引言

溶出度測(cè)試是幾乎所有非真溶液藥品的必備測(cè)試。溶出度測(cè)試主要用于制藥行業(yè)，作為監(jiān)控劑型配方和生產(chǎn)過(guò)程的質(zhì)量控制工具。大多數(shù)監(jiān)管機(jī)構(gòu)認(rèn)為溶出度是大多數(shù)固體劑型的高度關(guān)鍵質(zhì)量特征。監(jiān)管機(jī)構(gòu)使用溶出度測(cè)試來(lái)提供從關(guān)鍵生物批次到商業(yè)化產(chǎn)品的質(zhì)量聯(lián)系。因此，溶出度測(cè)試的開(kāi)發(fā)和驗(yàn)證是確保測(cè)試穩(wěn)健性和臨床相關(guān)性的關(guān)鍵因素。但是在實(shí)際工作中，經(jīng)常碰見(jiàn)異常數(shù)據(jù)。在對(duì)文章《Specification of  Drug Substances andProducts __ Dissolution》進(jìn)行學(xué)習(xí)后，結(jié)合筆者自己的理解來(lái)總結(jié)需要注意的地方。下文從以下幾點(diǎn)來(lái)進(jìn)行說(shuō)明。

為了使溶出度測(cè)試普遍用于控制藥物劑型的一致性，必須對(duì)所用儀器的類(lèi)型進(jìn)行控制。美國(guó)藥典<711>“溶出度”描述了溶出度測(cè)試中使用的幾種儀器類(lèi)型。美國(guó)藥典裝置1(籃)和裝置2(槳)是目前最常用的速釋和控釋劑型的裝置。美國(guó)藥典以外的藥典，如日本藥典、英國(guó)藥典和歐洲藥典、中國(guó)藥典均包含美國(guó)藥典中描述的儀器1和儀器2。目前對(duì)此兩種裝置都有標(biāo)準(zhǔn)的要求。中國(guó)在2016年發(fā)布《藥物溶出度儀機(jī)械驗(yàn)證指導(dǎo)原則》表明與國(guó)際接軌。

在確保符合《藥物溶出度儀機(jī)械驗(yàn)證指導(dǎo)原則》情況下平時(shí)也要注意一些特殊情況。槳葉有時(shí)部分涂有特氟隆。這種涂層可能會(huì)從槳葉上剝落和部分脫落，導(dǎo)致容器內(nèi)流體動(dòng)力學(xué)的流動(dòng)擾動(dòng)。槳葉可能生銹，并有缺口或凹陷；這可能對(duì)溶解流體動(dòng)力學(xué)產(chǎn)生不利影響，也是污染源。有些藥品不銹鋼桿槳在某些介質(zhì)對(duì)溶出度有影響如pH1.2條件下的苯磺酸氨氯地平片，也需要引起注意。徹底清潔槳葉對(duì)于防止藥物或介質(zhì)的污染非常重要。

籃子需要小心檢查。使用時(shí)，它們可能會(huì)磨損、變形或扭曲。篩網(wǎng)尺寸可能會(huì)隨著時(shí)間的推移而變化，尤其是在酸性介質(zhì)中使用時(shí)。這些變化可能會(huì)影響溶解結(jié)果。如果使用后不立即徹底清洗，籃子特別容易積聚明膠或輔料，造成污染。

溶出杯如果沒(méi)有清洗干凈，可能會(huì)造成污染。重復(fù)清洗后刮傷和腐蝕的容器應(yīng)丟棄。在溶解過(guò)程中，蓋子始終需要到位，以防止蒸發(fā)。湯麗娟湯老師有篇文獻(xiàn)《Introduction of dissolution error as a result ofdifferent openings in vessel covers》詳細(xì)講述了蒸發(fā)量對(duì)溶出度的影響，有興趣可以閱讀。

儀器的震動(dòng)也要引起注意。平時(shí)應(yīng)注意儀器的維護(hù)和保養(yǎng)，以確保平穩(wěn)運(yùn)行。外部振動(dòng)源可能包括平臺(tái)上的其他設(shè)備，如振動(dòng)篩、離心機(jī)或超聲儀等。還應(yīng)避免沉重的腳步聲和關(guān)門(mén)聲。

