1 研究背景

2015年2月，美國FDA批準新型復方降糖藥物Glyxambi（恩格列凈/利格列汀）的上市申請，用于2型糖尿病成年患者的輔助治療。該藥也是目前美國唯一的一款SGLT2抑制劑（恩格列凈[empagliflozin]，勃林格殷格翰）和DPP-4抑制劑（利格列汀[linagliptin]，禮來）的復方藥物。

恩格列凈利格列汀片含有兩種活性成分：恩格列凈和利格列汀（Empagliflozin/Linagliptin）。

恩格列凈化學結構如下：

利格列汀化學結構如下：

為了解該復方制劑的降解途徑，確定處方中的降解產物歸屬；同時，驗證有關物質分析方法的專屬性，對該復方制劑進行強制降解試驗設計。

2 破壞試驗前提

（1）處方工藝初步確定；（2）分析方法專屬性和靈敏度初步確定。

3 破壞樣品

需要同時對API（恩格列凈、利格列汀）、空白輔料、單方制劑（恩格列凈+空白輔料；利格列汀+空白輔料；可以按照復方制劑的工藝制備成片劑）和復方制劑（恩格列凈利格列汀片）四個層次六個平行進行強制降解試驗，其目的為明確歸屬降解產物的歸屬途徑。

4 破壞條件

破壞條件的設計應考慮藥物的生產、儲存、流通、使用等。

可采用較強的破壞強度（雜質增加5%-10%），評估方法的檢測能力（專屬性得經得起考驗，雜質能基本覆蓋）。

藥物在研發、生產、使用過程中，如藥物溶出實驗、工藝過程、服用過程均可能會接觸到酸、堿，故需進行液體的酸、堿破壞；

藥物的檢測過程，均需配制成溶解狀態進行，故需進行溶液狀態的高溫、光照破壞，為供試品溶液配制方式提供基礎數據（是否需要避光、環境溫度是否需要控制等）；

固體破壞是模擬大部分藥物的儲存條件，類似于影響因素實驗（比加速試驗更苛刻，所以也要考慮加速試驗或長期試驗條件下是否正式存在，如果有，則要重點研究）。

基于以上考慮涉及該復方制劑強制降解破壞條件如下：

上表待分析樣品采用相同的前處理條件：

稀釋劑為磷酸鹽溶液[取無水磷酸二氫鉀2.0g，加水1000ml使溶解，并用磷酸調節PH值至2.5±0.1]-乙腈（70:30）；

整投法（常規操作為20片至于200ml量瓶，強制降解試驗調整為2片至于20ml量瓶）；

供試品溶液濃度分別為1mg/ml（恩格列凈）、0.5mg/ml（利格列汀）；

超聲15min，再室溫振搖30min；

離心取上清液。

5 試驗要求

以未破壞供試品溶液為對照計算破壞樣品的活性成分含量；扣除空白溶劑、空白輔料和另一成分及歸屬雜質后，以面積歸一化法計算各活性成分的雜質增加量。

要求：

（1）空白溶劑和各破壞空白輔料色譜圖中不得干擾恩格列凈、利格列汀及其已知雜質測定；

（2）各降解條件下主成分與相鄰雜質峰之間的分離度不得低于1.5；

（3）各降解條件下主成分色譜峰在210~400nm波長范圍內純度因子不得低于980；

（4）物料守恒（恩格列凈和利格列汀含量下降值與其雜質增加量的差值）保持在5%以內。

6 試驗結果（以酸破壞為例）

（1）典型色譜圖

未破壞典型色譜圖

【1】   恩格列凈單方制劑未破壞樣品；

【2】   利格列汀片單方制劑未破壞樣品；

【3】   恩格列凈利格列汀復方制劑未破壞樣品

酸破壞典型色譜圖：

【4】   恩格列凈單方制劑酸破壞樣品；

【5】   利格列汀片單方制劑酸破壞樣品；

【6】   恩格列凈利格列汀復方制劑酸破壞樣品

（2）主要降解雜質歸屬

（3）方法專屬性考察注：上表復方制劑雜質含量計算方式通過各原料和單方制劑降解雜質歸屬后扣除另一主成分及另一成分降解雜質后進行面積歸一化。

（4）物料守恒（以酸破壞為例）

7 分析與討論（以酸破壞為例）

① 單一原料藥與單方制劑或復方制劑相同破壞條件下產生雜質譜一致，但破壞程度存在差異，制劑降解趨勢比原料藥明顯（不是好消息，說明制劑工藝并未增加活性成分的穩定性；但也可能是個無可奈何的消息，畢竟對于5mg/10mg的有效劑量，不可能直接服用原料藥，制劑的意義也要考慮賦型和服用方便）；

② 各破壞條件下恩格列凈均未產生大于報告限度的雜質，恩格列凈性質穩定。因利格列汀在相同破壞條件下，可得到適當的降解雜質，故暫未設計針對恩格列凈的復合破壞條件；

③ 酸破壞條件下復方制劑中利格列汀可得到適當的降解雜質，在此條件下可降解雜質達到6%，可作為本方法專屬性考察的主要強制降解條件；

④ 酸破壞條件下雜質增加值與含量下降值差值不大于5.0%，滿足物料守恒要求，恩格列凈與相鄰雜質峰之間分離度均大于1.5，且DAD檢測器掃描各強制降解溶液的峰純度均大于990；

⑤ 復方制劑利格列汀酸條件下的主要降解雜質，在加速長期穩定性試驗中均未檢出，故僅作為未知雜質進行研究（但作為口服固體制劑，考慮胃生理環境，仍建議進行雜質結構鑒定，并對其進行安全性評價）。

結論：在酸破壞條件下，復方制劑中的活性成分恩格列凈性質穩定，未發生明顯變化；利格列汀可產生明顯降解。有關物質分析方法在酸破壞條件下能滿足質量守恒的要求，主峰與相鄰峰之間分離度滿足要求，且峰純度均不低于980，顯示出良好的專屬性。