本文介紹了《中華人民共和國藥典》2020 年版三部中病毒性疫苗制品相關的增修訂情況，主要內容包括品種收載情況及新增品種概述、增修訂品種及通則情況以及共性增修訂內容等。對增修訂的特點及原因進行分析，并提出了對下一步工作的建議，便于相關從業人員更好地理解和執行《中華人民共和國藥典》2020 年版。

根據第十一屆國家藥典委員會全體會議通過的《中華人民共和國藥典》2020 年版編制大綱，經各課題承擔單位起草、復核和疫苗制品專業委員會審核，完成了《中華人民共和國藥典》2020 年版三部病毒性疫苗的增修訂，目前《中華人民共和國藥典》2020 年版已正式出版，現將病毒性疫苗的主要增修訂情況介紹如下，為新版藥典的實施提供支持和參考。

一、 品種遴選及收載情況

按照國家藥品監督管理局官方網站可查詢的信息，我國目前已上市的病毒性疫苗基本上已全部被收載入《中華人民共和國藥典》2015 版，未收載的已上市病毒性疫苗為數非常有限。依照國家藥品標準制修訂工作程序和品種遴選原則，經第十一屆藥典委員會疫苗專業委員會和醫學專業委員會從藥學和醫學兩方面按照“安全有效、質量可控”審議確定，將黃熱減毒活疫苗、凍干人用狂犬病疫苗( 人二倍體細胞) 、Sabin 株脊髓灰質炎滅活疫苗( Vero 細胞) 、口服Ⅰ型～Ⅲ型脊髓灰質炎減毒活疫苗( 人二倍體細胞) 等 4 個品種作為《中華人民共和國藥典》2020 年版三部擬新增品種并立項開展標準研究，經相關課題承擔單位的起草、復核和擴大驗證后，提交第十一屆藥典委員會相關專業委員會審議通過，經國家藥品監督管理局批準后正式收載于本版藥典。

二、新增品種概述

2．1 黃熱減毒活疫苗

該疫苗系采用黃熱病毒減毒株接種雞胚，經培養、收獲組織、研磨、離心收獲病毒上清液、加入適宜穩定劑凍干制成。用于預防黃熱病。該品種目前僅由 1 家企業生產，已上市多年，已被《中華人民共和國藥典》2015 年第一增本版收載，且在《歐洲藥典》( EP) 、《英國藥典》( BP) 、《美國藥典》( USP) 和《印度藥典》( IP) 均已收載。

相比于《中華人民共和國藥典》2015 年版第一增補本，《中華人民共和國藥典》2020 年版各論中做出 2 項修訂，即將“2．3．1 接種雞胚”的參數不再具體化，僅進行通用性描述; 同其他相關疫苗產品，為進一步明確“熱穩定性試驗”系為生產企業對該產品上市后特定有效期內的穩定性預測而設定的、應在出廠檢驗時進行的檢測項目，出廠后不再適合重復檢測，將“3．4．7 熱穩定性試驗”由“成品出廠前應進行熱穩定性試驗”修訂為“由生產單位在成品入庫前取樣測定”。

2．2 凍干人用狂犬病疫苗( 人二倍體細胞) 

該疫苗系采用狂犬病病毒固定毒種接種于人二倍體細胞，經培養、收獲、濃縮純化、滅活病毒后，加入適宜穩定劑凍干制成，用于預防狂犬病。國內首家凍干人用狂犬病疫苗( 人二倍體細胞) 系采用 Pitman-Moore 株狂犬病固定毒作為毒種，接種 MＲC-5 細胞進行制備，于 2014 年獲批上市，目前國內僅 1 家企業生產，多家企業處于研發或申報階段。