在溶出度測(cè)試過(guò)程中傾向于漂浮或移動(dòng)的劑型會(huì)產(chǎn)生可變性和結(jié)果偏差的問(wèn)題。沉降籃通常用于在溶出度測(cè)試中固定這種劑型。溶出度測(cè)試中使用的沉降籃有很多種（見(jiàn)下圖），有些是自制的，有些是市售的，沉降籃的類(lèi)型會(huì)影響結(jié)果。USP中規(guī)定了很多中的沉降籃，各個(gè)儀器公司也有市售的沉降籃。在需要沉降籃的情況下，必須在方法和任何法規(guī)提交對(duì)沉降籃的詳細(xì)說(shuō)明和使用沉降籃的原因。當(dāng)比較不同的沉降籃(或沉降籃與無(wú)沉降籃)時(shí)，測(cè)試必須與每個(gè)沉降籃同時(shí)進(jìn)行。每種沉降籃類(lèi)型必須根據(jù)其在不抑制藥物釋放的情況下保持容器底部劑量的能力進(jìn)行評(píng)估。沉降籃會(huì)顯著影響藥物的溶出度，不同沉降籃類(lèi)型(或無(wú)沉降籃)的比較應(yīng)在溶出方法確定前期進(jìn)行驗(yàn)證。沉降籃的設(shè)計(jì)必須在方法中明確說(shuō)明。轉(zhuǎn)移方法時(shí)，沉降籃必須在任何后續(xù)測(cè)試設(shè)施中盡可能緊密地復(fù)制。

沉降籃的使用應(yīng)需要符合一些要求：

1. 沉降籃不應(yīng)抑制或影響溶解。膠囊或者片劑應(yīng)該可以自由溶解，劑量的任何部分都不應(yīng)該截留在沉降片之下或之內(nèi)。

2. 劑型應(yīng)該總是落在中心溶解容器的底部。

3. 結(jié)果應(yīng)該是可重現(xiàn)的；可變性不應(yīng)該由沉降籃的形狀引入。

4. 形狀應(yīng)該易于定義和制作，最好是常見(jiàn)的。

“Effects of  Sinker Shapes onDissolution Profiles”這篇文獻(xiàn)中提到了不同沉降籃的影響，通過(guò)下面數(shù)據(jù)可以看到沉降籃的影響。

由于溶出度試驗(yàn)貫穿于整個(gè)藥品研發(fā)的始終，因此溶出方法的穩(wěn)健性也至關(guān)重要。確定溶出方法的關(guān)鍵測(cè)試參數(shù)通常通過(guò)對(duì)每個(gè)溶出度參數(shù)進(jìn)行細(xì)微變化來(lái)評(píng)估。數(shù)據(jù)評(píng)估將建立測(cè)試參數(shù)所需的必要控制，以保持方法的一致性。這將有助于任何方法的轉(zhuǎn)移，并最大限度地減少故障排除的需要。穩(wěn)健性研究應(yīng)包括評(píng)估不同介質(zhì)pH、轉(zhuǎn)速、沉降籃(如果適用)、介質(zhì)脫氣、介質(zhì)表面活性劑水平、介質(zhì)溫度和過(guò)濾器的影響等等。

對(duì)于藥物來(lái)說(shuō)介質(zhì)pH、介質(zhì)種類(lèi)選擇、介質(zhì)表面活性劑水平是需要重點(diǎn)考察的目標(biāo)。藥事縱橫在《看明白新藥如何開(kāi)發(fā)溶出方法，才能做好仿制藥》文章中詳細(xì)介紹了如何選擇合適的pH值、表面活性劑濃度、轉(zhuǎn)速來(lái)確保方法的穩(wěn)健性。另外一篇《依托考昔為例：適度區(qū)分力的溶出方法開(kāi)發(fā)與驗(yàn)證》同樣是不可多得的確認(rèn)溶出方法穩(wěn)健性的好文章，值得多學(xué)習(xí)，應(yīng)用在實(shí)際工作中。

介質(zhì)中溶解的氣體可能會(huì)影響溶出度。粘附在片劑表面或籃篩上的氣泡會(huì)阻礙介質(zhì)接觸，并會(huì)減慢溶解速度。顆粒會(huì)附著在容器或軸的玻璃表面的氣泡上。

介質(zhì)的溫度也需要注意，有的儀器每個(gè)溶出杯都能顯示杯液溫度。如果沒(méi)有在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前就需要對(duì)杯液溫度進(jìn)行核查。

