延胡索為罌粟科植物延胡索的干燥塊莖，具有活血止痛、行氣的功效，主要用于治療胸痹心痛、脘腹疼痛等疾病，處方中常用醋制。延胡索藥材在干燥和運輸過程中易于產生霉變，霉菌容易產生真菌毒素，主要代表是黃曲霉毒素，黃曲霉毒素是一類化學結構相似的二氫呋喃香豆素的衍生物，主要包括黃曲霉毒素B1（AFB1）、黃曲霉毒素B2（AFB2）、黃曲霉毒素G1（AFG1）、黃曲霉毒素G2（AFG2）及其代謝產物黃曲霉毒素M1 和黃曲霉毒素M2。廣州中醫藥大學第一附屬醫院譚麗盈以70% 甲醇溶液為提取劑，采用Waters BEH C18 （2.1 mm×100 mm，1.7 μm）色譜柱分離，建立了超高效液相色譜– 串聯質譜（UPLC–MS／MS）法同時測定醋延胡索藥材中AFB1、AFB2、AFG1、AFG2 含量的方法。

主要儀器與試劑

    超高效液相色譜儀– 三重四級桿質譜儀：Waters H-class XEVO TQD 型，MassLynx V4.1 工作站，美國waters 公司。

    電子分析天平：Sartorius BT124S 型，感量為0.1 mg，北京賽多利斯儀器有限公司。

    超聲波清洗器：KQ–700VDB 型，昆山市超聲儀器有限公司。

    免疫親和柱：Pribo Fast IAC，青島普瑞邦生物科技有限公司。

    低速臺式離心機：An Ke TDL–60B 型，上海安亭科學儀器廠。

    超純水機：Milli-Q Reference型，美國默克公司。

    氮氣發生器：Genius-NM32LA 型，英國匹克科技公司。

    黃曲霉毒素混合標準品溶液：AFB1、AFB2、AFG1、AFG2 質量濃度分別為1.04、0.35、1.18、0.59 μg／mL，批號為610001–201301，中國食品藥品檢定研究院。

    AFB1 質控樣品：編號為CFAPA–QC522B–1，參考值為（2.95±0.88） μg／kg，大連中食國實檢測技術有限公司。

    AFB2 質控樣品：編號為CFAPA–QC522B–2，參考值為（1.96±0.67） μg／kg，大連中食國實檢測技術有限公司。

    AFG1 質控樣品：編號為CFAPA–QC522B–3，參考值為（2.35±0.71） μg／kg，大連中食國實檢測技術有限公司。

    AFG2 質控樣品：編號為CFAPA–CFAPA–QC522B–4，參考值為（2.13±0.80） μg／kg，大連中食國實檢測技術有限公司。

    玻璃纖維濾紙：青島普瑞邦公司。

    氯化鈉：分析純，上海國藥化學試劑公司。

    甲醇：色譜純，美國賽默飛世爾科技有限公司。

    實驗用水為超純水。

    其它試劑均為分析純。

    醋延胡索樣品：共10 批，均為罌粟科植物延胡索（Corydalis yanhusuo W.T.Wang）的干燥塊莖，且均為醋制品，基本信息見表1。

儀器工作條件

1　色譜

    色譜柱：Waters BEH C18 柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm，美國沃特世公司）；流動相：甲醇（A）–10 mmol 醋酸銨溶液（B）；梯度洗脫程序：初始B 的體積分數為36%，0～5 min 時，B 由36% 逐漸增加至85%，5～6.5 min 時，B 由85% 逐漸增加至100%，6.5～6.6 min 時，B為36% ；流量：0.3 mL／min ；柱溫：40 ℃；進樣體積：2 μL。

2　質譜

    離子源：電噴霧離子源（ESI）；掃描模式：正離子模式采集；檢測方式：MRM（多反應監測）方式；毛細管電壓：0.5 kV ；錐孔電壓：55 V ；離子源溫度：150 ℃；去溶劑氣：氮氣，流量為950 L／h，溫度為450 ℃。4 種黃曲霉毒素的質譜參數見表2。

測定結果

    當進樣體積為2 μL 時，黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2 的質量分別在0.42～20.80、0.14～7.00、0.47～23.69 和0.24～11.80 pg 范圍內與定量離子的色譜峰面積線性關系良好，相關系數分別為0.999 4、0.999 0、0.998 9 和0.998 5，檢出限分別為0.003、0.005、0.018、0.017 μg／kg。高、中、低3 個加標濃度水平下，4 種黃曲霉毒素的平均回收率分別為88.94%、76.82%、104.90% 和93.22%，測定結果的相對標準偏差分別為6.61%、3.71%、2.25% 和4.18%（n=6）。