本品于2020 年首次收載入《中華人民共和國藥典》?！吨腥A人民共和國藥典》2020 年版中本品相較于凍干人用狂犬病疫苗( Vero 細胞) ，質量標準除部分差異外，整體上基本一致。部分差異包括，凍干人用狂犬病疫苗( Vero 細胞) 明確了毒種傳代限定具體代次，并明確了毒種及病毒單次收獲液的病毒滴度要求以及原液蛋白含量要求，凍干人用狂犬病疫苗( 人二倍體細胞) 僅規定應符合批準的要求，未明確具體傳代限定代次和病毒滴度限值。另外，不同于 Vero 細胞，人二倍體細胞屬于人源細胞，無需檢測宿主細胞蛋白質殘留量以及宿主細胞 DNA殘留量。

2．3 Sabin 株脊髓灰質炎滅活疫苗( Vero 細胞)該疫苗系采用脊髓灰質炎病毒Ⅰ～Ⅲ型減毒株分別接種于 Vero 細胞，經病毒培養、收獲、濃縮、純化、滅活、按比例混合后制成。用于預防由脊髓灰質炎Ⅰ～Ⅲ型病毒導致的脊髓灰質炎。

該品種于 2015 年首次批準上市，是我國自主研發一類新藥，具有良好的安全性和免疫原性，已納入國家計劃免疫程序。目前國內有 2 家企業生產，為《中華人民共和國藥典》收載的第 1 個滅活的脊髓灰質炎疫苗，接種途徑為肌內注射，用于預防兒童脊髓灰質炎病毒感染，避免了減毒活疫苗可能帶來的疫苗相關病例的缺陷，提高了疫苗接種的安全性 ［1］ 。

目前國外藥典收載采用脊髓灰質炎病毒強毒株Salk 株制備的脊髓灰質炎滅活疫苗，不包括 Sabin株制備的脊髓灰質炎滅活疫苗。2014 年版 WHO 指導原則脊髓灰質炎滅活疫苗收載了 Sabin 株脊髓灰質炎滅活疫苗內容［2］ 。

按照《中華人民共和國藥典》2015 年版三部生物制品通則［3］ 、人用疫苗總論的要求，根據已上市 2家品種的國家藥品標準，參考 WHO 脊髓灰質炎滅活疫苗指導原則［2］ 及《中華人民共和國藥典》2015年版三部口服脊髓灰質炎滅活疫苗各論，綜合已獲批上市產品的注冊標準，擬定了本品各論。目前國內上市使用的 Sabin 株脊髓灰質炎滅活疫苗研發按照 WHO 指導原則中脊髓灰質炎滅活疫苗要求進行，除 Sabin 株特有質量控制項目外，其他質量控制項目和質量標準與 WHO 指導原則中脊髓灰質炎滅活疫苗基本一致。

相較于口服脊髓灰質炎減毒活疫苗，本品毒種檢定項目中對鑒別試驗、病毒滴定的培養溫度條件進行了修訂; 根據 WHO 及國外相關指南，在分枝桿菌檢查增加了“也可采用經過驗證的分枝桿菌核酸檢測替代培養法”，家兔檢查中增加了“經原代猴腎細胞制備毒種應作該項檢查”，免疫原性檢查中增加亞種子批，增加 Sabin 株基因鑒別試驗，刪除了 rct特征試驗。純化液中設置比活性測定，滅活驗證試驗按照 WHO 指導原則進行。半成品檢測細菌、真菌，并從體外效力( D 抗原含量測定) 和體內效力( 大鼠效力試驗) 兩方面評估。成品檢測包括進行鑒別、理化、安全性和生物學活性等項目的全面評估。

2．4 口服Ⅰ和Ⅲ型脊髓灰質炎減毒活疫苗( 人二倍體細胞) 該疫苗系采用脊髓灰質炎病毒Ⅰ和Ⅲ型減毒株分別接種于人二倍體細胞，經培養、收獲病毒液制成的二價液體疫苗，用于預防Ⅰ和Ⅲ型脊髓灰質炎。本品于 2015 年首次批準上市，目前國內由 1家企業生產?！吨腥A人民共和國藥典》2015 年版收載的脊髓灰質炎疫苗口服制劑包括脊髓灰質炎減毒活疫苗糖丸( 人二倍體細胞)、口服脊髓灰質炎減毒活疫苗( 猴腎細胞) 和脊髓灰質炎減毒活疫苗糖丸( 猴腎細胞) 。歐洲藥典、日本藥典、印度藥典和巴西藥典收載的均為含Ⅰ～Ⅲ型的脊髓灰質炎病毒口服液體制劑。

