本文通過介紹網絡數據庫，給讀者提供一種色譜柱選擇的新思路。對于色譜柱固定相各參數，本文給出了詳細解釋說明，提供了具體應用策略，給廣大讀者提供了借鑒意義。

藥品質量研究階段，有關物質方法開發是一項極具挑戰性的工作。但由于色譜柱選擇不當，導致方法開發過程低效費時。如何高效的找到自己所需的色譜柱？2017年，筆者有幸聆聽了肖柏明老師的講座，隨后便開始關注色譜柱的選擇。本文筆者結合自己的應用，簡單介紹一下如何利用固定相參數選擇色譜柱。當然，條條大道通羅馬，有些情況我們改其他參數也能獲得成功。但本文僅討論如何根據固定相參數選擇色譜柱，獲得我們想要的結果。

在討論固定相參數之前，筆者先簡單的介紹幾個日常工作中常用的色譜網站。

  http://www.hplccolumns

  http://apps.usp.org/app/USPNF/columns

  https://www.acdlabs.com

HPLC Column網站筆者使用頻率較高，可以根據不同參數，選擇不同的色譜柱。此網站與U.S.Pharmacopeial Convention網站中PQRI Database數據庫基本一致，測試方法是Snyder/Dolan法。目前，兩組數據庫內均有700多款色譜柱，市面常見色譜柱都能查到。ACD/Labs網站色譜柱參數測試方法應該是Euerby法，而U.S. Pharmacopeial Convention中USP Database數據庫是采用的美國藥典方法。這兩個數據庫的色譜柱少一些，但鑒于測試模型不同，在篩選色譜柱時可以相互參考。

本文的介紹僅以HPLC Column數據庫為例，討論如何應用這些參數來篩選色譜柱。表1是HPLC Column數據庫參數列表的部分節選，筆者僅討論Fs、H、S*、A、B、C (pH 2.8)、C (pH 7.0)及EB retention factor等參數，其他基本信息就不再討論。

表1 HPLC Column數據庫參數列表（節選）

Fs-此參數用來衡量兩款色譜柱的相似度。Snyder/Dolan法中，如果Fs≤3，可認為兩款色譜柱相互替代。利用這個參數，可以幫助我們查找相似的色譜柱。比如藥典方法規定的色譜柱，如果暫時沒有，可利用此參數查找替代品。如果方法開發中，某色譜柱無法滿足分離要求，此時需要查找與所用色譜柱Fs值差異較大的色譜柱，這樣才能提供不同的分離效果。

H/EBretention factorH-疏水性作用力，EB retention factor-乙苯保留因子。H值是所有鍵合相疏水作用力的綜合，包括一些封端基團的疏水性。EB retention factor用于衡量中性物質保留強弱。EB retentionfactor一般與H項對應，H數值大，EB retention factor一般也大，如表1中的Zorbax Bonus RP與EC Nucleosil 100-5 Protect 1色譜柱。但也有不一致的情況，如表1中的Zorbax Bonus RP與HypersilPrism C18 RP色譜柱。造成這種現象的原因可能來自兩方面：一方面是由于封端基團所致。這些基團雖然提供了H值，鑒于其接近硅膠球，未與乙苯接觸，故未提供保留作用。第二個方面可能是由于乙苯的結構所致。對于鍵合相較密的固定相，乙苯難以進入，故對其保留有影響。

根據筆者的工作經驗，采用EB retention factor這個數值判斷保留的強弱要比H值相對準確一些。有關物質方法開發中，時常遇到有關物質保留太強，需要高濃度有機相洗脫。此時可根據EB retention factor選擇數值低一些的色譜柱，減弱其保留。如表1所示，Hypersil Prism C18 RP色譜柱的EB retention factor為4.8，EC Nucleosil 100-5 Protect 1色譜柱的EB retention factor為2.7，兩者相差約兩倍。同比例有機相情況下，EC Nucleosil 100-5 Protect 1對中性物質的保留要弱一些。雖然兩款柱子EB retention factor相差約兩倍，但這并不表示有機相比例可降低2倍。根據洗脫的3倍原則，有機相比例改變10%，保留因子改變約3倍。而Hypersil Prism C18 RP與EC Nucleosil 100-5 Protect 1兩款色譜柱保留因子僅改變約2倍，因此即便更換這兩款色譜柱，其有機相比例變化也不會超過10%。這一點，在應用此參數時需要注意。

