新版《中國藥典》中對無菌檢查法等做出了相關(guān)要求，并制定了配套的無菌檢查用隔離系統(tǒng)驗證和應(yīng)用指導(dǎo)原則，本文對指導(dǎo)原則相關(guān)要點進行了整理，供大家參考。   

無菌檢查試驗應(yīng)用隔離系統(tǒng)時，相關(guān)的風(fēng)險管理應(yīng)貫穿無菌檢查用隔離系統(tǒng)的設(shè)計、制造、安裝、調(diào)試、確認(rèn)、使用、監(jiān)測、維護和周期性回顧等工作流程中。

無菌檢查用隔離系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)

艙體

（1）隔離系統(tǒng)的艙體按制造材質(zhì)，可分為硬艙隔離系統(tǒng)和軟艙隔離系統(tǒng)，硬艙隔離系統(tǒng)的艙體一般由不銹鋼、玻璃或硬質(zhì)塑料等制成，軟艙隔離系統(tǒng)的艙體一般由軟質(zhì)塑料制成。

（2）手套-袖套組件或半身操作服為安裝在艙體上的部件，用于實現(xiàn)艙內(nèi)的試驗操作，半身服覆蓋操作人員的軀干，并配有透明頭盔和通風(fēng)裝置。

空氣處理系統(tǒng)

（1）無菌檢查用隔離系統(tǒng)應(yīng)配備可截留微生物的高效空氣過濾系統(tǒng)（或更高級別的過濾系統(tǒng)）。

（2）隔離系統(tǒng)按內(nèi)部氣流組織區(qū)分，可分為單向流隔離系統(tǒng)和非單向流隔離系統(tǒng)。

（3）靜態(tài)時內(nèi)部環(huán)境的潔凈度應(yīng)達到A級空氣潔凈度的要求。

（4）無菌檢查用隔離系統(tǒng)一般在正壓下操作，內(nèi)部應(yīng)通過持續(xù)送風(fēng)保持足夠的正壓來維持內(nèi)部的無菌環(huán)境。

傳遞裝置

（1）滅菌后的培養(yǎng)基、稀釋液和實驗用品可以通過有表面滅菌功能的傳遞艙直接無菌傳遞到操作艙內(nèi)。

（2）不同的隔離系統(tǒng)艙體也可以通過專門設(shè)計的快速傳遞門（RapidTransferPorts，RTP）連接，以實現(xiàn)將實驗物品在兩個或多個艙體之間進行無菌傳遞。

（3）RTP上未經(jīng)滅菌的表面通過互鎖環(huán)或法蘭互相疊合，并通過密封圈封閉，從而防止微生物進入隔離系統(tǒng)內(nèi)。

滅菌設(shè)備

（1）隔離系統(tǒng)一般采用汽化的滅菌劑對內(nèi)部環(huán)境進行表面滅菌，目前較常用的滅菌劑包括汽化過氧化氫、過氧乙酸等。

（2）滅菌劑發(fā)生器可集成于隔離系統(tǒng)中，也可獨立于隔離系統(tǒng)，獨立設(shè)計的滅菌系統(tǒng)與隔離系統(tǒng)之間的氣體管路連接，應(yīng)確保其密封性。

（3）滅菌劑應(yīng)通過有效過濾后進入隔離系統(tǒng)內(nèi)，滅菌結(jié)束后須對滅菌劑進行排空。

配套設(shè)備與輔助設(shè)施

（1）監(jiān)測設(shè)備

隔離系統(tǒng)應(yīng)配置對內(nèi)部潔凈環(huán)境和系統(tǒng)運行狀況進行監(jiān)測、報警及記錄的設(shè)備。監(jiān)測設(shè)備應(yīng)確保數(shù)據(jù)得到客觀真實的記錄，數(shù)據(jù)記錄的可靠性應(yīng)符合國家有關(guān)規(guī)定。

（2）無菌檢查設(shè)備和工具

隔離系統(tǒng)內(nèi)部安裝無菌檢查使用的配套設(shè)備和輔助設(shè)施，如無菌檢查過程中使用的蠕動泵、真空泵、物料裝載支架、廢棄物通道等。

5、菌液制備

（1）接種金葡、銅綠、枯草的新鮮培養(yǎng)物至胰酪大豆陳液體培養(yǎng)基中或胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)基上，接種生孢梭菌的新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中，30~35°C培養(yǎng)18~24小時。

（2）接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上， 20~25°C培養(yǎng)2~3天， 上述培養(yǎng)物用pH7.0無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液或0.9％無菌氯化鈉溶液制成適宜濃度菌懸液。

（3）接種黑曲霉至沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基或馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上，20~25°C培養(yǎng)5~7天或直到獲得豐富的孢子，加入適量含0. 05%(ml/ml) 聚山梨酯80的pH7. 0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或 0.9%無菌氯化鈉溶液 ,將孢子洗脫。

（4）采用適宜的方法吸出孢子懸液至無菌試管內(nèi)，制成適宜濃度的孢子懸液。

（5）菌懸液若在室溫下放置，一般應(yīng)在2小時內(nèi)使用；若保存在 2～8℃可在 24小時內(nèi)使用。黑曲霉孢子懸液可保存在2～8℃,在驗證過的貯存期內(nèi)使用。

注意：白色念珠菌的培養(yǎng)時間由原來的24~48小時調(diào)整為2~3 天；菌懸液不再強制要求100cfu/ml以下；洗黑曲孢子的聚山梨酯80的溶液不再強制3~5ml，而應(yīng)根據(jù)孢子的噴落量靈活調(diào)整。

6、培養(yǎng)基接種 

（1）取適宜裝量的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基7支，分別接種不大于l00cfu的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌各2支，另1支不接種作為空白對照.

（2）取適宜裝量的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基7支，分別接種不大于100cfu的枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接種作為空白對照。

（3）接種細(xì)菌的培養(yǎng)管培養(yǎng)時間不超過3天，接種真菌的培養(yǎng)管培養(yǎng)時間不得超過5天。逐日觀察結(jié)果。

注意：真菌的培養(yǎng)時間要稍微長，其他的應(yīng)控制在3天之內(nèi)，時間長了容易污染環(huán)境或造成其他實驗室危害。

7、方法適用性試驗

進行產(chǎn)品無菌檢查時，應(yīng)進行方法適用性試驗，以確認(rèn)所采用的方法適合于該產(chǎn)品的無菌檢查。若檢驗程序或產(chǎn)品發(fā)生變化可能影響檢驗結(jié)果時，應(yīng)重新進行方法適用性試驗。