品質量風險。在這種情況下，應進行全面的可比性研究，并應提供較高的置信度，確保變更不會對產品質量產生不利影響（本指導原則第五部分）。此外，在研發后期或獲得許可后引入生產變更，如果現有的驗證研究不能代表預期的商業工藝，則可能需要額外的工藝性能驗證研究（例如，21 CFR 211.22、211.100、211.110(a)和211.165）。對于已經驗證的工藝，您還應確定是否需要因生產變更而對持續工藝驗證計劃進行（任何）需要的變更（參考文獻7）。由于這些原因，我們建議在開始臨床研究之前引入任何廣泛的生產變更，旨在提供支持BLA的安全性和有效性的證據。
為了在快速臨床開發過程中促進生產變更，CGT產品制造商應確保產品開發速度與臨床開發階段保持一致。例如，如果您在啟動臨床研究時使用由具有可擴展性潛力的制造工藝產生的產品，這將有助于減少后期臨床開發中制造工藝擴大時延遲的可能性。
對于符合21CFR第211部分的在研產品和許可產品，您必須至少每年評估一次數據，以確定是否需要更改產品規格或制造或控制程序，以保持產品的質量標準，即使沒有進行生產變更（21 CFR 210.2、211.180(e)和601.2(d)）。整個產品開發過程中的數據趨勢分析也有助于驗證生產變更是否會導致生產一致性隨時間推移而發生變化。
B穩定性和給藥裝置兼容性
產品穩定性可能會受到生產變化的不利影響，包括加工過程中的變化、中間體的保留步驟以及運輸或儲存原料藥（DS）或DP期間發生的變更。細胞治療或基因治療（CGT）產品通常對儲存和處理條件敏感。在改變容器封閉系統、配方、產品濃度或運輸條件后，應徹底評估DP的穩定性。
CGT產品的生產變更也可能影響DP與給藥裝置的兼容性。
在評估生產變更的風險時，我們建議您確定是否需要進行穩定性和/或給藥裝置兼容性研究，以評估變更對產品質量的影響，以及此類研究是否應評估在中間體（in-process material）、DS或DP。穩定性研究應重點評估穩定性指示質量屬性（evaluation of stability-indicating quality attributes）。穩定性測試計劃應定義適當的驗收標準，這些標準可能不同于產品放行的驗收標準。
（杜博士點評：比如某些產品IND申請（如溶瘤病毒）時，有被FDA要求進行注射前給藥裝置的穩定性研究包括運輸穩定性模擬研究。盡管FDA使用“建議”一詞，根據多類產品的申報經驗，甚至在IND1/2早期申報階段，相容性和兼容性穩定性研究都需要開展，希望大家不要報僥幸心理。）
許多CGT產品需要冷凍儲存相當長的時間。在強制條件（stress conditions）下進行的加速穩定性研究可能有助于確定穩定性指示屬性，但保質期（shelf life）應基于在長期儲存條件下獲得的實時穩定性數據（real-time stability data）。生成實時長期穩定性數據可能會延遲產品開發，尤其是在產品開發后期實施可能對穩定性產生不利影響的生產變更時。對于許可后的生產變更，可能需要生成變更后產品的實時穩定性數據，以證明對產品質量沒有不利影響，而生成這些數據可能會嚴重延誤生產變更的實施。
C非臨床研究
在臨床研究開始后，可能需要進行非臨床研究以支持研究產品的生產變更（參考文獻8），或支持許可產品的生產變更（21 CFR 601.12(a)(2)）。如果僅靠分析研究不足以確定生產變更對CGT產品質量的影響，那么非臨床研究可能有助于證明可比性。
D Clinical studies
我們建議通過分析評估和適當的非臨床研究來評價研究用或已獲許可的細胞治療 或基因治療（CGT）產品的可比性。在適用和可行的情況下，評估藥代動力學/藥效學（PK/PD）參數的研究可用于提供證據，支持變更前和變更后產品之間的可比性。當通過分析、非臨床和/或PK/PD研究不能確定可比性時，變更前產品（pre-change product）的臨床研究中積累的安全性和有效性證據將不足以支持變更后產品（post-change product）的BLA，申請人應聯系FDA討論對變更后產品的安全性和/或有效性進行額外臨床研究的計劃。
如果分析和/或非臨床可比性研究不足以保證生產變更不會對安全性產生不利影響，則申請人應與FDA討論（本指南第七部分）變更后產品的安全性評價計劃，其中可能包括開展新的臨床研究和/或在正在進行的臨床研究中納入額外的保障措施和安全性評價。例如，可以考慮擴大特別關注的不良事件的范圍，錯開受試者的入組時間，修改研究停止規則，以及進行額外的劑量探索研究（broadening the scope of the adverse events of special interest, staggering enrollment of subjects, modifying study stopping rules, and conducting additional dose-finding studies）。
如果可比性研究表明生產變更不會對產品安全性產生不利影響，但不足以排除對產品有效性的不利影響，那么申請人將需要在臨床研究中評估變更后產品的有效性，以支持變更后產品的BLA。