S*-空間位阻，較大的S值意味固定相鍵合的比較緊密，這會導致體積較大的溶質分子不容易進入鍵合相，保留較弱。筆者在實際工作中主要運用此參數進行非對映異構體的分離。比如苯環上不同位置的基團影響溶質分子體積的大小，這時候就可以利用S值選擇色譜柱對此類異構體分離。筆者曾遇到苯環上位置異構的兩個雜質，在多數色譜柱上均基本重合，無法有效分離。筆者利用S值選擇的色譜柱，卻基本實現了基線分離。至于S值較大對異構體分離有利還是較小有利，目前筆者幾個試驗結果證明S值較大對異構體分離有利。但此參數的規律性并不強，后期還需繼續研究總結。

A-氫鍵酸性，此參數代表固定相與堿性物質形成氫鍵能力。氫鍵酸性是由于固定相硅醇基引起，因此封端的色譜柱氫鍵酸性要比不封端的色譜柱氫鍵酸性要小一些。

B-氫鍵堿性，此參數代表固定相與酸性物質形成氫鍵的能力。形成機理并沒有較明確的解釋，目前主要有兩種看法：一是固定相殘存的金屬離子所致，二是固定相嵌入的極性基團所致。

方法開發中，通過引入參數A或者參數B可改變選擇性。表1中所示3款色譜柱均為極性嵌入的色譜柱，其B值均較大，因此容易與酸性物質形成氫鍵作用力。對于酸性化合物，此3款色譜柱均能提供與常規C18柱完全不同的分離效果。

C (pH 2.8)/ C (pH 7.0)-在pH2.8/7.0條件下的離子交換能力，離子交換能力的大小受流動相pH值及固定相類型影響。C＞0表示固定相表面帶負電荷，C＜0表示固定相表面帶正電荷。C值越大表示固定相與堿性物質的作用力越強，但同時也會降低離子化酸性物質的保留時間。

實際工作中，筆者很少利用此參數增強或減弱物質保留，而是利用其改善堿性物質的拖尾。方法開發中，鑒于硅膠本身偏酸性，因此一般首選偏酸性的流動相體系。酸性條件下，很多堿性化合物會出現拖尾，比如季銨鹽類藥物。此時若想改善峰形，便可利用C (pH 2.8)這個參數。C (pH 2.8)值較大時，色譜峰容易拖尾；而C (pH 2.8)值較小時，色譜峰形較好，但其保留也會相應減弱。同樣，在中性條件下，因硅醇基的存在導致的拖尾，可利用C (pH 7.0)進行修正。C (pH 7.0)數值為負時，填料表面攜帶正電荷，這樣可能會掩蓋硅醇基位點，避免堿性物質與其發生離子交換，減少拖尾。

以上便是筆者對HPLC Column網站各色譜柱參數的功能介紹，鑒于筆者能力所限，難免有不當之處，敬請各位讀者批評指正。另外，利用這些參數還可以幫助我們合理配置實驗室的色譜柱，避免功能類似的色譜柱，增加選擇性互補的色譜柱，讓廣大色譜工作者在方法開發時更加得心應手。

參考文獻：《現代液相色譜技術導論》

《The hydrophobic-subtraction model of reversed-phasecolumn selectivity》

《Column Selection for HPLC Method Development》

《A Simple and Interactive Column Classification forReversed-Phase Liquid Chromatography》

《Evaluation of Retention and Selectivity Using BiphenylStationary Phases》

《Avoiding Reversed-Phase Chromatography Problems ThroughInformed Method Development Practices: Choosing the Stationary-Phase Chemistry》