摘要：

你有沒有遇到過口服固體顆粒或粉末的混合均勻度10份結果，低低又高高好比浪濤的情況呢？RSD超過了5.0%，QC檢測人員覺得是車間沒有混合均勻導致的，制劑研發或車間這邊呢，估計是覺得QC檢測有問題導致的……

以上情況估計制劑研發或生產人員、QC檢測人員遇到過吧，出現異常是不是很頭疼呢？RSD超標，到底是混合不均勻？是QC檢測的原因？還是其他原因呢？除了沒有混合均勻和QC檢驗問題，還有沒有原因會導致RSD超標的原因呢？

正文：

在口服固體制劑的藥物研發與生產過程中，為確保混合物料的混合均勻度和中控劑量單位均勻度滿足生產需求，確保每個單位劑量的物料中含有均等的活性物質，通過混合均勻度來考察是否混合均勻。2022年01月發布的《化藥口服固體制劑混合均勻度和中控劑量單位均勻度研究指導原則（試行）》中描述：“建議在混合設備和/或中間體物料容器中至少選取 10個取樣點，每個取樣點至少取3 份混合樣品。單份樣品取樣量通常應在 1-10倍單位劑量范圍內，樣品應全量用于混合均勻度檢測。建議評估粉體取樣量的影響，當取樣量大于3倍劑量時，需進行論證或科學說明，并提供相關依據，應避免出現二次取樣情況，以確保取樣量能夠用于測定混合物的真實混合均勻度。”從上述內容中可以看出，評估混合物的真實混合均勻度除了檢驗過程，取樣也是非常關鍵的。

取樣是確保檢測結果有代表性的前提，那么實際工作中如何實現“避免出現二次取樣情況“呢？如何實現“樣品應全量用于混合均勻度檢測”呢？如何設計取樣量呢？混合均勻度取樣與檢測工作中應該注意哪些？

一、什么是全值取樣檢測法？

全值取樣檢測法為一次取樣的樣品全部用于混合均勻度檢測，減少多次稱量、樣品轉移等動作可能造成的樣品分層或聚集，也可預防采用自封口取樣袋盛裝樣品對其造成的吸附、分層等現象。同時結合合理的取樣設計及檢驗來真實反映產品的混合均一性，也能反映出取樣的代表性和科學性。尤其對于規格較小，活性成分占比較低的產品，如采用干法直混的顆粒，物料流動性甚好，容易產生分層以及活性成分聚集等問題，加上需要考察混合均勻度，采用全值取樣檢測法可有效避免取樣誤差帶來的麻煩。

二、全值取樣量如何合理計算呢？

對于全值取樣檢測法的取樣量需要提前設計好，是不是有人想問：取樣量不就是1-10個單倍劑量嗎，為什么還要計算取樣量呢？或者部分人員想著只要在1-3單倍劑量范圍內，我隨便取就行呀！是的，您說的沒有錯，但是您的隨便取，帶給后續檢測的麻煩與困難多多呀！他們可能會面臨絞盡腦汁計算合適的稀釋方法、不容易找到匹配的容量瓶、移液管、或者使用到大大小小規格不一的容量瓶，哎，一不小心混淆了就出錯了……。還有，檢驗時配制的溶劑、稀釋劑該配多少合適呢？少了怕不夠，多了怕浪費還不環保……可能還有其他預料不到的額外工作。所以，一切源于設計，取樣量也需要在規定的范圍內合理設計。指導原則中建議取樣量通常在1-10倍單位計量范圍內，當取樣量大于3倍劑量時，需進行論證或科學說明，并提供相關依據。實際設計取樣量時應同時考慮以下因素：

（1）預先知道單片的理論片重以及每片中活性成分的量（通常取樣量為單倍劑量的1～3倍）

（2）查看含量測定的分析方法驗證資料中準確度和線性的上下限及其濃度（最終計算的取樣量及檢測濃度需在其可準確測定的范圍內）。

題外話：在做成品含量的分析方法驗證準確度時，一定要考慮到含量均勻度和顆粒的混合均勻度的檢測濃度，準確度的高限和低限可以做寬一點，將其包括在內。

（3）查看SOP中供試品溶液的最終檢測濃度（用于折算取樣量的上下限是否在含量分析方法驗證的線性和準確度范圍內）、稀釋方法（要考慮QC檢測稀釋倍數常用，能夠找到合適的量瓶及合適的溶劑等因素）

（4）根據線性范圍和準確度重合的部分確定其濃度范圍，從而推算其取樣量

（5）同時考慮檢測時容量瓶的常規性、溶劑使用量的合理性（能完全溶解、確保充足量的供試品溶液、還要考慮不要增加過多的廢液增加環保壓力）、API的溶解度等。

示例：

某一口服固體制劑片劑，規格為20mg,片重約為160mg,含量檢測濃度為每1ml含XXXX約20ug的溶液。其成品分析方法驗證準確度與線性重合的最低濃度為50%（0.5倍），最高濃度為限度濃度的150%（1.5倍）。綜合以上信息，計算其全值取樣量思路為：先考慮1～3倍的單倍劑量，則取樣量通常在為160 mg～480 mg（1-3片）之間，其分析方法驗證中準確度和線性的上限為限度濃度的150%，也就是1.5倍，即160 mg*1.5倍=240 mg。則取樣量的范圍為160mg～240mg之間即可（1-1.5片的量，在定量檢測濃度內）。