在啟動旨在提供實質性有效性證據以支持BLA的研究后，如果提出任何可能影響產品有效性的生產變更，則必須對該變更進行嚴格評估。此外，根據21 CFR 50.52進行的研究要求，證明變更前研究CGT產品對兒科受試者（pediatric subjects）有直接獲益前景的證據，可能不足以證明變更后產品的直接獲益前景。如果不能在變更前和變更后產品之間建立可比性，申請人應與FDA討論（本指南第七部分）對變更后產品臨床開發計劃（clinical development program for the post-change product）的任何擬議修改。此類修改可包括增加接觸變更后產品的受試者人數，以及用變更后產品啟動新的臨床研究。如果是要求有直接獲益前景的兒科研究，在早期臨床開發階段，證明獲益前景的非臨床數據可能就足夠了。
如果您希望匯集接受變更后產品治療的受試者和接受變更前產品治療的受試者的臨床數據，您應證明產品具有可比性，并證明臨床研究設計適合匯集數據。我們還建議您就集合數據分析（design of the pooled data analysis）的設計征求FDA的意見（本指南第七節），最好是在開展旨在證明產品有效性以支持BLA的后期研究之前。
Licensed Products（許可產品）
如果分析和/或非臨床可比性研究不能證明許可產品的生產變更對產品質量沒有不利影響，FDA將不能根據這些研究批準生產變更（21CFR 601.12）。在這種情況下，我們建議您與FDA討論替代方法（本指南第VII節），FDA將根據具體情況進行評估。例如，您可以考慮根據IND對變更后的產品進行新的臨床研究，以獲得其安全性和有效性的證據。
4、生產變更的監管報告
如果先前提交的生產信息因缺少基本信息而不再準確反映當前的生產狀況，IND申請人必須通過修訂（amendment）通知FDA生產變更（21 CFR 312.31(a)(1)）。根據21 CFR 601.12，申請人必須通過BLA補充文件（BLA supplement）或年度報告（annual report）通知FDA生產變更（參考文獻 6）。當提交IND修訂或BLA補充文件以進行生產變更時，您的封面信（cover letter）應清楚地描述修正目的，并強調擬議的變更（參考文獻9）。對于包含大量變更的修正，我們建議您分別在通用技術文件（CTD）第1.2節或第1.11.1節中提供 "審查員指南（Reviewer’s Guide）"或變更的綜合摘要（summary of the changes）。應修改IND或BLA的模塊3和任何其他相關章節以包含變更，并應在IND或BLA的藥品開發章節（3.2.S.2.6和3.2.P.2.3）中更新生產工藝的開發歷史。提交的類型、提交的時間以及提交中所需的信息量將根據產品和臨床開發的階段以及生產變更的性質而有所不同，詳見下文。
A需要提交新的IND的CMC變更
某些改變可能從根本上改變產品的設計或性質，從而產生新產品。用新的研究產品開始臨床研究一般需要提交單獨的IND（requires the submission of a separate IND）（21 CFR 312.20）。我們建議您就可能改變產品并需要提交新IND的任何生產變更征求FDA的意見（本指南第七節）。可能需要提交新IND的變更示例包括：
● 改變細胞產品的細胞起始物料料（例如，異體供體與自體供體；脂肪來源細胞與臍帶來源細胞）
● 細胞產品中細胞類型的改變（例如，CD4+和CD8+T細胞的混合物，而非單純的CD4+T細胞）
● 改變TEMP中最終構建物的支架或基質成分（如改變化學或物理特性），導致產品特性發生重大改變
● 改變病毒載體的外殼或包膜，從而改變用于體內基因治療的病毒載體的趨向性或血清型
● 改變轉基因序列或增加轉基因（如改變嵌合抗原受體的細胞內信號結構域）
● 改變病毒載體的表達控制元件（如從組織特異性啟動子變為普遍啟動子）
● 改變基因組編輯產品的靶基因，包括增加靶基因
B IND生產變更的報告
FDA法規要求所有研究用新藥產品（包括研究用CGT產品）的申請人描述DS（21 CFR 312.23(a)(7)(iv)(a)）和DP（21 CFR 312.23(a)(7)(iv)(b)）的CMC信息。IND中的CMC信息必須足以保證研究產品的安全性、特性、質量、純度和強度（包括效價）（21 CFR 312.23(a)(7)(i)）。IND中的CMC信息說明申請人承諾按照IND或相互參照的IND（cross-referenced IND）或主文件中的規定對研究產品進行生產和測試。如果生產變更可能影響產品質量，我們認為必須在IND的信息修訂中提交生產變更的基本信息（21 CFR 312.31(a)(1)）。申辦者應在臨床研究中使用變更后的產品之前提交此類修訂（information amendment），供FDA審查。FDA將審查為支持變更而提交的數據或研究報告，并可能提出意見（本指南第五部分）。此外，您每年必須提交一份年度報告（annual report），提供過去一年中任何重大生產變更的摘要（21 CFR 312.33(b)(7)）。
如果生產變更有可能對安全性產生不利影響，并且如果您未在IND中提交證據證明變更后的產品具有可接受的安全性，則您的IND可能會在臨床開發的任何階段被臨床暫緩（clinical hold）（21 CFR 312.42(b)(1)(i)、21 CFR 312.42(b)(1)(iv)和 21 CFR 312.42(b)(2)(i)）。可以分析可比性數據或與安全性相關的其他分析數據的形式作為IND修正案提供證據。如果這些數據無法確定生產變更不會對產品質量產生與安全性相關的不利影響，則應考慮進行毒理學研究，以評估變更后的產品是否具有可接受的安全性。
