引言：對于無菌醫療器械注冊來說，微生物指標是產品技術要求中的重要性能指標，也是生產管控過程的要點和難點，一起來看一下微生物檢驗注意事項。

無菌醫療器械注冊之微生物檢驗注意事項：

　　在微生物檢驗操作過程中，要保證檢測環境(如超凈臺、檢測室)以及所用工器具的潔凈程度，同時保證人員各種操作的規范性，盡量保證其無菌性，防止因人為原因操作失誤而出現誤差結果，同時在適宜溫度進行培養，為合理決策和指導生產提供依據。為保證檢測結果的準確性，我們應做好以下幾個方面：

一、培養基的滅菌及使用

　　1.每次配制時，要注意其生產日期是否在保質期內，查看其開瓶日期及瓶口密封性，保證其未變質，并且未吸潮。

　　2.培養基配制時，稱量要準確，包括鹽水的分裝要準確。

　　3.一定要保證現配制現滅菌，未滅菌的配好培養基不能長時間放置，更不可隔夜。

　　4.滅菌時要保證恒溫、恒壓，同時要保證有效的滅菌時間。

　　5.滅菌過的培養基要冰箱保存，可保存一周，一般不超過 3 天。而且要遵循“先入先出”原則，先配制的要先使用。

　　6.在使用時，要根據當班次的使用量，用水浴鍋先將培養基溶化為液態，然后及時調低水浴溫度(先化好的可從水浴取出，放在水浴鍋鍋蓋上)待用，千萬不可長時間使培養基處于高溫狀態。

　　7.做產品微生物檢測時，傾倒培養基溫度在 45℃左右，不可過燙，避免將菌燙死;也不可過涼，化好的培養基又結塊凝固，不便于觀察結果。

　　8.每瓶培養基均要做空白。

　　9.盡量集中做樣，避免頻繁打開同一瓶培養基瓶塞，增大培養基的污染幾率，出現誤差結果。

　　10.培養基剩余過少時，可先將其傾倒成空白用板。

二、微生物檢測環境的保持

　　(一)檢測室環境要求

　　1.檢測時，窗戶和空調要關閉，或用酒精對房間進行噴霧消毒，避免房間內空氣流通影響超凈臺內部環境(最好在有通排風系統的恒溫恒濕無菌間進行操作)。

　　2.如果在原來的原料微生物檢測室進行檢測，要定期開啟紫外燈，對房間進行殺菌。

　　(二)超凈工作臺要求

　　1.定期清潔初效過濾器，要及時更換。

　　2.檢測前，將超凈臺內部進行清潔，用 75%酒精進行擦拭消毒，并提前半小時將超凈臺紫外燈打開，對超凈臺內部環境進行殺菌。

　　3.關紫外燈，開風機，調整合適進風量，風量不可過低。

　　4.每次檢測后，要對超凈臺內部進行清理、清潔，并用 75%酒精進行擦拭消毒。

　　5.紫外燈根據其使用壽命要及時更換。

　　6.檢測同時，要做上相應菌落檢測的環境空白。

　　7.檢測區域的選擇：

　　a、一般在距離超凈臺外沿的 1/3-2/3 區域進行無菌操作;

　　b、要在酒精燈火焰的外焰保護區域進行操作。

　　(三)工器具的潔凈度

　　1.玻璃器皿：采用干熱滅菌方式進行滅菌。

　　2.檢測用剪刀、勺子等物品要做到檢測專用，不可與其它操作器具混用，使用時，先用75%酒精消毒，再采用灼燒方式進行滅菌。

　　3.接種針(環)采用灼燒方式進行滅菌，但要注意檢測時要先將接種針(環)進行冷卻。

三、樣品的采集及檢測

　　(一)保證采樣器具的無菌性

　　1.玻璃器皿：采用干熱滅菌方式進行滅菌，保證恒溫、時間足夠(但不可時間過長，容易導致玻璃器皿易裂紋而報廢)。

　　2.取樣筐：使用前要用75%酒精進行噴灑消毒。

　　3.取樣勺：要保證其清潔消毒，清潔后用75%酒精進行擦拭消毒。

　　4.取樣袋：可先用酒精進行擦拭消毒，再在超凈臺用紫外燈照射消毒，(包裝車間要在傳遞窗用紫外燈照射消毒)。

　　5.電子稱表面用 75%酒精消毒。

　　(二)人員操作

　　1.保證手部的清洗、消毒：取樣前及檢測前都要先洗手再消毒。

　　2.取樣要具有代表性(隨機樣、目的樣、綜合樣)且要標示清楚。

　　3.取樣完畢，不可在車間逗留，要及時將樣品放入超凈臺，對其外表面進行紫外燈照射消毒。

　　4.在要求的檢測區域進行操作。

　　5.檢測前，要用 75%酒精棉球對樣品袋口部進行擦拭消毒，再開口。

　　6.往鹽水瓶加樣品時，要注意勺子或袋子盡量不接觸瓶口。

　　7.樣品計量要準確，稀釋倍數也要準確(1mL 吸管不允許將管口敲掉)，進行 100 倍稀釋時，1mL 吸管要伸入鹽水中，不可以將樣品從管壁流下去，同時要避免將管底部捅破。

　　8.鹽水溫度以 40℃左右為宜，不能過熱，會將部分微生物燙死;也不能溫度太低，不能將樣品溶解完全。

　　9.進行稀釋時，要搖勻，保證溶液的均一性。

　　10.傾倒平皿時，要注意培養基瓶口不要接觸到平皿;傾倒的培養基要適量，不可以太少，在培養過程中易干掉，微生物亦死亡，以 15mL 左右為宜。

　　11.做大腸菌群樣時，要提前將乳糖膽鹽培養基培養管按需要量備好，放入超凈臺對外表面進行紫外線滅菌。

　　12.接二步時，要注意先將接種針(環)進行冷卻，避免出現接不上菌落的情況，導致無法判斷、確認。

　　13.檢測完畢，及時放入相應培養箱進行培養，并清理清潔超凈臺。

四、微生物的培養

　　1.在培養過程中，要隨時監控培養箱溫度，保證其在適宜的溫度進行培養。

　　2.要按照《微生物檢驗規范》要求及時觀察結果，出現異常，要及時分析原因進行反饋。