基于 WHO 全球消滅脊髓灰質炎的計劃，為消除由Ⅱ型疫苗株病毒引起的疫苗相關脊髓灰質炎病例( VDPV) ，我國自 2016 年 5 月 1 日起實施新的脊髓灰質炎疫苗免疫策略，停用三價脊髓灰質炎減毒活疫苗，用二價脊髓灰質炎減毒活疫苗替代三價，同時將脊髓灰質炎滅活疫苗( IPV) 納入國家免疫規劃。口服Ⅰ和Ⅲ型脊髓灰質炎減毒活疫苗( 人二倍體細胞，bOPV) 與脊髓灰質炎減毒活疫苗糖丸( 人二倍體細胞，tOPV) 使用相同的生產用Ⅰ型和Ⅲ型脊髓灰質炎病毒株，且在半成品之前的生產工藝二者基本不變，質量控制要求保持一致。對于成品質量標準，其中外觀、裝量、抗生素殘留和 pH 值《歐洲藥典》未做規定。分型病毒滴度和熱穩定性試驗擬定的國家標準與歐洲標準一致。其他常規項目均符合我國藥典的統一要求。具體質量標準方面，bOPV與 tOPV 種子批毒種、單一收獲液、單價原液檢定項目及標準設置一致; 半成品檢定項目一致，但病毒滴度標準存在差異; 成品檢定項目方面，bOPV 與tOPV 在病毒滴度、外觀和裝量差異質量標準方面存在差異，bOPV 較 tOPV 增加抗生素殘留檢定項和pH 值檢定項。

三、增修訂品種情況

2020 年版藥典對大部分《中華人民共和國藥典》2015 版已收載且載入 2020 年版藥典的預防類病毒性疫苗進行了修訂。品種修訂主要體現以下幾個方面［1］ : ① 對質量標準和生產工藝控制描述進行了規范和簡化。② 進一步優化了安全性檢測方法。③ 完善病毒減毒活疫苗毒種免疫原性檢查，結合藥品注冊管理要求逐步實現與國際標準的接軌。④ 明確全基因序列測定在減毒活疫苗質量控制中的應用和要求。⑤ 結合國家對疫苗上市后不良反應監測的相關要求及國家免疫規劃的實施情況，取消疫苗使用說明內容的收載。

對質量標準和生產工藝控制描述進行了規范和簡化，主要包括對品種制造部分生產工藝步驟和參數等內容進行修訂，質量標準項目類別順序進行調整，對檢定項目進行修訂等。

修訂后的生產工藝內容通用性和普適性增強，具體包括如細胞制備的溫度、培養基，病毒接種量、培養溫度，病毒收獲時間，病毒滅活工藝參數，種子批限定代次，單次收獲液保存、原液保存等由《中華人民共和國藥典》2015 年版中具體參數描述修訂為通用性描述，如采用“適宜的”、“按批準的執行”等詞句進行描述。其中特殊情況為在重組乙型肝炎疫苗( 漢遜酵母) 各論中新增了1種規格。

對質量標準項目順序進行調整，主要為將單次病毒收獲液由制造項下轉移至檢定項下，體現對制品質量控制要求的系統性。檢定項目修訂包括將熱穩定性試驗明確為在成品出廠前測定; 基于國際上對鋁佐劑含量標示的慣例，將氫氧化鋁含量測定修訂為鋁含量測定，標準限度以鋁含量作為標示。此外，增加乙腦炎減毒活疫苗外觀項下的相關描述;將森林腦炎滅活疫苗各論中牛血清白蛋白殘留量由“ng·mL－1”修訂為“ng·劑－1”，DNA 殘留“pg·mL－1 ”修訂為“pg·－1”，與國內外其他相關技術要求保持一致; 流感全病毒滅活疫苗和流感病毒裂解疫苗血凝素含量要求由“應為配制量的 80% ～120%”修訂為“應不低于標示量 80%”; 流感病毒裂解疫苗卵清蛋白含量由“應不高于 500 ng·mL－1”修訂為“應不高于 200 ng·mL－1”。