如果您在IND中未提交證據證明變更后的產品與變更前的產品具有可比性的情況下進行可能對產品的有效性產生不利影響的生產變更，這也可能導致某些臨床研究的臨床暫緩（21 CFR 312.42(b)）。FDA對2期或3期臨床研究的IND申請的審查包括評估該研究產生的數據是否有可能達到上市批準的法定標準（21 CFR 312.22(a)），如果2期或3期研究的計劃或方案在設計上存在明顯缺陷，無法達到既定目標，則該研究可能被臨床暫緩（21 CFR 312.42(b)(2)(ii)）。例如，如果一項旨在提供實質性有效性證據以支持變更后產品BLA的3期研究使用了變更前和變更后產品的批次，但這些產品不具有可比性，那么該研究可能缺乏證明變更后產品有效性的統計能力。如果提交的IND不能提供證據證明變更前和變更后產品的可比性，那么這樣的研究可能會被認為在設計上明顯不足以實現其既定目標，并被臨床暫緩。
此外，如果受試者將面臨不合理的重大疾病風險或傷害風險，FDA可將研究置于臨床暫緩狀態（21 CFR 312.42(b)(1)(i)和 312.42(b)(2)(i)）。如果您在沒有證明可比性的情況下進行了可能對研究產品的有效性產生不利影響的生產變更，那么變更后產品為受試者提供潛在益處的能力可能會受到懷疑。這可能導致得出結論，認為臨床研究中涉及的重大疾病或傷害風險不合理，研究可能被臨床暫緩。
C BLA的生產/工藝變更的報告
對于獲得BLA許可的產品，您必須按照21 CFR 601.12中的要求，報告產品、生產工藝、質量控制、設備、設施、負責人員或標簽在已批準的許可申請中的每一次變更。在報告這些變更時，您的補充或年度報告（supplement or annual report）應包括風險評估報告（risk assessment report），并且必須包括為評估變更對產品質量的影響而進行的適當研究的數據，這些研究是根據 21 CFR 601.12(b)(3)(iv)-(v)、21 CFR 601.12(c)(3)或 21 CFR 601.12(d)(3)(ii)的要求進行的（參考文獻6）。
為便于管理批準后的生產變更，您可以按照21 CFR 601.12(e)中的規定，在 BLA中提交一份或多份可比性方案（comparability protocols）供FDA審查。這些方案可以在原始BLA中提交，或者如果申請已獲批準，則在事先批準補充文件（approval supplement）中提交（參考文獻10）。可比性方案應放在BLA的3.2.R部分。一經批準，該方案即成為使用根據21 CFR 601.12(e)提交的經批準的可比性方案中指定的報告類別實施生產變更的商定計劃，前提是成功完成可比性方案中所述的變更實施計劃（包括達到經批準的可比性方案中預先確定的所有成功驗收標準）（參考文獻10）。
5、可比性評估和報告
變更前和變更后產品之間的可比性通常由證據證明，變更不會對許可（21 CFR 601.12(a)(2)）或在研產品的產品質量產生不利影響。然而，如果改變的目的是為了提高產品質量，從而在有效性和/或安全性方面有顯著的益處，那么改變后的產品可能被視為不同的產品，因此與改變前的產品不具有可比性。我們建議您在計劃重大生產變更和設計可比性研究的研究方案時征求FDA的意見（本指南第七節）。本指南第五部分介紹了設計可比性研究、分析可比性數據和提交可比性研究報告的注意事項。有關向FDA報告生產變更的信息，請參閱本指南第IV.B節關于IND變更的報告和第IV.C節關于BLA變更的報告。
在提交IND或BLA的可比性研究報告時，您應附上一封封面信或審查員指南（cover letter or reviewer’s guide），概述提交內容，以簡化FDA的審查程序。在封面信或審查員指南中，您應提供擬議變更的描述、擬議變更的理由、實施變更的擬議時間表以及可比性研究設計的理由。此外，為幫助FDA審查您的研究，我們建議您提供當前相關生產和臨床經驗的簡短摘要。例如，在提交IND的可比性研究報告時，描述臨床開發的階段、變更前產品的受試者人數以及預期接受變更后產品的受試者人數是有幫助的。您應提供先前相關生產變更的概要及其對工藝一致性和產品質量的影響。您還應注意以前對產品規格（DP、DS和關鍵中間體）所做的任何更改，并提供仍在開發分析方法的任何CQA的說明。
可比性研究報告應酌情提交至BLA或IND的CTD第3.2.S.2.6或3.2.P.2.3章節。您的可比性研究報告應評估包括歷史生產數據在內的所有可比性數據，以確定變更前和變更后的產品是否具有可比性。我們建議您總結可比性研究的結果，并討論數據和分析如何支持您的研究結論。您還應討論研究的任何潛在局限性。如果產品質量屬性不符合預先確定的可比性接受標準，但您仍認為變更前和變更后的產品具有可比性，您應提供理由和/或額外的科學信息以支持您的結論，供FDA 審查。
A風險評估
可能對產品質量造成潛在風險的生產變更包括但不限于生產場所、生產工藝、材料、容器封閉、測試、儲存和運輸條件的變更。為評估擬議的生產變更是否會影響產品質量，您應按照2006年6月國際協調理事會（ICH）Q9（參考文獻1）的建議進行詳細的風險評估。細胞治療或基因治療（CGT）產品生產變更的風險評估過程與其他類型藥品的風險評估過程類似，一般可采用相同的工具。
我們認識到，與其他類型的產品相比，CGT產品生產變更的風險評估可能更具挑戰性，因為生產變更對這些復雜產品的影響往往難以預測。例如，生產變更可能會意外改變產品純度（增加工藝相關雜質、細胞雜質、聚集物或微粒）、降低產品穩定性或改變產品效力。
