一、關(guān)于手動積分的指南

     關(guān)于手動積分，并沒有指南給出明確的定義。筆者只查到有兩篇生物樣本分析的方法驗證指南規(guī)定了再積分（Reintegration）的注意事項。

     FDA的2001年定稿指南 Bioanalytical Method Validation，及相應(yīng)的2013年草案指南也有類似的要求。生物樣本分析的方法驗證2013草案指南，第III.C節(jié)“樣本數(shù)據(jù)再積分”規(guī)定：SOP應(yīng)該確定再積分的標(biāo)準(zhǔn)，和怎樣進(jìn)行再積分；應(yīng)清楚描述、并記錄再積分的理由；應(yīng)報告原始和再積分?jǐn)?shù)據(jù)。第VII.D節(jié)還規(guī)定：再積分?jǐn)?shù)據(jù)應(yīng)有管理人員授權(quán)再積分。

     EMA的2011年指南 Guideline on bioanalytical method validation，第5.5節(jié)規(guī)定：應(yīng)該有SOP描述色譜的積分和再積分。應(yīng)在分析報告中討論偏離這個SOP的任何偏差。應(yīng)該記錄色譜積分、再積分的積分參數(shù)、初始積分?jǐn)?shù)據(jù)、最終積分?jǐn)?shù)據(jù)，并在要求時立即可得。

二、什么情況下可以進(jìn)行手動積分？

1）低分離度或低響應(yīng)；

2）流動相不穩(wěn)定，基線紊亂，保留時間變化小； 

3）運行過程中，出現(xiàn)異常峰； 

4）軟件積分的局限性，如由于軟件參數(shù)閾值的設(shè)置導(dǎo)致峰未積分，峰起點和終點間出現(xiàn)肩峰和異常的基線漂移，軟件錯誤（峰未積分和錯誤識別峰）；

5）由于樣品母體的干擾導(dǎo)致的復(fù)雜色譜圖：裂峰、目標(biāo)雜質(zhì)的同時洗脫/肩峰、基線噪音、負(fù)峰、基線上升或下降（由于某些梯度程序）、峰的嚴(yán)重拖尾、烴類的存在導(dǎo)致自動積分不正確。

三、手動積分的權(quán)限及操作

      操作員在數(shù)據(jù)系統(tǒng)自動積分不正確時，領(lǐng)取手動積分處理報告表并填寫，手動積分申請被QC經(jīng)理批準(zhǔn)后由QC經(jīng)理或QC組長（若有）或其指定人員（一般是指經(jīng)驗豐富的資深QC）方可進(jìn)行手動積分。

四、手動積分注意事項

1）手動積分不能試圖通過以下動作來使數(shù)據(jù)符合標(biāo)準(zhǔn)要求：減少峰（減少峰面積）；增加峰（增加峰面積）；改變峰高；

2）同一次檢驗的所有標(biāo)準(zhǔn)品、工作對照品、樣品等必須使用同一方法進(jìn)行手動積分。

3）手動積分結(jié)束后，應(yīng)打印自動積分圖譜和手動積分圖譜附于手動積分申請表之后，提交QC經(jīng)理審核；QC經(jīng)理應(yīng)復(fù)核完整的數(shù)據(jù)找出根因，基于根因制定相應(yīng)的CAPA措施來避免類似事件。

4）自動積分的圖譜不得刪除或被覆蓋，應(yīng)與手動積分圖譜一起保存于計算機(jī)中；打印的自動積分圖譜和手動積分圖譜應(yīng)標(biāo)識清楚簽名，隨同手動積分申請表附于檢驗原始記錄后面一起交質(zhì)量管理部經(jīng)理、QP審核無問題后歸檔。

      通常，在得到自動積分色譜圖后，分析保留時間、峰型是否如預(yù)期，峰是否被正確識別，基線是否滿足要求，或者其它標(biāo)準(zhǔn)。只有在色譜圖不可接受時，才可考慮是否可以進(jìn)行手動積分，或者進(jìn)行實驗室調(diào)查。

有兩種情況，是禁止進(jìn)行手動積分的：

在自動積分后，對稱的峰有可接受的基線；

增強(qiáng)峰、或削減峰的目的是為了滿足系統(tǒng)適用性接受標(biāo)準(zhǔn)，或滿足放行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

總之，企業(yè)應(yīng)建立科學(xué)、合理、透明的自動積分操作規(guī)程，并滿足數(shù)據(jù)完整性的要求。在SOP之外進(jìn)行的手動積分可能被視為數(shù)據(jù)造假。

五、色譜軟件選型、權(quán)限設(shè)置和結(jié)果顯示

     滿足合規(guī)要求的色譜軟件（例如Waters和Angilent的軟件），能夠分別設(shè)置不同權(quán)限，例如普通化驗員不具備進(jìn)行手動積分的權(quán)限，需要主管進(jìn)行操作，有些軟件則不具備這些功能；即使是同一個品牌的軟件，也有不同版本；即使軟件有這個功能，企業(yè)也不一定啟用。

     有兩個信息是否顯示，對色譜數(shù)據(jù)透明度非常重要：方法名稱和數(shù)據(jù)版本。如果企業(yè)不使用手動積分（重畫基線），而采用修改參數(shù)的方式，則每修改一次，是不同的方法（規(guī)范的管理程序會要求更改方法名稱保存，否則就只能到審計追蹤才能查出來這個方法已經(jīng)被修改了），而打印的色譜圖可以選擇是否顯示方法；每處理一次數(shù)據(jù)，會形成一個數(shù)據(jù)版本，同樣的，打印的色譜圖可以選擇是否顯示數(shù)據(jù)版本。

     一個完全透明的結(jié)果顯示，會在打印的色譜圖上顯示“方法名稱+數(shù)據(jù)版本”（同時要求修改參數(shù)則改變方法名稱，不需要QA或檢查員仔細(xì)檢查審計追蹤才能發(fā)現(xiàn)修改痕跡）。