進一步優化了安全性檢測方法。例如，對凍干人用狂犬病疫苗( Vero 細胞) 品種的宿主細胞蛋白和 DNA 殘留量檢定方法優化及標準化。2020 年版藥典采用新建立的 Vero 細胞蛋白質國家標準品作為標準品檢測 Vero 細胞蛋白質殘留量，根據研究數據，將殘留限度由“＜4．0 μg·劑－1”修訂為“＜6．0 μg·劑－1”; 同時增訂 Vero 細胞 DNA 殘留量測定采用熒光定量 PCＲ( qPCＲ) 法( 通則 3407 第三法) ，該方法能準確定量且采用客觀的結果判定方式并可區分片段大小。由于方法驗證時尚未完全排除成品對檢測方法的干擾，因此，2020 年版藥典將該項檢測納入原液檢定項進行檢測，對應限度標準由“應不高于100 pg·劑－1”調整為“應不高于 3 ng·劑－1”。

完善病毒減毒活疫苗毒種免疫原性檢查，將凍干甲型肝炎減毒活疫苗、麻疹減毒活疫苗、腮腺炎減毒活疫苗、風疹減毒活疫苗( 人二倍體細胞) 等已收載減毒活疫苗各論毒種檢定項下的免疫原性檢查要求修訂為“建立或變更主種子批時應確認主種子批的免疫原性，必要時應根據藥品注冊管理的相關要求開展相應的臨床試驗”。

依據生物制品通則《生物制品生產檢定用菌毒種管理及質量控制》相關要求，明確減毒活疫苗各論全基因序列測定的應用和要求。

四、增修訂通則情況

新增黃熱減毒活疫苗猴體試驗檢查法通則( “3307 黃熱減毒活疫苗猴體試驗”)。

疫苗效力測定方面，新增通則“3534 Sabin 株脊髓灰質炎滅活疫苗效力試驗”。人用狂犬病疫苗效價測定在傳統經典的 NIH 效力試驗方法基礎上，新增通則“3503 人用狂犬病疫苗效價測定法中第二法改良 NIH 法”，以備在特定情況下的疫苗檢定使用。改良 NIH 法是在 NIH 法基礎上采用參考疫苗和供試品單點稀釋和結果判定的方法，可減少實驗動物用量、降低實驗人員的工作量和操作時間等。WHO對于單一稀釋法用于人用狂犬病疫苗的推薦意見是疫苗上市后，至少經過 2 年的連續考察及確認，當疫苗批間一致性良好、質量可控時，經國家監管當局批準，改良 NIH 法可用于上述企業生產的疫苗批簽發的效價測定。當某批疫苗采用單一稀釋法測定疫苗效價不符合規定時，應采用經典的 NIH 法進行復試和結果判定。

五、共性增修訂內容

5．1 疫苗總論修訂 ［4］

參考《歐洲藥典》9．0 版 ［5］修訂聯合疫苗定義，修訂輔料人血白蛋白來源要求，增訂內包材的質控要求，半成品配制增加對多批原液合并的要求，半成品檢測項目僅保留無菌檢查和含鋁佐劑相關項目檢查。工藝雜質殘留檢測方面考慮 ICH ［6］ 對工藝雜質按照與疫苗關鍵質量屬性相關的工藝雜質和一般工藝雜質 2 類分別要求。新增對聯合疫苗、標準物質的要求。參考 ICH 5C ［7］ 更加明確穩定性評價的表述，便于實際操作?；?2020年版藥典疫苗各論不再收載使用說明，因此，在總論中進一步明確說明書應符合國家相關規定等原則性要求。