將生產工藝轉移到新的生產場地（Transferring a manufacturing process to a new manufacturing facility）通常被視為一項重大變更，除技術轉讓外，還可能需要進行廣泛的可比性評估，因為這可能涉及生產工藝、運輸、生產設備、檢測設備和操作人員的變更。在將生產工藝轉移到新工廠時，必須進行全面的風險評估，包括考慮方法等效性和CPP。
（杜博士點評：生產場地的變更的確為重大變更，希望申請人/廠家在做場地變更時，建議遵循FDA的要求，盡量在CMC層面做齊全，從而降低做非臨床或臨床可比性研究）
您的風險評估應考慮變更對生產變更下游的生產步驟和過程參數的潛在影響，以及對成品的影響。我們建議您采取循序漸進的方法來選擇要在可比性研究中進行評估的所有質量屬性和工藝參數；首先，您應確定哪些屬性可能會受到特定變更（particular change）的影響，其次根據風險的概率、嚴重程度和可檢測性為每個屬性分配分數。分配的分數可用于確定每個屬性的總體風險。被確定為對產品質量具有高風險的生產變更應得到廣泛的分析可比性研究的支持，而使用更集中的方法評估低風險變更則也是可能的。
您應考慮您的風險評估是否受到與擬議的變更類型相關的產品知識差距的限制。知識差距通常會提高風險水平，可能需要進行更廣泛的可比性研究。請注意，僅依靠既定的放行測試和過程控制通常不足以評估生產變更的影響。因此，我們建議您考慮生產變更對質量屬性的潛在影響，這些質量屬性并非由既定的放行測試（established release tests）和過程控制（process controls）進行常規評估，并酌情考慮額外的特性研究。此外，您的風險評估應評估是否應使用一種以上的分析方法來評估特定屬性。如本指南第V.B節所述，這種方法可能對高風險屬性有用，特別是在效力評估方面。在風險評估中，您應說明如何使用選定的質量屬性和工藝參數來全面評估變化對產品質量的潛在影響。
您的風險評估也應為可比性統計方法提供信息。高風險屬性通常需要比低風險屬性更嚴格的統計分析。并排或圖形展示（Side-by-side or graphical presentations）（如點陣圖）可進行直觀比較，而非統計分析，這可能足以描述受生產變更影響風險較低的屬性。
值得注意的是，即使生產變更對產品質量或工藝性能沒有其他影響，該變更也可能影響產品的穩定性。如第III.B節所述，您應評估產品穩定性和給藥裝置兼容性的潛在風險。
最后，如果要同時實施多項變更，我們建議您評估每項單獨變更的風險以及這些變更對產品質量的潛在累積影響。在單一可比性研究中評估這些多重變更是可能的。但是，如果您未能在單項研究中證明可比性，則很可能難以確定哪些變更對產品質量造成了不利影響。
B 分析可比性研究設計
可比性研究必須足夠可靠，以便就可比性得出明確結論。因此，仔細選擇相關的質量屬性、分析方法、接受標準和統計方法非常重要。在對已獲得許可或正在根據IND進行研究的CGT產品進行可比性研究之前，我們建議您提交一份詳細的研究方案（可比性方案），并就研究設計和統計方法向 FDA 申請反饋意見（本指南第七部分）。如上所述，法規還規定申請人提交并尋求FDA批準一份全面的、前瞻性的書面計劃（comprehensive, prospectively written 480 plan），以評估擬議的批準后生產變更對產品質量的影響（21 CFR 601.12(e)和參考文獻10）。10).這些可比性方案可在原始BLA或事先批準補充文件中提交（21 CFR 601.12(e)）。
可比性研究的范圍應受風險評估結論的驅動，這些結論應為您的選擇提供信息：1)用于測量生產變更對產品質量影響的一組相關質量屬性（a relevant set of quality attributes 486 to measure the effect of the manufacturing change on product quality），2) 適當的測試方法（appropriate test methods），3) 足以證明生產變更對產品質量沒有不利影響的可比性驗收標準（comparability acceptance criteria that are adequate to demonstrate a lack of adverse effect of the manufacturing change on product quality）（如本節后面所討論的）。為充分評估生產變更對產品質量的影響，可比性研究通常需要包括對產品放行時未常規使用的屬性進行測量。
我們建議您在設計可比性研究時考慮以下因素：
選擇用于研究的產品批次
可比性研究一般應使用全規模生產的批次進行（using lots that have been manufactured at full scale）。小規模批次的經驗可用于識別產品質量和工藝控制的潛在風險，并有助于可比性研究的設計。如果為進行可比性研究而生產全規模批次產品不可行，則應對CPP、CQA（包括效價）和其他相關產品特性進行數據驅動的風險評估，以證明縮小生產工藝規模能夠充分評估生產變更對產品質量的影響。
可比性研究可設計為將變更前的歷史測試數據與變更后批次的最新數據進行比較。這樣的研究設計要求各批次產品的分析檢測方法相同，以提供可解釋的數據。如果分析方法隨著時間的推移發生了變化，則可能需要使用當前的分析方法對變更前批次的保留樣品進行重新分析。應避免有偏差地選擇歷史數據。理想情況下，歷史變更前批次與變更后批次之間的唯一差異應是可比性研究中正在評估的生產變更。如果變更前的產品是使用多種工藝或設備生產的，則在將變更前的批次納入評估新建議變更的可比性研究之前，應證明這些批次之間的可比性。