如果溶出介質(zhì)中含有表面活性劑，那么在使用中需要注意。首先表面活性劑不同廠(chǎng)家不同等級(jí)之間質(zhì)量差距很大，因此在方法確定之前需要進(jìn)行廠(chǎng)家和等級(jí)的篩選以及對(duì)比。表面活性劑的發(fā)泡特性也很難有效地使介質(zhì)脫氣。將籃子放入表面活性劑介質(zhì)時(shí)，表面氣泡可能會(huì)粘附在籃子底部，并顯著降低溶解速率。表面活性劑會(huì)帶來(lái)嚴(yán)重的清潔問(wèn)題，尤其是當(dāng)濃度很高時(shí)，例如超過(guò)0.5%，在自動(dòng)取樣時(shí)取樣管線(xiàn)中，表面活性劑如十二烷基硫酸鈉可能需要多次沖洗才能確保完全去除。

不同表面活性劑帶來(lái)問(wèn)題也不一樣，常用的十二烷基硫酸鈉，質(zhì)量易于控制，與鉀鹽聯(lián)用容易析出，在低溫下同樣易析出。吐溫80批間質(zhì)量差異大，操作沒(méi)有十二烷基硫酸鈉方便等。通過(guò)對(duì)參比制劑剖析選擇合適的表面活性劑。

介質(zhì)的離子濃度同樣需要引起注意，不同國(guó)家的介質(zhì)配置方法不同，離子濃度也不同，如日本藥典和中國(guó)藥典的pH6.8緩沖鹽。《Assessing the influence of media composition andionic strength on drug release from commercial immediate-release andenteric-coated aspirin tablets》（研如玉組織翻譯的評(píng)估溶出介質(zhì)的組成和離子強(qiáng)度對(duì)商業(yè)化生產(chǎn)的阿司匹林速釋制劑和腸溶片釋放的影響）一文中詳細(xì)介紹了不同離子強(qiáng)度對(duì)藥物釋放的影響。在實(shí)際工作中可能需要考察不同離子強(qiáng)度的影響。

準(zhǔn)確的溶解發(fā)生在產(chǎn)品溶解時(shí)，不會(huì)受到溶解障礙的干擾，也不會(huì)受到任何來(lái)源的容器流體動(dòng)力學(xué)干擾。因此，對(duì)測(cè)試的近距離視覺(jué)觀(guān)察非常重要。顆粒分解模式必須顯示自由分散的顆粒。異常溶解通常涉及以下一種或多種觀(guān)察結(jié)果：片劑的漂浮塊、旋轉(zhuǎn)、錐形、堆積、膠粘、膨脹、封蓋、“蛤殼”侵蝕、偏心定位、粘附、顆粒粘附在裝置或杯壁上、囊狀物、膨脹/橡膠塊或透明薄膜、明膠膠囊老化引起溶出度變慢等，還有可能為投片過(guò)程中 “位置相關(guān)的”。例如，如果片劑偏離中心，由于剪切力的作用，溶解速率可能會(huì)更高。也有文獻(xiàn)報(bào)道不同的投片位置造成溶出度差異。薄膜包衣片劑可能是粘性的，并且會(huì)引起與片劑位置相關(guān)的問(wèn)題。孫亞洲孫老師在各中公開(kāi)場(chǎng)合多次提到觀(guān)察現(xiàn)象的重要性，甚至于在溶出結(jié)束后的溶出顆粒的手感等。在孫老師的“API、制劑特性與溶出度、BE的相關(guān)性及案例分析”中詳細(xì)描述了觀(guān)察的一些現(xiàn)象，可以在實(shí)際工作中聯(lián)系起來(lái)。

隨著行業(yè)對(duì)溶出度的認(rèn)知的提高，溶出度異常的一些現(xiàn)象得到了廣泛的認(rèn)知，如堆積、漂浮、投片位置影響等，也有了一些手段來(lái)預(yù)防或解決。但溶出現(xiàn)象的觀(guān)察是貫穿于整個(gè)藥品研發(fā)甚至于藥品生命周期管理過(guò)程中。藥品研發(fā)過(guò)程中前期需要觀(guān)察參比制劑的溶出現(xiàn)象，了解溶出行為，甚至于需要根據(jù)溶出現(xiàn)象來(lái)調(diào)節(jié)溶出的方法，防止出現(xiàn)異常數(shù)據(jù)和批間誤差。之后的仿制藥開(kāi)發(fā)中需要仔細(xì)觀(guān)察仿制藥的溶出現(xiàn)象，與參比制劑進(jìn)行對(duì)比，與參比制劑的溶出現(xiàn)象一致。后期穩(wěn)定性試驗(yàn)中如膠囊劑型，明膠膠囊老化引起溶出度變慢是需要重點(diǎn)觀(guān)察的。藥品上市后穩(wěn)定性試驗(yàn)或每一次的變更申請(qǐng)?jiān)囼?yàn)都需要進(jìn)行觀(guān)察。

