pH值是培養基的常規監控項目，微生物的生長不僅依賴豐富的營養，還需要在適宜的pH值范圍內才能正常生長繁殖或體現其生物特性，因此培養基pH值是否符合要求直接影響微生物檢驗結果。

01 培養基的配制

配料—溶解—調PH—過濾—分裝—包扎—滅菌—擺斜面—貯存

1.配料

配方換算→在容器中加入少量水（蒸餾水，自然水）→按照配方稱取各種藥品（依次加入）→加足所需水量（一藥一勺，取藥后立即蓋上瓶蓋）。

2.溶解

淀粉溶解：少量冷水調成糊狀

加熱溶解，特別是加有瓊脂的培養基，一定要煮沸，瓊脂的熔解溫度95-97℃ ，且需要邊加熱邊攪拌以防止燒焦。

3.調PH

用1N的鹽酸或1N的 NaOH把培養基調節到所要求的值。

4.過濾

濾紙或棉花進行過濾。（有時可以省去）

5.分裝

一般培養基放在三角瓶或試管中滅菌使用。

(1)三角瓶

若作靜置培養，則100ml培養基/250ml的三角瓶，最多不能超過150ml培養基/250ml的

三角瓶，否則滅菌時培養基沸騰容易污染棉塞，造成染菌；若作搖瓶培養，則15-20ml培養基/250ml的三角瓶，保證通氣良好。

(2)試管分裝

液體培養基一般裝4-5ml，約試管的1/4高度；

固體斜面培養基一般裝3-4ml，約試管的1/5高度。

6.包扎

分裝好后，塞上棉塞，在用牛皮紙將棉塞包裹好，防止滅菌時水份進入把棉塞弄濕。

7.滅菌

按配方上要求的溫度、壓力進行高壓蒸汽滅菌。如果滅菌的溫度太高，營養成分會被破壞，培養

基中的糖、氨基酸會使培養基的顏色變深。

8.擺斜面

滅菌后需要擺斜面的試管要趁熱斜著擺放，使其凝固成為一個斜面，約占試管長度的1/2。

9.貯存

培養基在30℃下放置一天，無污染的即可使用。一般用牛皮紙包裹好存放于2-8℃冰箱中備用

注意事項：

在配制時，首先要確保培養基未結塊、顏色未發生變化或其他物理性狀明顯改變；應按照使用說明上的要求操作，稱量應達到相應的精確度；純化水是配制培養基最常用的溶劑，應確保溶劑的質量符合要求；配制培養基應采用干凈且不會對培養基理化特性產生改變的容器。

在分裝前，應確保培養基完全溶解混勻，加熱助溶是最常用的方法，應注意不要過度加熱，尤其是含糖量較高的培養基，糖類不耐熱的特性會使糖類在高溫條件下產生有機酸而使pH值下降。

02 培養基的pH控制

培養基的pH必須控制在一定的范圍內，以滿足不同類型微生物的生長繁殖或產生代謝產物。

雖然培養基中含有緩沖物質成分，能使培養基的pH盡可能的保持在要求的范圍內，但是配出的培養基若不符合要求，就要進行必要的調整。如果有已校準pH計，可用pH計，如果沒有，可用精密的pH試紙，再根據需要用1 mol/L氫氧化鈉或1mol/L鹽酸（微調可用0.1氫氧化鈉或0.1mol/L鹽酸）調制所需的pH。培基的pH一般為7.4～7.6，也有酸性或堿性的。用氫氧化鈉調整的需要高壓滅菌的培養基，在調整pH時要調至高出所需0.1個～0.2個單位，因用氫氧化鈉調整時，高壓滅菌后，培養基的pH要降低0.1~0.2。如培養基中含有碳酸鈣成分，可不pH。

03 pH電極的維護保養

目前，實驗室使用pH計電極大部分都是復合電極。其優點是使用方便，不受氧化-還原物質的影響，且平衡速度快。使用時應注意以下事項：

⒈復合電極不用時，可充分浸泡飽和氯化鉀溶液中。切忌用洗滌液或其他吸水性試劑浸洗。

⒉使用前，檢查玻璃電極前端的球泡。正常情況下，電極應該透明而無裂紋；球泡內要充滿溶液，不能有氣泡存在。

⒊測量濃度較大的溶液時，盡量縮短測量時間，用后仔細清洗，防止被測液粘附在電極上而污染電極。

⒋清洗電極后，不要用濾紙擦拭玻璃膜，而應用濾紙吸干, 避免損壞玻璃薄膜、防止交叉污染，影響測量精度。

⒌測量中注意電極的銀—氯化銀內參比電極應浸入到球泡內氯化物緩沖溶液中，避免電計顯示部分出現數字亂跳現象。使用時，注意將電極輕輕甩幾下。

⒍電極不能用于強酸、強堿或其他腐蝕性溶液。

⒎嚴禁在脫水性介質如無水乙醇、重鉻酸鉀等中使用。