對于一些CGT產品，批次數量可能非常少，例如，由于罕見疾病適應癥的生產有限，臨床研究期間的開發時間很快，或難以從足夠數量的供體獲得細胞起始材料。批次數量不足可能影響統計效力，不足以證明可比性，特別是如果批次之間的差異很大，如本指南后面第V.E節所討論所述。
由可變細胞原料制成的產品的特別注意事項
由于細胞來源材料的固有可變性，每批次產品來源于不同供體的細胞產品，其產品特性范圍往往非常大。要對此類產品進行統計有效的可比性研究，可能需要使用的批次數量相當大，在某些情況下甚至是不可行的。然而，一些研究設計方面的考慮可能有助于減少可比性研究中的批次數量。我們建議您盡可能采用分割來源的研究設計（use a split-source study design）。分割來源設計通過將單個細胞源材料分割成兩個相等的部分來限制細胞變異性的影響。然后，將每份源材料的一部分置于變化前的生產條件下，將另一部分置于變化后的生產條件下。正如本節后面的 "可比性驗收標準 "中所描述的，從分割運行中獲得的結果應符合過程中和釋放規格，并代表相關的歷史數據。通常進行配對差異分析。如果不可能采用分割來源研究設計，并且已經知道特定產品和臨床適應癥的CQA可以在較大范圍內變化而不會對產品質量產生任何不利影響，那么相應地，可以接受為可比性研究設定較寬的接受標準，這將減少研究的批次數量。
在生產用于可比性研究的細胞基產品批次時，我們建議使用通常用于生產您的產品的相同類型的細胞源材料。如果由于源材料有限或其他合理原因而無法做到這一點，使用小規模生產或替代細胞源材料可能是合適的。例如，如果無法獲得患者細胞，可考慮使用健康供體細胞。如果來自單個供體的細胞數量不足以為可比性研究制造足夠大的批量，則可使用來自同一或多個供體的多個細胞集合的細胞。在您的可比性研究報告中，您應解釋為什么替代細胞源材料具有相關性，包括 1) 使用替代材料時，工藝參數是否會出現差異；2) 使用替代源材料是否能有效評估產品質量。例如，對于由轉基因細胞組成的產品，如果轉導效率不同，健康的供體細胞可能不是患者細胞的合適替代物。此外，在產品用于治療遺傳疾病的情況下，健康供體細胞中缺乏遺傳缺陷可能會干擾效價的測量。
用于體外細胞修飾的載體的特殊考慮
用于體外細胞修飾的GT載體的生產必須符合《聯邦食品、藥品和化妝品法》（FD&C Act）第501(a)(2)(B)條規定的現行良好生產規范（cGMP），并與開發階段相適應（參考文獻11）。這應包括有效的質量風險管理和變更控制活動（參考文獻1）。對GT載體生產過程的變更不僅要仔細評估載體質量和載體生產過程性能的風險，而且要仔細評估體內外基因修飾細胞質量和生產過程性能的風險。
載體的分析可比性通常應使用載體釋放測定法（包括測定載體生物活性的測定法）以及任何相關的特性測定法（如適用）進行評價。此外，載體生產的變化對體內外基因修飾細胞（DS和/或DP）質量的影響應在分析可比性研究中使用足夠數量的載體、DS和/或DP批次進行評估。
在每批載體足以生產大量DP的情況下，可用于可比性研究的載體批次可能較少。在這種情況下，如果這些載體批次的生產與用于生產臨床研究DP的載體批次的生產相似，則可比性研究可能適合包括在工藝開發或工程運行期間生產的載體批次。
您的風險管理策略應確保有足夠的載體批次可用于未來的可比性研究，因為實施載體生產變更的困難可能導致臨床研究的延誤或許可產品的短缺。
效力評估
CGT產品的生物活性對生產變化非常敏感。因此，我們建議在進行分析可比性研究時應包括定量效價測定（參考文獻12）。如果常規使用的分析方法不精確或無法評估可能受生產變更影響的產品MOA的所有方面，您可以考慮使用多種分析方法來評估效價。對于某些產品，可以使用動物模型來補充相關的定量檢測方法，以證明產品具有預期的生物效應，并為變更前和變更后產品的可比生物活性提供支持性證據。
由于產品的復雜性、多種活性成分的存在以及復雜的PK/PD特征等原因，CGT產品可能具有多方面的作用機制。測量CGT產品相關生物活性的檢測方法的開發具有挑戰性，而且這些檢測方法通常具有固有的可變性。由于產品的MOA與安全性和有效性之間的關系可能還不是很清楚，因此這些困難可能會將效價測定和放行接受標準的建立推遲到后期臨床研究。然而，將效價分析排除在可比性評價之外會影響從可比性研究中得出的結論。為避免出現這種情況，我們建議保留所有批次的樣品，以便將來進行效價分析以支持可比性。
在制定可比性研究中的效價接受標準時，應考慮到產品的質量不僅會因效價大幅下降而受到不利影響，而且如果效價大幅上升也會受到不利影響。大幅提高效價的生產變更，即使是有意為之，也可能引發安全性問題。在這種情況下，如果您無法證明該變更不會對安全性產生不利影響，變更后的產品將不被視為與變更前的產品具有可比性。
可比性接受標準
如果有證據表明變更對產品質量沒有不利影響，則無需對變更前和變更后的CQA進行完全相同的測量即可得出可比性結論。在啟動可比性研究之前，應針對通過風險評估確定可能受變更影響的每項CQA確定可比性接受標準。對于定量屬性（quantitative attributes），可比性接受標準可定義為變更前和變更后屬性之間最大的可接受差異（等效余量）或變更后屬性的可接受范圍（質量范圍）。除滿足可比性驗收標準外，用于可比性研究的批次還應滿足既定的在制品和放行驗收標準，除非另有說明，否則研究結果應代表變更前相關歷史批次的數據（如平均值、標準偏差、中位數）。