取 樣

取樣目前有自動(dòng)取樣和手動(dòng)取樣兩種。自動(dòng)取樣省事省力，但是有時(shí)會(huì)帶來(lái)比手動(dòng)取樣更多的問(wèn)題。由于各種原因，采樣線(xiàn)經(jīng)常是錯(cuò)誤的來(lái)源：長(zhǎng)度不相等、卷曲、磨損超出極限、取樣管線(xiàn)的部分或完全堵塞、斷開(kāi)連接、殘留、混淆或交叉連接以及清潔不充分。泵管可能因經(jīng)常使用或沖洗而磨損，可能需要更換。不同溶廠(chǎng)家溶出儀自動(dòng)取樣方式不一樣，有注射泵和活塞泵兩種形式。理論上注射泵較好，每個(gè)取樣點(diǎn)后排空管路，即管路殘留為0，取樣時(shí)間較短。活塞泵無(wú)法完全排空管路，需要大量的介質(zhì)來(lái)潤(rùn)洗管路，取樣提前時(shí)間早。在線(xiàn)過(guò)濾方式上也有差異，有濾膜過(guò)濾和濾頭過(guò)濾。建議在使用自動(dòng)取樣系統(tǒng)之前確定合適的方式。

手動(dòng)取樣技術(shù)會(huì)因不同分析員之間人手的力量和大小的差異而引入誤差。通過(guò)過(guò)濾器的牽引速度可能變化很大。

過(guò) 濾

過(guò)濾是溶出取樣過(guò)程中不可忽視的步驟。必須對(duì)過(guò)濾步驟進(jìn)行評(píng)估，以確定適當(dāng)量的溶液是否已經(jīng)通過(guò)過(guò)濾器，從而最終過(guò)濾的溶液不會(huì)由于通過(guò)過(guò)濾器吸附的藥物損失而產(chǎn)生偏差。過(guò)濾是通常是防止未溶解顆粒進(jìn)入分析樣品并進(jìn)一步溶解。應(yīng)注意過(guò)濾器孔徑不大于藥物粒度，這對(duì)于微粉化或納米顆粒尤其重要。過(guò)濾還可以去除可能會(huì)導(dǎo)致高背景不溶性輔料。過(guò)濾器的驗(yàn)證通常包括制備合適的標(biāo)準(zhǔn)溶液(推薦最低和最高濃度)和完全溶解的樣品溶液。對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)溶液，將過(guò)濾溶液的結(jié)果(應(yīng)事先確定適當(dāng)?shù)膹U棄量)與未過(guò)濾標(biāo)準(zhǔn)溶液的結(jié)果進(jìn)行比較。對(duì)于過(guò)濾后的樣品溶液，應(yīng)將結(jié)果與完全溶解和離心的樣品溶液進(jìn)行比較。標(biāo)準(zhǔn)和樣品過(guò)濾效率的可接受范圍通常在未過(guò)濾標(biāo)準(zhǔn)溶液和未過(guò)濾但離心的樣品溶液的98%-102%之間。如果過(guò)濾步驟有干擾，需對(duì)不同廠(chǎng)家不同型號(hào)的過(guò)濾器、不同處理方式進(jìn)行篩選。

仿制藥研究過(guò)程中，除了標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液需要考察，參比制劑的濾膜影響同樣需要引起注意。

自動(dòng)取樣溶出儀的濾膜吸附由于其管路問(wèn)題可能比手動(dòng)取樣更加復(fù)雜，管路對(duì)樣品可能會(huì)有吸附和干擾。已有文章（自動(dòng)溶出儀對(duì)硝苯地平緩釋片(I)釋放度測(cè)定的干擾）報(bào)道自動(dòng)取樣器對(duì)溶出度的結(jié)果有干擾。因此對(duì)于自動(dòng)取樣溶出儀還需要增加管路吸附的干擾，與手動(dòng)取樣進(jìn)行對(duì)比。

由于溶出度測(cè)試中通常會(huì)產(chǎn)生大量樣品，因此分析系統(tǒng)應(yīng)該相對(duì)快速。用于溶出度測(cè)試的最常見(jiàn)的分析儀器是紫外可見(jiàn)分光光度法和帶有紫外檢測(cè)的高效液相色譜法。無(wú)論使用哪種方式，檢測(cè)方法都需要進(jìn)行驗(yàn)證。溶出方法學(xué)驗(yàn)證相信各個(gè)公司都有自己的方式，因此在此文中就只簡(jiǎn)單的提出幾個(gè)重要的容易忽視的地方。

