植物酶可以提高動物的消化功能，催化機體內的生化反應，促進機體的新陳代謝，從而彌補因應激等原因消化酶分泌的減少。所以很多時候，類似植酸酶、蛋白酶、纖維素酶、脂肪酶、果膠酶、淀粉酶等植物酶制劑會被作為很好的飼料添加劑，應用在飼料產品的生產加工里面。這時候，如果企業能夠準確的把握酶活性、酶反應的相關數據就能夠更好的設計一款符合市場需求的畜禽飼料。 

重慶某生物制品公司準備以植酸酶為研究對象，希望了解該植物酶活性來設計一款飼料產品。植物酶活性的檢測可以使用分光光度法進行測定，這一點，可以依據我國國家標準GB/T 18634-2009《飼用植酸酶活性的測定 分光光度法》來進行測定。通過實驗室分析手段來進行評價， 我們可以用來篩選酶制劑的優劣，了解植物酶的最適反應溫度、最適反應pH,pH的穩定性、底物的濃度對酶活性檢測的影響等數據，從而完全反映添加植物酶后飼料的真實使用效果。所以，本次檢測方案基本參考GB/T 18634-2009給出的方法。

一、方法原理分析

使用分光光度法檢測植酸酶活性，原理主要是利用植酸酶在一定溫度和 pH 條件下，可以水解底物植酸鈉，從而生成正磷酸和肌醇衍生物，只要在酸性溶液中，用釩鉬酸氨處理，就會生成黃色的【（ NH4） 3PO 4 NH 4 VO 3 · 16M O O 3 】復合物，然后我們用分光光度計，在波長 415nm 下進行比色測定就可以了解其酶活性。

二、檢測方法步驟

1.取有代表性樣品， 用四分法將試樣縮分至200g， 植酸酶產品不需粉碎， 配合飼料和添加劑預混合飼料需粉碎通過0.45mm標準篩,裝入密封容器,防止試樣成分變化。

2.稱取樣品5000U/g的0.4~0.6g，精確至0.0001g，置于250mL三角瓶中，準確加入100mL乙酸緩沖液（2），放到空氣浴搖床上振蕩30min或磁力攪拌器上高速攪拌30min，在離心機上以4000r/min離心10min。分取不同體積的上清液用乙酸緩沖液（2）稀釋，使樣液濃度保持在0.4U/mL左右，待反應。建議精確移取上清液1mL至25mL容量瓶中，用乙酸緩沖液（2）定容，搖勻。再繼續精確移取1mL試液至25mL容量瓶中，定容，搖勻，稀釋至31250倍。

3.取10mL試管，精確移取2mL稀釋液至試管中，同時做試樣空白。將樣品放入37℃水浴鍋預熱5min，先將空白加4mL終止液（1.3.7），再將樣與空白依次加入4mL底物植酸鈉（1.3.3），從加底物開始，向每支試管中加入試劑的時間間隔要絕對一致，加液后立即混勻，將其放入37℃水浴水解30min；取出后將樣品各加入4mL終止液。

4.反應后的試樣在室溫下靜置10min，如出現混濁需在離心機（1.4.7）上以4000轉/min離心10min，上清液以標準曲線的空白調零在分光光度計415nm波長處測定樣品空白（A0）和樣品溶液（A）的吸光值，A-A0為實測吸光值，用直線回歸方程計算植酸酶的活性。

三、酶反應分析

1.酶反應的最適溫度

酶反應的最適溫度調節恒溫水浴鍋，在不同溫度下(15~70℃)進行酶促反應。以最高酶活為100%，其他條件下的酶活占最高酶活的百分數即為該酶在此溫度條件的相對酶活。植酸酶作為一種酶制劑，對溫度非常敏感，溫度低會降低它的生物活性；溫度高也會降低其生物活性，甚至完全失活。植酸酶隨著溫度的增加，酶活呈上升趨勢，到55℃左右酶活達到最高，溫度超過55℃后酶活開始下降，通過檢測，該酶的最適反應溫度為55℃。

2.酶反應的最適pH值

配制0.1mol的乙酸-乙酸鈉緩沖溶液，在不同的pH值((1.0~7.0)下進行酶促反應。以最高酶活為100%，其他條件下的酶活占最高酶活的百分數即為該酶在此pH條件的相對酶活。通過檢測可知，植酸酶的最適pH值在4.0左右。pH值在2.5~5.5，能保持70%以上的酶活，該酶有較寬的pH適宜范圍，可以在消化道內充分發揮作用。

3.底物濃度對酶活的影響

配制不同反應濃度(0.1~5.0mmol/L)的底物，在常規條件下測定酶活，以最高酶活為100%，在其他條件下的酶活，占最高酶活的百分數即為該酶在此底物濃度下的相對酶活。隨著底物濃度的增加酶活逐漸上升，當底物濃度足夠大時，酶全部被底物所飽和，此時反應速度達到最大值。隨著底物濃度的增加，樣品空白的本底值逐漸增大，會影響酶活的測定。

四、總結

通過分光光度計法檢測，我們可以了解到該酶制劑樣品的最適反應溫度為 55℃；最適反應pH值為4.0。酶活的測定在飼料用酶制劑產品的質量檢驗、產品標簽和酶活保證方面是必不可少的項目， 而酶活的測定是一種非常細致的工作，所以，我們一定要找準依據標準，深刻理解影響酶制劑酶活測定的主要因素，正確把握各影響因素的關鍵點，從而才能為企業篩選優質酶制劑、確定復合酶制劑的最佳組方及確定產品的最佳添加量等提供更好的數據支撐。

除了GB/T 18634-2009外，如果想檢測其他植物酶活性，參考的標準還有 GB/T 23874-2009  《飼料添加劑木聚糖酶活力的測定 分光光度法 》、 GB/T 28715-2012《飼料添加劑酸性、中性蛋白酶活力的測定 分光光度法》、 GB/T 33409-2016  《β-半乳糖苷酶活性檢測方法 分光光度法》、 GB/T 23881-2009 《 飼用纖維素酶活性的測定 濾紙法》 等等，大家可酌情參考。當然，該重慶某生物制品公司也十分認可我們的檢測方案。