當需要直接比較變化前和變化后的值并確定它們是否足夠相似時，等效方法通常適用于評估CQA的可比性。對于正態分布數據，等效邊際應定義為群體均值中可接受的最大差異。超過該差值將被解釋為變更后生產工藝對產品質量的不利影響。
質量范圍法評估變更后的質量結果是否在定義的范圍內。該范圍通常應小于相同質量屬性的發布驗收標準。質量范圍法可用于不同風險等級的屬性，但風險較高的屬性應使用更嚴格的等效法進行評估。在使用質量范圍法時，足以進行可比性研究的變更后批次數量將取決于支持變更對產品質量無不利影響的全部證據。
例如，如果來自其他研究（如雜質清除研究或其他工藝特征研究）的額外相關數據提供了生產變更不會對特定質量屬性產生不利影響的證據，那么這可能證明在可比性研究中使用較少的變更后批次是合理的。否則，您應確保在設計可比性研究時具有足夠的能力，計算所需的變更后批次數量，以高度置信度證明未來適當比例的批次將在質量范圍內。
無論采用哪種方法，可比性驗收標準最好應基于了解屬性對產品安全性和有效性的潛在影響，而不是僅基于對變更前產品歷史數據的統計分析。如果有臨床或生產經驗支持對產品質量有負面和/或正面影響的CQA差異，您應使用該信息為您的可比性研究選擇適當的質量范圍或等效范圍（equivalence margins）。如果您使用對歷史數據的統計分析來定義可比性接受標準（例如，基于標準偏差），則應說明您基于統計的接受標準如何足以確保變更后產品的安全性和有效性（即，說明您基于統計的參數如何與具有生物學意義的差異相關）。
請參閱本指南第V.E節中有關可比性研究結果統計分析的內容。
C Analytical Methods分析方法
可比性測試結果的解釋取決于所用分析方法的適用性。例如，在可比性研究中使用不精確、不敏感或不一致的方法會使研究結論無效。我們建議您以表格形式列出可比性研究中使用的分析方法和測試場所。如果您在申請中的其他地方提供了方法說明、合格性研究或驗證研究，您可以參考它們。對于在研產品的可比性研究，用于證明可比性的所有放行測定均應合格或驗證，具體取決于臨床研究的階段。用于擴展表征的檢測方法不一定需要合格，但應具有科學依據，適合其預期用途，足夠精確以檢測產品質量的有意義差異，并提供可靠的結果。如果未在其他地方說明，則應說明樣品采集情況（如工藝步驟、樣品量、儲存溫度），并說明從變更前和變更后生產工藝中采集樣品的任何差異。
FDA已發布指南，提供一般指導原則，以協助申請人進行檢測驗證（參考文獻13，14）。下面重點介紹CGT產品檢測驗證的一些挑戰：
分析方法精度
屬性的微小變更有時會對CGT產品的質量產生深遠影響。然而，如果分析方法不精確，測量這種微小的變更可能具有挑戰性。因此，用于評估生產變化對產品質量和過程控制影響的分析方法必須足夠精確，這一點尤為重要。例如，如果某一特定細胞標記物5%的變化代表了產品質量的重大差異，那么中間精密度為20%變異系數的流式細胞儀檢測方法將不足以評估變更前和變更后產品在該屬性上是否存在重大差異。
一致的方法性能
在CGT產品的生命周期內，由于技術的進步和/或對MOA理解的加深，分析方法經常會改變、增加或轉移到新的設備。為了給可比性研究提供最易于解釋的數據，我們建議您對變更前和變更后的產品屬性進行并排測試（side-by-side testing），或在同一測試機構使用相同的分析方法對所有樣品進行分析。如果有標準物質，也應使用標準物質。
在產品生命周期的各個階段，當改變檢測方法或將檢測方法轉移到新的檢測機構時，您應該對檢測方法的改變進行風險評估，以確定是否會對產品質量評估產生潛在影響，包括在可比性研究中進行的評估。例如，將ELISA試劑盒的手工方法改為自動方法，可能會導致靈敏度或精密度出現有意義的差異。新舊檢測方法的等效性應通過用每種檢測方法檢測相同的樣品來評估。同樣，當使用多臺設備進行同一檢測時，應進行方法轉移研究以確保重現性，檢測應包括相同的樣品或通用參比材料，以確保檢測讀數的一致性。將檢測方法轉移到新設施后，可能還需要進行額外的檢測鑒定或驗證（參考文獻13）。
D 結果
對于評估的每個產品屬性和工藝參數，我們建議以表格形式提供每個批次的結果和相應的批次號，同時提供列出數據摘要統計的表格，以及預定義的研究驗收標準。在適當的情況下，我們建議您也以圖表的形式顯示數據。我們建議您描述并分析研究數據在變更前和變更后產品之間的任何差異。任何偏離預先確定程序的情況都應加以描述并說明理由。
E 統計
在設計CGT產品的可比性研究時，應使用適當的統計方法來確定變更前和變更后的產品是否具有可比性。在執行可比性研究之前，應在可比性協議中確定統計方法。當樣本數量有限、質量屬性變化很大或數據不呈正態分布時，選擇統計方法來證明變更前后產品的可比性可能具有挑戰性。
我們建議您在與FDA討論研究設計和統計方法之前咨詢統計學家。一般來說，可以使用多種適當的統計方法來評估變更后產品的數據是否在預定的可接受范圍內。為了避免在可比性研究的設計和分析中出現錯誤，仔細考慮基本的統計概念是很重要的。例如 ：
● 由于假設無效、需要大量樣本、樣本數據變異性高或有關群體分布的信息有限，某些統計方法可能不適合特定的比較。例如，如果數據不呈正態分布，則不應使用假設總體呈正態分布的參數檢驗。在合理的情況下，數據轉換可用于滿足數據正態性假設。您應描述統計方法，說明統計方法假設的合理性，說明所選驗收標準的合理性，并討論局限性。如果CQA的基本分布不同（如正態分布與二項分布），可在同一研究中使用不同的統計方法分析不同的CQA。
