硒是動物體內必需的微量營養元素之一，在抗氧化物酶和谷胱甘肽過氧化物酶的形成過程中起著重要作用，具有防癌、抗癌、抗氧化等多種生理功能。硒攝入不足會導致肝壞死，肌肉營養不良，可能引發克山病、大骨節病、癌癥、心臟病等多種疾病。無機硒的生物利用率差、毒性大；而有機硒安全性高、更易于被人體吸收利用。由于硒的生物利用性、毒性與其存在形態有著密切的關系，因此對硒的存在形態及含量進行分析尤為重要。

成都市疾病預防控制中心張蜀等采用加氧雙四級桿模式，采用Zorbax SB–Aq反相色譜柱，用pH值分別為2.7、7.0的10 mmol／L檸檬酸溶液（含5 mmol／L己烷磺酸鈉）進行梯度洗脫，建立高效液相色譜–電感耦合等離子體質譜法測定水樣中硒酸鹽、亞硒酸鹽、硒代胱氨酸、硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸、硒代乙硫氨酸6種硒形態的檢測方法。

●主要儀器與試劑 ●

      超純水系統：Milli-Q Advantage型，默克密理博（中國）有限公司。

      高純氬：體積分數為99.999%，成都世茂氣體有限公司。

      pH計：510型，美國優特公司。

     檸檬酸：質量分數不低于99.5%，CAS號為77–92–9，西格瑪奧德里奇（中國）有限公司。

     己烷磺酸鈉：質量分數不低于98%，CAS號為2832–45–3，西格瑪奧德里奇（中國）有限公司。

      氨水：質量分數為20%~22%，A512–P500，賽默飛世爾科技（中國）有限公司。

      硒酸鹽、亞硒酸鹽、硒代胱氨酸、甲基硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸溶液標準物質：SeO42–、SeO32–、SeCys2、MeSeCys、SeMet的質量摩爾濃度分別為0.525、0.543、0.560、0.433、0.499 μmol／g，編號分別為GBW 10033、GBW 10032、GBW 10087、GBW 10088、GBW 10034，中國計量科學研究院。

     硒代乙硫氨酸標準品：CAS號為2578–27–0，質量分數為98%，加拿大TRC公司。

     普通飲用水樣品：樂百氏桶裝飲用水，樂百氏飲用水有限公司。

     富硒礦泉水樣品：稀世寶飲用天然礦泉水，恩施硒之泉礦泉水有限公司。

     實驗用水為超純水。

●儀器工作條件 ●

1　色譜

      色譜柱：Zorbax SB–Aq型反相色譜柱[150 mm×4.6 mm，5 μm，安捷倫科技（中國）有限公司]；柱溫：25 ℃；流動相：1%甲醇–pH值分別為2.7、7.0的10 mmol／L檸檬酸溶液（含5 mmol／L己烷磺酸鈉）；洗脫方式：梯度洗脫，洗脫條件見表1；進樣體積：10 μL；流量：1 mL／min。

2　質譜

     射頻功率：1?550 W；玻璃同心霧化器；采樣深度：8.0 mm；蠕動泵轉速：0.3 r／s；載氣：高純氬氣，流量為0.90 L／min；補償氣：高純氬氣，流量為0.25 L／min；霧化室溫度：2 ℃；積分時間：0.5 s；采集時間：10 min；反應氣：氧氣，流量為25%；采集質量數：雙重四級桿Q1、Q2質量數分別為80、96。

●樣品處理 ●

      水樣及加標樣品經孔徑為0.22 μm的聚四氟乙烯濾頭過濾后測定。

●測定結果 ●

      6種形態硒的質量濃度在1～100 ng／mL范圍內與響應強度有良好的線性關系，相關系數均大于0.999，檢出限為0.097?2~0.166?0 ng／mL。測定結果的相對標準偏差為5.65%~7.13%(n=7)，樣品加標回收率為74.6%~97.5%。