當然，你也可以不提前設計取樣量，嘩嘩嘩的一通取樣，讓QC人員各種計算，最終保持檢測濃度在分析方法驗證的范圍內。這樣做的話，可能取樣人員的耳朵會發紅吧！

三、全值取樣檢測如何操作呢？

實際工作中如何實現“樣品應全部用于混合均勻度檢測”，如何實現“避免出現二次取樣情況”呢？這就需要取樣人員與檢驗人員的密切合作和無縫對接了。

分析人員：取樣人員預先與分析人員溝通好取樣點數，提前準備好足量的 “取樣小瓶”。預先將清潔干凈并徹底干燥的，帶有螺旋蓋的取樣小瓶進行編號，注意瓶蓋和瓶身都需要編號。再逐一在精度合適的分析天平上精密稱定其重量并記錄打印。常用的有10ml（還有5 ml 、20ml的），大小合適，瓶口也不會太小，便于取樣后樣品放入。

取樣人員：選取合適的取樣工具與單劑量取樣模塊（帶有不同規格取樣模板的取樣探針或其他合適工具），在適合位置（參考指導原則及取樣方案中）按照計算出的取樣范圍取樣。取樣時注意：盡量一次取樣，避免反復來回取樣，更不能像食堂打菜的大師傅一樣小手手抖抖抖。小心將樣品放入取樣小瓶后，擰緊瓶蓋，用干燥清潔且不會有脫落纖維的布將取樣小瓶的瓶身及瓶蓋外壁擦拭干凈，統一放置到取樣籃中，小心轉移到實驗室（對光敏感的樣品還需要做好避光或遮光措施）。

分析人員：接到樣品逐一再次精密稱定重量（注意與稱量空瓶的天平保持一致），與空瓶之差即為供試品的重量，最后采用SOP中規定的溶劑將取樣小瓶中的供試品少量多次轉移到容量瓶中，繼續后續的溶解、稀釋、定容等操作即可。

四、全值取樣檢測關鍵點提示

取樣小瓶最好采用棕色，避免有些產品見光分解等，取樣后要將蓋子密封好，小心迅速的送至實驗室。

取樣過程一定避免出現二次取樣的動作。比如，用取樣模塊取出樣品后，再用稱量勺稱取需要的樣品量。對于這種情況，需要提前計算好合適的取樣量，申報適合的取樣模塊解決，而不能通過多次稱量、取樣的方式（多余的操作可能會導致樣品分層等情況發生）。

取樣完成后，一定要將取樣小瓶和瓶蓋外壁沾的粉末擦拭干凈，避免影響稱樣量。

遇到制粒過程中用到粘合劑或SOP中規定先用水崩解，然后再用其他溶劑溶解活性成分的情況，需要注意樣品從取樣小瓶中轉移到容量瓶中的過程。實際操作中，可直接將水加入到取樣小瓶中進行振搖或浸泡、或超聲等操作，使得活性成分從粘合劑或其他輔料的包裹中分散出來，再用溶劑少量多次將取樣小瓶中的樣品溶液沖洗轉移至容量瓶中。

實際工作中遇到混合階段的結果高的高、低的低的情況，除了需要從生產過程分析和調查，還要關注取樣方式、取樣工具、盛裝樣品的容器與檢測方法等的合理性。

案例：

曾經有那么一個產品，做總混的混合均勻度檢測時，QC檢驗10個不同取樣點中的樣品結果有合格的，有低于限度的，RSD超出了規定的5.0%，QC人員將此結果反饋給了QA和生產車間及研發人員，QA、生產車間以及研發人員分析了總混工序，就是干法直混，導致混合不均勻的因素很少，就懷疑是不是QC檢測結果不準的原因，QC也分析檢驗過程，就是稱取樣品加入溶劑，直接振搖后超聲10分鐘溶液后定容……,檢測過程也很簡單無異常，最后經過反復分析、假設試驗、擴大取樣等調查發現是因為取樣方式不合適導致的樣品分層，QC檢驗結果不具備代表性。原來，QA人員在不同取樣位置取樣后，將樣品裝入聚乙烯的自封袋，送到QC后，QC人員從每個自封袋中再稱取檢驗需要的數量后進行檢測……在如此的取樣---放入自封袋（有較大空間，利于粉末流動）---送到QC（過程中有晃動和振動，加速分層等）---QC再次從自封袋中稱取需要的檢驗量（分層后不知道隨機稱取的是含API多的還是少的，所以會出現結果高的高、低的低的情況）。隨后，改為全量取樣后解決了該問題。

取樣人員的心聲：曾經有那么一個好的取樣方法，我沒有獲知，如果給我一次重新取樣的機會，那么就是”全值取樣檢測法“；如果非要給這種方法加上一個時限，那么我希望是每次混合均勻度取樣時。

結語：以上內容源于實際工作經驗總結而得，對于人員操作中容易有疑惑和出現異常的內容進行提示。對于指導原則中有的內容，如取樣計劃、取樣點選擇、驗收標準等不再做贅述。如有不妥，請指正

參考資料：《化藥口服固體制劑混合均勻度和中控劑量單位均勻度研究及時指導原則》