● 統計量的變異性由其抽樣分布的分布范圍決定。只有少量批次會導致更大的抽樣變異性，從而大大降低統計能力。因此，應盡早考慮適當的批次數量，因為缺乏足夠數量的樣本可能會阻礙可比性分析和生產變更的實施，尤其是在后期開發階段和獲得許可后。
● 如本指南第V.C節所述，在使用精密度較差的檢測方法時，可能難以評估某一屬性的可比性。在這種情況下，提高檢測精度的另一種方法是通過對每個批次獨立進行多次檢測并報告平均值來降低測量的不確定性。這種方法將提高該屬性可比性分析的統計能力。值得注意的是，在進行可比性分析時，應將各批次檢測結果的平均值視為一個數據點；在可比性分析中，不宜將每個單獨的檢測結果視為一個獨立的數據點。
● 對于比較使用分離供體起始材料的兩種細胞生產工藝的研究，每種供體的產品數據都是配對的。在這種情況下，您應選擇適合分析配對數據差異的統計檢驗，而不是假設獨立數據結構的檢驗。
● 變化前和變化后的產品之間沒有統計學意義上的顯著差異（例如，P值>0.05）并不能證明可比性。例如，當無效假設是變更前和變更后產品的CQA均值相等，而備擇假設是它們不同時，使用雙樣本t檢驗不適合可比性要求。換句話說，不能拒絕這個零假設并不等于證明了等效性。
● 要評估等效性，您可以考慮為變更前和變更后數據之間的差異計算一個適當的置信區間，如果該置信區間在等效范圍內，則得出等效性結論。當所關注的CQA是一個平均值時，您可以考慮使用"雙單側檢驗程序"（TOST）或其他適當的統計方法來確定可比性。對于某些屬性（如雜質、活力），可以使用單側統計比較（如非劣效試驗或其他適當方法）來證明生產變更對產品質量沒有不利影響。
● 如果為可比性研究選擇的批次不能代表您的典型生產工藝，則無論采用何種特定的統計方法，相應結果的解釋意義都將十分有限。您應說明選擇可比批次以及（如適用）用于生產這些批次的細胞源材料的理由。
6、組織工程醫療產品的特別注意事項
組織工程醫療產品（TEMP）通常含有可存活的細胞和支架，細胞可播種在支架表面或嵌入支架內。通常，TEMP旨在模擬體內細胞微環境。盡管制造商在這些產品方面積累了經驗，但對產品質量、體外細胞與支架之間的相互作用（如成熟）、DP與宿主環境的相互作用（如重塑）以及TEMP對生產變化的敏感性等方面的了解仍然有限。由于這些原因，TEMP的生產變化會帶來更多獨特的挑戰，因為變化可能會對細胞、支架和/或細胞-支架組合產品產生影響，而這些影響是目前的測量技術所無法預測或檢測到的。
（杜博士點評：TEMP相對來講，是一個組合產品，涉及到器械和細胞，這方面的產品經驗較少，在做此類產品時，建議申請人盡量在早期階段和FDA溝通交流，從而獲得對FDA對產品的早期支持/建議。）
我們建議您進行全面的風險評估，考慮變化對每個成分（如細胞、支架）和最終細胞-支架構建物的潛在影響。風險評估應確定是否有必要進行可比性研究，以評估變化對產品質量的任何潛在影響，以及該可比性研究是否應評估細胞、支架、細胞-支架中間體和/或細胞-支架DP。
在評估TEMP的生產變化時，應考慮支架特性，包括但不限于支架來源（如天然或合成）、密度、形狀、機械和理化特性、與細胞因子和生長因子的相互作用以及誘導細胞信號通路的能力（如通過機械傳導）。同樣，您應考慮相關的細胞特性，包括但不限于細胞形態、密度、聚集、生長、存活率以及擬議特定適應癥的相關生物學功能。在細胞和支架結合前引入的生產變化以及在細胞和支架結合后引入的生產變化（如培養條件、包裝、儲存或運輸的變化）都可能對TEMP的整體生物活性和/或性能產生重大影響。因此，TEMP的可比性研究通常應包括對DP質量影響的評估，即使在將這兩種成分結合之前，僅對支架或細胞進行了制造上的改變。
此外，某些變化可能會對DP給藥后的安全性和性能產生重大影響，從而影響產品質量。因此，您應評估變化對給藥后產品質量的潛在影響（如重塑、降解）。根據風險評估的結果，您可能需要評估TEMP在生理相關環境中的性能，以證明其可比性。這可能涉及額外的非臨床研究和/或臨床研究。
一般來說，由于需要保持TEMP的完整性和結構，因此很難獲取樣品進行測試和保留。此外，在封閉系統（如生物反應器）中制造的產品可能會給獲取樣品帶來額外的實際挑戰。此外，細胞在支架上的播種和生長可能不均勻，從而難以獲得代表性樣品。因此，在進行可比性研究設計時，必須考慮到這些獨特的挑戰。如果相關，可在臨床批次生產過程中并行生產代用品TEMP，或在可比性研究的特定生產過程中生產代用品。當使用破壞性取樣來測試未對批次放行進行常規評估的其他CQA時，此類替代TEMP尤為有用。另一種方法可以包括對培養基而不是產品本身進行取樣，此時培養基可被視為特定CQA的代表性產品樣本。
7、與FDA的溝通
我們建議細胞治療1或基因治療2（CGT）產品的申辦方和申請人與FDA的生物制品評價和研究中心（CBER）討論擬議的重大生產變更，特別是當這些生產變更將在產品生命周期的后期階段實施時。與FDA的溝通可以通過請求FDA對IND修正案或BLA產品通信（IND amendment or BLA product correspondence）中提交的相關信息進行評論，或通過正式的會議請求（參考文獻15）。用于此類討論的會議類型取決于產品生命周期的階段和需要考慮的問題。
參考文獻：
1. Guidance for Industry: Q9 Quality Risk Management, June 2006, https://www.fda.gov/media/71543/download.