通常線(xiàn)性濃度需要包含檢出溶出度的最小量至最高預(yù)期濃度的120%的濃度范圍。劑型的線(xiàn)性測(cè)試應(yīng)涵蓋產(chǎn)品的整個(gè)規(guī)格范圍。如有必要，分析前所有樣品應(yīng)加熱至37℃(或規(guī)定的溶解溫度)；如果樣品接近漏槽條件，這一點(diǎn)尤其重要。

線(xiàn)性的驗(yàn)證雖然比較簡(jiǎn)單，但是有些情況不能忽視。對(duì)于較大規(guī)格或者特殊藥品而言，在檢出溶出度的最小量至最高預(yù)期濃度的120%的濃度范圍不一定成線(xiàn)性，可以用分段線(xiàn)性來(lái)解決。對(duì)于某些藥品外標(biāo)一點(diǎn)法可能不適用，則需要采用標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)來(lái)進(jìn)行每次溶出度計(jì)算。

準(zhǔn) 確 度

一般來(lái)說(shuō)，準(zhǔn)確性是通過(guò)制備包含藥物和劑型中存在的其他成分(例如輔料、包衣材料等)的多個(gè)樣品來(lái)確定的。膠囊殼、涂料混合物、油墨和沉降籃也應(yīng)在適當(dāng)?shù)牡胤教砑印Ｈ绻?guī)格較大，藥物在輔料之前或之后加入介質(zhì)的順序可能比較重要。例如，一些藥物需要在沒(méi)有輔料的介質(zhì)中適當(dāng)潤(rùn)濕，反之亦然，其中輔料需要在引入藥物之前首先混合。如果規(guī)格較小或者藥物靜電較大，使得精確稱(chēng)量變得困難時(shí)，可以采取溶液形式。如有必要，分析前所有樣品應(yīng)加熱至37℃(或規(guī)定的溶解溫度)。

對(duì)于某些難溶性藥品，在介質(zhì)中溶解較低，對(duì)照品溶液配制需要用適量的有機(jī)溶劑助溶，但是有機(jī)溶劑的比例不得過(guò)5.0%。

溶 液 穩(wěn) 定 性

由于溶出度測(cè)試中通常會(huì)產(chǎn)生大量樣品，因此溶液穩(wěn)定性是必需進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)。一般對(duì)照品溶液和供試品溶液都需要進(jìn)行考察。考察的時(shí)間盡可能的長(zhǎng)，防止在后續(xù)工作中的特殊情況。如果在介質(zhì)中藥品不穩(wěn)定，可以通過(guò)不同的方式來(lái)解決。如可以考慮樣品控溫、加入穩(wěn)定劑或者同時(shí)與降解產(chǎn)物檢測(cè)等方式。有些藥品在不同介質(zhì)下的穩(wěn)定性不一樣，可以考慮在不穩(wěn)定的介質(zhì)中加入pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)至穩(wěn)定的pH值等。通過(guò)對(duì)藥物不穩(wěn)定方式進(jìn)行分析選擇一種省力省時(shí)的方式是至關(guān)重要的。

在許多實(shí)驗(yàn)室中，不同的產(chǎn)品在同一設(shè)備上進(jìn)行測(cè)試，清潔是一個(gè)關(guān)鍵問(wèn)題，如果清洗不充分，可能會(huì)導(dǎo)致檢查失敗和錯(cuò)誤的結(jié)果。使用富科思FADT-1200RC溶出儀時(shí)，溶出儀杯蓋是整體的，清洗溶出儀杯蓋就是一個(gè)容易忽視的問(wèn)題。而在自動(dòng)取樣的溶出儀中，自動(dòng)取樣管線(xiàn)的清洗也是重點(diǎn)考慮對(duì)象。

溶出曲線(xiàn)測(cè)試在目前的藥品研發(fā)過(guò)程中起著舉足輕重的作用。溶出曲線(xiàn)的數(shù)據(jù)需要準(zhǔn)確無(wú)誤才能給處方和工藝準(zhǔn)確的判斷。因此在進(jìn)行溶出實(shí)驗(yàn)時(shí)需要確認(rèn)關(guān)鍵參數(shù)，在準(zhǔn)確的“框架”中進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以免給出錯(cuò)誤的判斷。

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