2020 年版藥典“人用疫苗總論”對于原液制備的關鍵修訂內容是增訂關于制備工藝參數設定的原則，即“原液制備的工藝步驟和參數的設定應基于工藝效能，純化工藝的選擇應兼顧抗原純度、活性、殘留物限度等因素，以獲得最適的收獲物和最少的工藝雜質為目標，工藝應經驗證”。此外，半成品配制方面，明確了關于原液合批配制的相關原則，即“疫苗制品的生產設計應使相關設備的能力與生產規模相匹配，為保證上市產品的溯源和追蹤，半成品配制原則上應來源于一批原液，不同批原液合批配制半成品的，應評估可能存在的風險并經批準”。

5．2 生物制品通則新增《生物制品通用名稱命名原則》 

為規范生物制品通用名稱的使用，保證臨床使用和流通過程中對生物制品的準確識別，以及對上市藥品全生命周期追溯和藥物警戒監管，根據我國生物制品實際情況，參照國際通用原則制定了“生物制品通用名稱命名原則”，該原則對疫苗通用名稱進行了進一步規范和細化，疫苗屬于命名原則中尚無 WHO 國際通用名稱( INN) 分類的生物制品。

5．3 通則增修訂

修訂通則“3604 新生牛血清”。隨著國內對人用生物制品生產用動物來源的生物材料安全性、有效性等問題越來越重視，疫苗生產企業對牛血清產品的質量要求越來越高，牛血清的質量控制工作也需進一步加強和提高。研制了用于新生牛血清血紅蛋白含量測定用的國家標準品。對于支持細胞增殖檢查，《美國藥典》在細胞的種類和評價方法上均有更細化更全面的要求，而我國藥典僅有在半貼壁細胞上的檢測要求。2020 年版藥典對“血紅蛋白”和“支持細胞增殖檢查”2 個項目進行了標準修訂，力求進一步提高新生牛血清的質量控制工作，加強與國際標準接軌。

5．4 其他增修訂

其他新增的相關生物制品通則、通則及指導原則包括: 生物制品病毒安全性控制、3308 禽源性病毒熒光定量 PCＲ 檢查法、3407 外源性 DNA 殘留量測定法( 第三法) 、生物制品穩定性試驗指導原則等。

六、 小結

2020 年版藥典在 2015 年版藥典的基礎上新增收載預防用病毒性疫苗品種數量進一步增加，質量標準緊跟科技發展前沿，不斷提高且更加完善，與國際標準更加協調，更具合理性和可操作性。

2020 年版藥典質量標準整體上與同類品種國際相關標準基本一致，但是基于我國國情，《中華人民共和國藥典》較國際標準更加注重制品的最終放行檢驗，部分品種成品檢測項目明顯更多，在涉及與安全性相關的雜質控制限度要求高于 WHO 標準和《歐洲藥典》等，且 2020 年版藥典對雜質等檢測項目納入了新技術方法，可更好控制產品的安全性［9］ 。新增且完善了生物制品通用技術要求，全面覆蓋已上市生物制品質量控制的各個環節。如參照國際通用名稱命名原則，制定了生物制品通用名稱命名原則［8］ ，其中明確了疫苗品種的命名原則，由此可規范生物制品通用名稱的使用，保證臨床使用和流通過程中對生物制品的準確識別，以及對上市藥品全生命周期追溯和藥物警戒監管。對各論體例、描述以及質量指標進行修訂，與國際標準更加協調統一，且適用范圍更廣，對在研同類品種具有很好的引導作用。

與此同時，還應看到質量標準尚有進一步提高的空間，如目前減毒活疫苗滴度檢測存在方法學差異，可考慮研究變更病毒滴度測定方法，以達到同國外檢測方法接軌的目的?？煽紤]將全基因序列測定納入病毒性疫苗各論項下毒種主種子批檢定項目要求中。此外，疫苗效價測定法置信區間的完善也需進一步開展相關研究。