前言

液相方法很多用到緩沖鹽，我在從事研發工作的過程中，發現很多同仁對緩沖鹽在液相方法中的應用不是太了解，遂分享一部分我的看法，拋磚引玉，相互交流。

適用范圍

本指導原則僅適用于反向色譜與離子對色譜方法開發過程。

何時應用緩沖鹽？

樣品或樣品中需研究的關鍵雜質有離子化傾向，其他特定少數情況另行敘述。

存在較強離子化傾向的組分，其中一部分是分子狀態，與反相色譜固定相結合的更好；另一部分是離子狀態，更親和于流動相。如不使用緩沖鹽控制其電離狀態，即分子狀態和離子狀態的比例，很容易出現峰拖尾分叉變形的情況。這種情況下一般就不應該使用水/有機相系統作為流動相，應選用緩沖鹽/有機相系統。

緩沖能力與pH選擇

流動相如用到緩沖鹽溶液，其應當有一定的緩沖能力，如果減少進樣量，峰形改善，則說明很可能緩沖鹽溶液緩沖能力不足。緩沖鹽溶液的緩沖能力與緩沖鹽濃度、緩沖鹽溶液的pH值相關。緩沖鹽濃度越大，緩沖能力越強；緩沖鹽溶液的pH值越接近其pka，緩沖能力越強。一般緩沖鹽溶液的pH值應在其pka±1的范圍內，為了確保主成分的保留時間不因pH值的微小變化產生大的偏離，緩沖鹽溶液的pH值應在樣品pka±2的范圍外。

截止波長

每種緩沖鹽都有其對應的截止波長，方法的檢測波長不得小于緩沖鹽溶液的截止波長。檢測波長越接近流動相截止波長，基線噪音越大，響應值誤差越大，組分響應值和靈敏度變小。

常用緩沖鹽pka與截止波長列表

緩沖鹽應用一般思路

1、 緩沖鹽濃度一般為10-50mmol/l。根據樣品性質及進樣量選擇緩沖鹽濃度，使其滿足應有的緩沖能力。

2、 梯度洗脫中有機相比例允許的最高值，應根據緩沖鹽與有機相混溶實驗確定。取不同緩沖鹽-有機相比例，確定有機相比例允許最高值，如緩沖鹽：有機相為10:90、20:80、30：70等不同比例。不得在儀器上隨意設置高比例有機相，以防緩沖鹽析出損壞儀器。

3、 根據截止波長、pH值和緩沖能力等多個約束條件選擇緩沖鹽，如檢測波長在末端吸收，則一般應選用磷酸鹽。

4、 常用緩沖鹽溶液有：0.1%磷酸/三氟乙酸/乙酸/甲酸溶液，0.02-0.05mol/l 磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調節pH至3.0）等

 5、堿性化合物優選鉀鹽，抑制拖尾效果更好。