2. Guidance for Industry: Q10 Pharmaceutical Quality System, April 2009, https://www.fda.gov/media/71553/download.
3. Guidance for Industry: Q8(R2) Pharmaceutical Development, November 2009, https://www.fda.gov/media/71535/download.
4. Guidance for Industry: Demonstration of Comparability of Human Biological Products, Including Therapeutic Biotechnology-derived Products, April 1996, https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidance-documents/demonstration-comparability-human-biological-products-including- therapeutic-biotechnology-derived.
5. Guidance for Industry: Q5E Comparability of Biotechnological/Biological Products Subject to Changes in Their Manufacturing Process, June 2005, https://www.fda.gov/media/71489/download.
6. Chemistry, Manufacturing, and Controls Changes to an Approved Application: Certain Biological Products; Guidance for Industry, June 2021, https://www.fda.gov/media/109615/download.
7. Guidance for Industry: Process Validation: General Principles and Practices, January 2011, https://www.fda.gov/media/71021/download.
8. Guidance for Industry: Preclinical Assessment of Investigational Cellular and GeneTherapy Products, November 2013, https://www.fda.gov/media/87564/download.
9. Guidance for Industry: M4Q: The CTD – Quality, August 2001, https://www.fda.gov/media/71581/download.
10. FDA Guidance for Industry: Comparability Protocols for Postapproval Changes to the 908 Chemistry, Manufacturing, and Controls Information in an NDA, ANDA, or BLA, 909 October 2022, https://www.fda.gov/media/162263/download.
11. Guidance for Industry: CGMP for Phase I Investigational Drugs, July 2008, https://www.fda.gov/media/70975/download.
12. Guidance for Industry: Potency Tests for Cellular and Gene Therapy Products, January 2011, https://www.fda.gov/media/79856/download.
13. Analytical Procedures and Methods Validation for Drugs and Biologics; Guidance for Industry, July 2015, https://www.fda.gov/media/87801/download.
14. Q2(R1) Validation of Analytical Procedures: Text and Methodology: Guidance for Industry, September 2021, https://www.fda.gov/media/152208/download.
15. Formal Meetings Between the FDA and Sponsors or Applicants of PDUFA Products; Draft Guidance for Industry, December 2017*, https://www.fda.gov/media/109951/download.
*When finalized, this guidance will represent FDA’s current thinking on this topic.
*本指南最終定稿后，將代表 FDA 目前對該主題的看法。
